Name: subretinal injection of gene therapy vectors and stem cells in the perinatal mouse eye
Uploaded: 2012-11-25T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye at JoVE.com

Forskning för att förhindra blindhet, Experimentell hjälp från Takayuki Nagasaki, Denna forskning uppfyller ARVO uttalande för användning av djur i Ophthalmic och Visual Research. KJW stöds av NIH bidrag 5T32EY013933 och 5T32DK007647-20. VBM stöds av NIH bidrag K08EY020530.

1. Montera Anordningar för subretinal injektion <ol><li> Köpa eller göra en 100 nål xm diameter från en glaskapillärrör. Detta kan göras manuellt genom att använda en Sutter P-97 pipett avdragare eller annan liknande utrustning. Änden av kapillärröret kommer att värmas och dras tills den når den önskade diametern (100 | im). En mindre diameter hos nål kan användas för genterapivektorer, men detta är den rekommenderade diametern för cellinjektion utan skada på cellerna eller ögat. Jämfört med st...

<ol>
	<li>Abe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+the+retina+using+pigment+epithelial+cell+transplantation.">Regeneration of the retina using pigment epithelial cell transplantation.</a> Nihon Ganka Gakkai Zasshi. 106, 778-803 (2002).</li><li>Jacobson, S. G., Cideciyan, A. V., Ratnakaram, R., Heon, E., Schwartz, S. B., Roman, A. J., Peden, M. C., Aleman, T. S., Boye, S. L., Sumaroka, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+for+Leber+congenital+amaurosis+caused+by+RPE65+mutations:+safety+and+efficacy+in+15+children+and+adults+followed+up+to+3+years.">Gene therapy for Leber congenital amaurosis caused by RPE65 mutations: safety and efficacy in 15 children and adults followed up to 3 years.</a> Arch. Ophthalmol. 130, 9-24 (2011).</li><li>Schwartz, S. D., Hubschman, J. P., Heilwell, G., Franco-Cardenas, V., Pan, C. K., Ostrick, R. M., Mickunas, E., Gay, R., Klimanskaya, I., Lanza, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+trials+for+macular+degeneration:+a+preliminary+report.">Embryonic stem cell trials for macular degeneration: a preliminary report.</a> Lancet. 379, 713-720 (2012).</li><li>Wang, N. K., Tosi, J., Kasanuki, J. M., Chou, C. L., Kong, J., Parmalee, N., Wert, K. J., Allikmets, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+reprogrammed+embryonic+stem+cells+improves+visual+function+in+a+mouse+model+for+retinitis+pigmentosa.">Transplantation of reprogrammed embryonic stem cells improves visual function in a mouse model for retinitis pigmentosa.</a> Transplantation. 89, 911-919 (2010).</li><li>Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+models+of+retinal+degeneration+and+targets+for+gene+therapy.">Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy.</a> Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).</li><li>Tosi, J., Sancho-Pelluz, J., Davis, R. J., Hsu, C. W., Wolpert, K. V., Sengillo, J. D., Lin, C. S., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentivirus-mediated+expression+of+cDNA+and+shRNA+slows+degeneration+in+retinitis+pigmentosa.">Lentivirus-mediated expression of cDNA and shRNA slows degeneration in retinitis pigmentosa.</a> Exp. Biol. Med. 236, 1211-1217 (2011).</li><li>Tucker, B. A., Park, I. H., Qi, S. D., Klassen, H. J., Jiang, C., Yao, J., Redenti, S., Daley, G. Q., Young, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+adult+mouse+iPS+cell-derived+photoreceptor+precursors+restores+retinal+structure+and+function+in+degenerative+mice.">Transplantation of adult mouse iPS cell-derived photoreceptor precursors restores retinal structure and function in degenerative mice.</a> PLoS One. 6, e189992 (2011).</li><li>Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A high-throughput Mouse Eye Phenomics System. , (2010).</li><li>Chang, B., Hawes, N. L., Hurd, R. E., Davisson, M. T., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+degeneration+mutants+in+the+mouse.">Retinal degeneration mutants in the mouse.</a> Vision Res. 42, 517-525 (2002).</li><li>Hawes, N. L., Smith, R. S., Chang, B., Davisson, M., Heckenlively, J. R., John, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+fundus+photography+and+angiography:+a+catalogue+of+normal+and+mutant+phenotypes.">Mouse fundus photography and angiography: a catalogue of normal and mutant phenotypes.</a> Mol. Vis. 5, 22 (1999).</li><li>Won, J., Shi, L. Y., Hicks, W., Wang, J., Hurd, R., Naggert, J. K., Chang, B., Nishina, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+resources+for+vision+research.">Mouse model resources for vision research.</a> J. Ophthalmol. 2011, 391384 (2011).</li></ol>

