Name: metabolic profile analysis of zebrafish embryos
Uploaded: 2013-01-14T12:00:00
Duration: 5 min 41 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Metabolic Profile Analysis of Zebrafish Embryos at JoVE.com

Forfatterne vil gerne takke de ansatte i Deakin University zebrafisk Facility for at levere fremragende løbende dyrehold pleje. YG er understøttet af en Alfred Deakin Postdoc Research Fellowship og et Central Research Grant fra Deakin University. SLM er understøttet af en NHMRC Career Development Fellowship. ACW er understøttet af en NHMRC Aktivering Grant. Alle forfattere er støttet af Molecular &amp; Medical Research Strategisk Forskningscenter ved Deakin University.

Del 1: kemisk behandling af zebrafisk embryoner <ol><li> Saml zebrafisk embryoner efter befrugtningen. Inkuber ved 28,5 ° C i E3 medium i 100 x 15 mm petriskåle Note:. Til in situ-hybridisering eller Olie-rød-O-farvning, er 1-phenyl-2-thiourinstof (PTU) i en slutkoncentration på 0,2 mM tilsat til inhibere pigmentdannelse, 1, men er ikke nødvendig for Seahorse analyse. </li><li> For farmakologiske undersøgelser, tilsættes den krævede kemiske ved en passende slutkoncentration på at udvikle zebrafisk embryoner på omkring 26 timer efter befrugtning (HPF) med et passende vehikel-only kontrol Note:. For lysfølsomme farmakologiske inhibitorer, kan embryoner får lov til at udvikle sig i Den mørke før analyse. </li></ol> Del 2: Live Metabolic Profile Brug af Seahorse XF 24 Analyser <ol><li> Før hver kørsel, at Søhest XF 24 Analyser patron huser O 2 og H <sop&gt; + fluoroforer er kalibreret gennem en automatiseret proces udføres af analysatoren. </li><li> Fremstillinq af 24-brønds XF 24 ø-plade. Den følgende eksperimentelle sekvens anvendes: <ol><li> Da iltforbruget er følsom over for temperatursvingninger, er fire brønde anvendes til at kontrollere for eventuelle temperatursvingninger på tværs af pladen. Disse huller indeholder ikke embryoner, men er fyldt med 700 pi E3 medium (figur 2A). </li><li> De resterende 20 brønde (se punkt 2.2) er fyldt med 700 pi E3 medium og ét æg hver (figur 2B). </li><li> For hvert forsøg, er 10 embryoer behandlet med vehikel alene (kontrol) og 10 behandlet med kemisk inhibitor (behandlet). Kontrol og behandlede fostre vekslede (f.eks godt A2: kontrol embryo, godt A3: behandlet embryo: well A4: kontrol embryo, godt A5 behandlet embryo, etc). </li><li> En ø optagelsesskærmen tilsættes på toppen af. hver brønd for at sikre, at prøven forbliver i målekammeret hele assayet (figur 2B) Note: kemisk-behandlede embryoer forbliver i deres oprindelige kemisk opløsning under hele proceduren, uden behov for at udvaske den kemiske forud kører Søhest analysatoren program. </li><li> Når færdig, er pladen indlæst i Søhest Analyser og assayet startes. </li></ol></li><li> Analyse af prøver. To forskellige assays udføres rutinemæssigt. <ol><li> Basal respiration / Maximum respiration program (varighed ca. 90 min). Ændringer i basal respiration understøtte metabolisk dysfunktion, mens maksimal respiration er et mål for den samlede energiproduktion kapacitet og ændringer i denne parameter forbundet med et antal af både patologiske og fysiologiske tilstande. Den ekstra respiratorisk kapacitet eller kapacitet til systemet til yderligere at øge ATP-produktion, også beregnesfra denne test ved subtraktion af basal fra maksimal respiration. Tre gentagelser af hver mix (2 min) / wait (1 min) / måling (2 min) cyklus udføres først at etablere basal respiration. Ved afslutningen af ​​den tredje cyklus, er en slutkoncentration på 2,5 uM FCCP (mitochondrial protonophore / afkobleren) til hver brønd tillader måling af maksimal respiration. Målingen cyklus gentages 5-8 gange (figur 3). </li><li> ATP omsætning / Proton lækage program (varighed ca. 60 min). Respiration som følge af ATP omsætning udgør den vigtigste funktion af mitokondrier i form af ATP-produktion, mens respiration som følge af proton-lækage, eller afkoblede respiration, er uløseligt forbundet med andre parametre for mitokondriefunktion herunder basal respiration og reaktive oxygenformer dannes. Respiration som følge af ATP omsætning er repræsenteret ved forskellen i respiration efter tilsætning af 25 uM oligomycin (en hæmmer af ATP synthase) sammenlignet med basal respiration. Ukoblet respiration eller respiration som følge af proton lækage, bestemmes ved at beregne forskellen mellem oligomycin-medieret respiration og respiration efter tilsætning af 25 uM rotenon (et kompleks I-inhibitor). Målecyklusser gentages 8 gange efter tilsætning af hver mitochondrial inhibitor. </li></ol></li></ol> Ved afslutningen af ​​forsøgene, middelværdier af 10 kontrol-og 10 kemisk behandlede embryoer beregnes. Del 3: Olie-Red-O farvning <ol><li> Embryoer ved 50 HPF er dechorionated med fine tænger og fikseret i 4% PFA natten over ved 4 ° C. </li><li> Olie-rød-O-farvning udføres som tidligere beskrevet 2 (se figur 4). </li></ol>

