Name: subretinal injection of gene therapy vectors and stem cells in the perinatal mouse eye
Uploaded: 2012-11-25T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye at JoVE.com

Research to Prevent Blindness, l&#39;assistance expérimentale de Takayuki Nagasaki; Cette recherche est conforme à la Déclaration ARVO pour l&#39;utilisation des animaux en ophtalmologie et de la recherche visuelle. KJW est financée par des subventions du NIH 5T32EY013933 et 5T32DK007647-20. VBM est soutenu par NIH K08EY020530.

1. Dispositifs pour assembler l&#39;injection sous-rétinienne <ol><li> Acheter ou fabriquer une aiguille 100 um de diamètre à partir d&#39;un tube capillaire en verre. Cela peut être fait manuellement à l&#39;aide d&#39;un extracteur de Sutter P-97 pipette ou tout autre équipement similaire. L&#39;extrémité du tube capillaire est chauffé et tiré jusqu&#39;à ce qu&#39;il atteigne le diamètre souhaité (100 um). Une aiguille de diamètre plus petit peut être utilisé pour les vecteurs de thérapie génique,...

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	<li>Abe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+the+retina+using+pigment+epithelial+cell+transplantation.">Regeneration of the retina using pigment epithelial cell transplantation.</a> Nihon Ganka Gakkai Zasshi. 106, 778-803 (2002).</li><li>Jacobson, S. G., Cideciyan, A. V., Ratnakaram, R., Heon, E., Schwartz, S. B., Roman, A. J., Peden, M. C., Aleman, T. S., Boye, S. L., Sumaroka, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+for+Leber+congenital+amaurosis+caused+by+RPE65+mutations:+safety+and+efficacy+in+15+children+and+adults+followed+up+to+3+years.">Gene therapy for Leber congenital amaurosis caused by RPE65 mutations: safety and efficacy in 15 children and adults followed up to 3 years.</a> Arch. Ophthalmol. 130, 9-24 (2011).</li><li>Schwartz, S. D., Hubschman, J. P., Heilwell, G., Franco-Cardenas, V., Pan, C. K., Ostrick, R. M., Mickunas, E., Gay, R., Klimanskaya, I., Lanza, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+trials+for+macular+degeneration:+a+preliminary+report.">Embryonic stem cell trials for macular degeneration: a preliminary report.</a> Lancet. 379, 713-720 (2012).</li><li>Wang, N. K., Tosi, J., Kasanuki, J. M., Chou, C. L., Kong, J., Parmalee, N., Wert, K. J., Allikmets, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+reprogrammed+embryonic+stem+cells+improves+visual+function+in+a+mouse+model+for+retinitis+pigmentosa.">Transplantation of reprogrammed embryonic stem cells improves visual function in a mouse model for retinitis pigmentosa.</a> Transplantation. 89, 911-919 (2010).</li><li>Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+models+of+retinal+degeneration+and+targets+for+gene+therapy.">Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy.</a> Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).</li><li>Tosi, J., Sancho-Pelluz, J., Davis, R. J., Hsu, C. W., Wolpert, K. V., Sengillo, J. D., Lin, C. S., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentivirus-mediated+expression+of+cDNA+and+shRNA+slows+degeneration+in+retinitis+pigmentosa.">Lentivirus-mediated expression of cDNA and shRNA slows degeneration in retinitis pigmentosa.</a> Exp. Biol. Med. 236, 1211-1217 (2011).</li><li>Tucker, B. A., Park, I. H., Qi, S. D., Klassen, H. J., Jiang, C., Yao, J., Redenti, S., Daley, G. Q., Young, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+adult+mouse+iPS+cell-derived+photoreceptor+precursors+restores+retinal+structure+and+function+in+degenerative+mice.">Transplantation of adult mouse iPS cell-derived photoreceptor precursors restores retinal structure and function in degenerative mice.</a> PLoS One. 6, e189992 (2011).</li><li>Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A high-throughput Mouse Eye Phenomics System. , (2010).</li><li>Chang, B., Hawes, N. L., Hurd, R. E., Davisson, M. T., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+degeneration+mutants+in+the+mouse.">Retinal degeneration mutants in the mouse.</a> Vision Res. 42, 517-525 (2002).</li><li>Hawes, N. L., Smith, R. S., Chang, B., Davisson, M., Heckenlively, J. R., John, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+fundus+photography+and+angiography:+a+catalogue+of+normal+and+mutant+phenotypes.">Mouse fundus photography and angiography: a catalogue of normal and mutant phenotypes.</a> Mol. Vis. 5, 22 (1999).</li><li>Won, J., Shi, L. Y., Hicks, W., Wang, J., Hurd, R., Naggert, J. K., Chang, B., Nishina, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+resources+for+vision+research.">Mouse model resources for vision research.</a> J. Ophthalmol. 2011, 391384 (2011).</li></ol>