Denna video teknik ger anvisningar om hur man fyller det subretinala injektionen kirurgiska ingrepp framgångsrikt, och se till att genterapi vektor eller stamceller placeras på den plats som krävs för att effektivt behandla oftalmiska sjukdomen. Denna teknik möjliggör inriktning av retinala celler såsom RPE eller fotoreceptorer, eftersom det ger genterapivektorer eller stamceller härledda vävnader i närheten av dessa celler. Tidigare metoder som intravitreala injektioner, där vätskan är placerad inuti i gla...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namn </td><td> Företag </td><td> Katalog </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> 0,8-1,10 x 100 mm kapillärrör (glas) </td><td> Kimble Glass, Inc. </td><td> 34502 99 </td><td></td></tr><tr><td> Flaming / Brown Mikropipett Puller </td><td> Sutter Instrument </td><td> P-97 </td><td> Narishige microforge kan användas i stället. Katalog # MF-900 </td></tr><tr><td> Sigmacote </td><td> Sigma Aldrich </td><td> SL2-25ML </td><td> Silikon </td></tr><tr><td> Dubecco s fosfatbuffrade saltlösning med kalciumklorid och magnesiumklorid </td><td> Gibco-Invitrogen </td><td> 14040-133 </td><td></td></tr><tr><td> Säkerhets-Lok 25 3/4G x 12 &quot;, blodinsamling Set </td><td> BD Vacutainer </td><td> 367.298 </td><td></td></tr><tr><td> 1 ml Sub-Q 265/8G Slip-Tip Spruta </td><td> Becton-Dickinson </td><td> 309.597 </td><td></td></tr><tr><td> 0,5-10 ul Finnpipette II Justerbar-Volume pipett </td><td> Fisherbrand </td><td> 21-377-815 </td><td></td></tr><tr><td> 1-200 pl Natural Fasade tips </td><td> USA Scientific, Inc. </td><td> 1111-1700 </td><td></td></tr><tr><td> Discovery.V8 stereo mikroskop </td><td> Zeiss </td><td> MC1500 </td><td></td></tr><tr><td> 60 mm x 15 mm Style behandlat polystyren Cell Culture Dish </td><td> Corning Incorporated </td><td> 430.166 </td><td></td></tr><tr><td> Vännäs Raka Sax </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E3383 S </td><td></td></tr><tr><td> Böjda Dressing Tång med räfflor Delicate </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1408 </td><td></td></tr><tr><td> 15 Degree Mikrokirurgi Knife </td><td> Wilspå Oftalmisk Corp </td><td> 091.204 </td><td></td></tr><tr><td> Ketamin </td><td> Ketaset III </td><td> NADA # 45-290 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazin </td><td> Lloyd Laboratories </td><td> NADA # 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> Bupivakain (Marcain) </td><td> AstraZeneca </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Buprenorfin </td><td> Sigma Aldrich </td><td> B9275 </td><td></td></tr></tbody></table>

subretinal injection of gene therapy vectors and stem cells in the perinatal mouse eye