<ol>
	<li>N&#252;sslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Zebrafish. , (2002).</li><li>Schlombs, K., Wagner, T., Scheel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Site-1+protease+is+required+for+cartilage+development+in+zebrafish.">Site-1 protease is required for cartilage development in zebrafish.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 14024-14029 (2003).</li><li>Ingham, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+power+of+the+zebrafish+for+disease+analysis.">The power of the zebrafish for disease analysis.</a> Hum. Mol. Genet. 18, R107-R112 (2009).</li><li>Nasevicius, A., Ekker, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+targeted+gene+'knockdown'+in+zebrafish.">Effective targeted gene 'knockdown' in zebrafish.</a> Nat. Genet. 26, 216-220 (2000).</li><li>Stackley, K. D., Beeson, C. C., Rahn, J. J., Chan, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioenergetic+profiling+of+zebrafish+embryonic+development.">Bioenergetic profiling of zebrafish embryonic development.</a> Plos One. 6, e25652 (2011).</li><li>McGee, S. L., Sadli, N., Morrison, S., Swinton, C., Suphioglu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DHA+protects+against+zinc+mediated+alterations+in+neuronal+cellular+bioenergetics.">DHA protects against zinc mediated alterations in neuronal cellular bioenergetics.</a> Cell Physiol. Biochem. 28, 157-162 (2011).</li><li>Sivitz, W. I., Yorek, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+in+diabetes:+from+molecular+mechanisms+to+functional+significance+and+therapeutic+opportunities.">Mitochondrial dysfunction in diabetes: from molecular mechanisms to functional significance and therapeutic opportunities.</a> Antioxid. Redox Signal. 12, 537-577 (2010).</li><li>Bournat, J. C., Brown, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+in+obesity.">Mitochondrial dysfunction in obesity.</a> Curr. Opin. Endocrinol. Diabetes Obes. 17, 446-452 (2010).</li><li>Ghafourifar, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+in+multiple+sclerosis.">Mitochondria in multiple sclerosis.</a> Front Biosci. 13, 3116-3126 (2008).</li><li>Winklhofer, K. F., Haass, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+in+Parkinson's+disease.">Mitochondrial dysfunction in Parkinson's disease.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1802, 29-44 (2010).</li><li>Maruszak, A., Zekanowski, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+and+Alzheimer's+disease.">Mitochondrial dysfunction and Alzheimer's disease.</a> Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 35, 320-330 (2011).</li><li>de Moura, M. B., dos Santos, L. S., S, L., Van Houten, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+in+neurodegenerative+diseases+and+cancer.">Mitochondrial dysfunction in neurodegenerative diseases and cancer.</a> Environ. Mol. Mutagen. 51, 391-405 (2010).</li></ol>

Ingen interessekonflikter erklæret.