Cette technique vidéo fournit des instructions sur l&#39;achèvement de la procédure chirurgicale injection sous-rétinienne avec succès, et veiller à ce que le vecteur de thérapie génique ou les cellules souches sont placés dans l&#39;emplacement nécessaire pour traiter efficacement la maladie ophtalmique. Cette technique permet le ciblage des cellules de la rétine comme l&#39;EPR ou photorécepteurs, car il place les vecteurs de thérapie génique ou de cellules souches dérivées de tissus dans le voisinage ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom </td><td> Entreprise </td><td> Catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> 0,8 à 1,10 x 100 mm Tube capillaire (verre) </td><td> Kimble Glass, Inc </td><td> 34502 99 </td><td></td></tr><tr><td> Flaming / Brown Micropipette Puller </td><td> Instrument Sutter </td><td> P-97 </td><td> Narishige microforge peut être utilisé à la place. Catalogue MF-900 </td></tr><tr><td> Sigmacote </td><td> Sigma Aldrich </td><td> SL2-25ML </td><td> Silicone </td></tr><tr><td> Phosphate Buffered Saline Dubecco de chlorure de calcium et chlorure de magnésium </td><td> Gibco Invitrogen- </td><td> 14040-133 </td><td></td></tr><tr><td> Safety-Lok 25 3/4G x 12 &quot;; de prélèvement sanguin </td><td> BD Vacutainer </td><td> 367298 </td><td></td></tr><tr><td> 1 ml Sous-Q 265/8G Slip-Tip Syringe </td><td> Becton-Dickinson </td><td> 309597 </td><td></td></tr><tr><td> 0,5 à 10 ul Finnpipette II-Volume réglable Pipette </td><td> Fisherbrand </td><td> 21-377-815 </td><td></td></tr><tr><td> 1-200 ul Conseils naturelles biseautés </td><td> USA Scientific, Inc </td><td> 1111-1700 </td><td></td></tr><tr><td> Discovery.V8 Microscope stéréo </td><td> Zeiss </td><td> MC1500 </td><td></td></tr><tr><td> 60 mm x 15 mm Style de traité vaisselle culture cellulaire Polystyrène </td><td> Corning Incorporated </td><td> 430166 </td><td></td></tr><tr><td> Ciseaux Vannas droites </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E3383 S </td><td></td></tr><tr><td> Curved Forceps Dressing avec des dentelures délicates </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1408 </td><td></td></tr><tr><td> 15 Couteau microchirurgie Degré </td><td> Wilssur ophtalmique Corp </td><td> 091204 </td><td></td></tr><tr><td> La kétamine </td><td> Ketaset III </td><td> NADA # 45-290 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> Laboratoires Lloyd </td><td> NADA # 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> La bupivacaïne (Marcaïne) </td><td> AstraZeneca </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> La buprénorphine </td><td> Sigma Aldrich </td><td> B9275 </td><td></td></tr></tbody></table>

subretinal injection of gene therapy vectors and stem cells in the perinatal mouse eye

La perte de la vue affecte environ 3,4 millions de personnes aux États-Unis et devrait augmenter dans les années à venir. 1 Récemment, la thérapie génique et les transplantations de cellules souches sont devenus les principaux outils thérapeutiques pour le traitement de la cécité due à des maladies dégénératives rétiniennes. Plusieurs formes de transplantation autologue pour la dégénérescence maculaire liée à l&#39;âge (DMLA), comme l&#39;iris pigment transplantation de cellules épithéliales, ont généré des résultats encourageants, et les essais cliniques humains ont commencé pour d&#39;autres formes de thérapies cellulaires de gènes et la tige. 2 Il s&#39;agit de remplacement de gène RPE65 chez des patients souffrant amaurose congénitale de Leber et une greffe de cellules RPE en utilisant de l&#39;homme souches embryonnaires (ES) cellules dans la maladie de Stargardt. 3-4 Maintenant qu&#39;il ya des vecteurs de thérapie génique et les cellules souches disponibles pour le traitement de patients atteints de maladies rétiniennes, il est important de vérifier ces thérapies potentielles dans les modèles animaux avant d&#39;appliquertion entre eux dans les études humaines. La souris est devenue un modèle important scientifique pour tester l&#39;efficacité thérapeutique de vecteurs de thérapie génique et de la transplantation de cellules souches dans l&#39;œil. 5-8 Dans cet article, vidéo, nous présentons une technique pour injecter des vecteurs de thérapie génique et les cellules souches dans l&#39;espace sous-rétinien de l&#39;œil de la souris tout en minimisant les dommages aux tissus environnants.

Un dessin de l&#39;oeil de la souris est démontré à de grandes structures étiquetées à titre de référence, avec des flèches montrant les emplacements pour les procédures d&#39;injection intravitréenne et sous-rétinien tant chirurgicales (pointes de flèches, figure 1). Vecteurs de thérapie génique, tels que le vecteur lentiviral lacZ (figure 2), peut être injecté à l&#39;aide de ces endroits. En outre, les cellules souches, comme les cellules souches embryonnai...

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Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

Cette technique chirurgicale illustre l&#39;injection de vecteurs de thérapie génique et les cellules souches dans l&#39;espace sous-rétinien de l&#39;oeil de la souris.

Injection sous-rétinien de vecteurs de thérapie génique et les cellules souches dans l&#39;œil de la souris

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

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Medicine

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