Förlusten av synen drabbar cirka 3,4 miljoner personer i USA och förväntas öka under de kommande åren. 1 Nyligen har genterapi och stamceller transplantationer cell blir viktiga terapeutiska verktyg för att behandla blindhet till följd av retinala degenerativa sjukdomar. Flera former av autolog transplantation för åldersrelaterad makuladegeneration (AMD), som iris pigment epitelial celltransplantation, har genererat uppmuntrande resultat, och kliniska studier har börjat för andra former av gen-och stamcellsterapi. 2 Dessa inkluderar RPE65 gen utbyte hos patienter med Leber: s medfödda amauros och RPE celltransplantation med humana embryonala stamceller (ES-celler) i Stargardts sjukdom. 3-4 Nu när det finns genterapi vektorer och stamceller finns för behandling av patienter med retinal sjukdomar är det viktigt att kontrollera dessa potentiella behandlingar i djurmodeller tillämpas föreIng dem i humanstudier. Musen har blivit en viktig vetenskaplig modell för att testa den terapeutiska effekten av vektorer genterapi och stamcellstransplantation i ögat. 5-8 I denna video artikeln presenterar vi en teknik för att injicera genterapivektorer eller stamceller i det subretinalområdet av musen ögat samtidigt minimera skador på omgivande vävnad.

En ritning av musen ögat visas med stora strukturer märkta för referens, med pilar som visar platserna för både intravitreala och subretinal injicering kirurgiska ingrepp (pilspetsar, figur 1). Genterapi vektorer, såsom lacZ lentivirusvektorn (figur 2), kan injiceras med hjälp av dessa platser. Dessutom kan stamceller, såsom mus embryonala stamceller (figur 3), också transplanteras på dessa ställen i musens ögat. 1 pl av...

Watch this Scientific Journal Video about Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye at JoVE.com

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

Denna kirurgiska tekniken illustrerar injektion av genterapivektorer och stamceller i det subretinala utrymmet i musens ögat.

Subretinal Injektion av genterapivektorer och stamceller i musen ögat

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

Research

JoVE Journal

Medicine

High-Efficiency Transduction of Liver Cancer Cells by Recombinant Adeno-Associated Virus Serotype 3 Vectors

Högeffektiva Transduction Celler Levercancer med rekombinant Adeno-associerad serotyp 3 Vektorer

Recombinant vectors based on a non-pathogenic human parvovirus, the adeno-associated virus 2 (AAV2) have been developed, and are currently in use in a ...

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Fastställande och spridning av mänskliga Retinoblastom Tumörer i Immune deficienta möss

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Production and Detection of Reactive Oxygen Species (ROS) in Cancers

Production and Detection of Reactive Oxygen Species ROS in Cancers

Produktion och Detektering av reaktiva syreradikaler (ROS) i cancer

Reactive oxygen species include a number of molecules that damage DNA and RNA and oxidize proteins and lipids (lipid peroxydation). These reactive ...

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

A Novel kirurgisk metod för intratrakeal administrering av bioaktiva ämnen i fosterställning musmodell

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Näthinneavlossning modell i gnagare genom subretinal Injektion av natriumhyaluronat

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Subretinal Transplantation of MACS Purified Photoreceptor Precursor Cells into the Adult Mouse Retina

Subretinal transplantation av MACS renad fotoreceptor prekursor celler i den vuxna mus näthinnan

Vision impairment and blindness due to the loss of the light-sensing cells of the retina, i.e. photoreceptors, represents the main reason for disability ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

Utföra subretinal injektioner i Gnagare att leverera pigmentepitelet celler i suspension

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

Experimental Glaucoma Induced by Ocular Injection of Magnetic Microspheres

Experimentell Glaukom inducerad genom okulär Injektion av magnetiska mikrosfärer

Progress in understanding the pathophysiology, and providing novel treatments for glaucoma is dependent on good animal models of the disease. We present ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Studera bukspottkörtelcancer Stem Cell egenskaper för att utveckla nya behandlingsstrategier

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

Utveckling av en Alpha-synuklein Based råttmodell för Parkinsons sjukdom via stereotaktisk injektion av en rekombinant adeno-associerad viral vektor

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...