Zebrafisk er en veletableret genetisk model både fremad (ENU mutagenese) og reverse (Tilling, zinkfinger nuclease målrettet knock-out, morpholino knockdown) genetiske fremgangsmåder 3,4, mens genfunktion i zebrafisk embryoner også let kan blokeres eller aktiveret anvendelse af selektive farmakologiske forbindelser specifikke for de kodede produkter. På grund af deres eksterne udvikling og lille størrelse, zebrafisk embryoner er særligt egnede til metabolisk analyse. Imidlertid er robust måling af metaboliske profil og mitokondriefunktion in vivo i zebrafisk embryoner ikke opnået, med kun en foreløbig beskrivelse rapporteres 5. Seahorse analyse blev oprindeligt designet til cellebaserede metaboliske undersøgelser, og har vist sig at give nøjagtige og pålidelige resultater 6. Anvendelsen af ​​denne nye metode til zebrafisk embryoner er betydelig, og sandsynligvis vil øge den bredere anvendelse af denne model for metaboliske studier. I denne undersøgelse viser vi måling af en række åndedræt parametre i zebrafisk embryoner ved hjælp af Seahorse Analyser, herunder basal respiration, maksimal respiration, ekstra respiratorisk kapacitet, ATP omsætning og proton lækage. Vi også tilvejebringe et eksempel på hvordan sådanne målinger kan korreleres med andre fysiologiske parametre, i dette tilfælde lipidakkumulering, og for anvendelse af farmakologiske inhibitorer i dette assaysystem. Kombineret med brugen af ​​genetisk ændrede embryoner, giver dette et stærkt eksperimenterende platform for forståelse af faktorer, der påvirker stofskiftet. Der findes en række anvendelser for denne nye metodik, med mitokondriel dysfunktion er impliceret i mange humane sygdomme, såsom diabetes mellitus 7, fedme 8, multipel sklerose 9, Parkinsons sygdomme 10, Alzheimers sygdom 11 og nogle typer cancere 12. Vigtigere, our arbejde udføres in vivo, hvor alle miljømæssige påvirkninger - såsom cytokiner, udvikling-relateret vækst osv - er aktive, hvilket giver en fysiologisk relevant visning in vivo åndedræt og metabolisk profil. Som kemiske skærme også udføres rutinemæssigt i vildtype og mutant baggrund zebrafisk embryoner (figur 1), hidtil ukendte farmaceutiske der påvirker respiration, mitokondrier funktion eller metabolisme kan let identificeres ved hjælp af Søhest analysatoren. De resultater, der genereres ved hjælp af Søhest analysatoren kan anvendes i forbindelse med andre assays til at give yderligere information. Dette kan omfatte fysiologisk analyse, såsom olie-rød farvning eller molekylær analyse, såsom in situ-hybridisering for specifikke adipocyt-markører, såsom cebpα, PPARa, PPARy, FAS osv. Der er stadig visse begrænsninger i denne metode. Selv om vi og andre kunne bruge oligomycin har væUre ATP produktion og proton læk på unge embryoner 5 (se figur 3), i embryoner ældre end 60 HPF oligomycin behandling er ineffektiv. Vi mener, at i ældre fostre oligomycin kan ikke diffundere så let end hos yngre embryoner gøre resultaterne umuligt at fortolke. Da oligomycin resultaterne er obligatoriske for bestemmelse af respiration på grund af ATP omsætning og afkoblet respiration, er vi gang med at undersøge højere koncentrationer af oligomycin for ældre embryoner. Imidlertid antimycin behandlinger forbliver effektive længere, med andre målinger, såsom basal respiration, maksimal respiration og ekstra respiratorisk kapacitet, kan udføres i ældre zebrafisk embryoner, op til 68 HPF (ikke vist). En anden begrænsning i at bruge den aktuelle Seahorse Analyser setup er det fysiske rum inden for hver ø capture plade godt, således at de kun er velegnede til zebrafisk embryoner og unge larver. Derfor udfører Metabolic undersøgelser af kost-induceret fedme hos voksne fisk, for eksempel, er endnu ikke teknisk muligt. Imidlertid kan denne undersøgelse driver udviklingen af ​​plader er specielt designet til ung eller voksen fisk, hvorved udvidelse af analyser mulige.

<html><table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagenset </td><td> Firma </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> XF 24 ekstracellulære flux analysator </td><td> Seahorse Bioscience </td><td> 100737-101 </td><td> 24-brønds format </td></tr><tr><td> Islet Capture mikroplade </td><td> Seahorse Bioscience </td><td> 101122-100 </td><td> 24-brønds format </td></tr><tr><td> XF kalibrant Solution </td><td> Seahorse Bioscience </td><td> 100840-000 </td><td></td></tr><tr><td> XF assaymedium </td><td> Seahorse Bioscience </td><td> 101022-100 </td><td></td></tr><tr><td> Olie-Rød-O </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> O0625 </td><td></td></tr><tr><td> 1-phenyl-2-thiourinstof (PTU) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P7629 </td><td>/ Zfbook/chapt10.html # wptohtml51 &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; http://zfin.org/zf_info/zfbook/chapt10.html # wptohtml51 </td></tr><tr><td> E3 (embryonisk medium) </td><td> Self gjort </td><td> - </td><td> <a href="http://zfin.org/zf_info/zfbook/chapt10.html#wptohtml16" target="_blank">http://zfin.org/zf_info/zfbook/chapt10.html # wptohtml16</a> </td></tr><tr><td> 100X15 mm petriskåle </td><td> Falcon </td><td> 35-1029 </td><td></td></tr><tr><td> FCCP </td><td> Sigma </td><td> C2920 </td><td></td></tr><tr><td> Oligomycin </td><td> Sigma </td><td> 75.351 </td><td></td></tr><tr><td> Antimycin </td><td> Sigma </td><td> A8674 </td><td></td></tr></tbody></table>

metabolic profile analysis of zebrafish embryos

En voksende mål inden for stofskifte er at fastslå virkningen af ​​genetik på forskellige aspekter af mitokondriefunktionen. Forståelsen af ​​disse forbindelser vil hjælpe med at forstå den underliggende ætiologi for en række sygdomme, der er forbundet med mitokondriel dysfunktion, såsom diabetes og fedme. Nylige fremskridt inden for instrumentering, har muliggjort overvågning af forskellige parametre for mitokondriefunktion i cellelinier eller væv eksplantater. Her præsenterer vi en metode til en hurtig og følsom analyse af mitokondrielle funktionsparametre in vivo under zebrafisk embryonale udvikling ved hjælp af Seahorse biovidenskab XF 24 ekstracellulære flux analysator. Denne protokol udnytter Islet Capture mikroplader hvor en enkelt embryo er placeret i hver brønd, hvilket tillader måling af bioenergetik, herunder: (i) basal respiration, (ii) basal mitokondriel respiration (iii) mitokondriel respiration som følge af ATP omsætning (iv) mitochondrial ukoblet respiration eller prOton læk og (iv) højst åndedræt. Denne fremgangsmåde benyttes embryonale zebrafisk respiration parametre kan sammenlignes mellem vildtype og genetisk ændrede embryoner (mutant, gen overekspression eller gen knockdown) eller de manipulerede farmakologisk. Det forventes, at udbredelsen af denne protokol vil give forskerne med nye værktøjer til at analysere den genetiske basis af stofskiftesygdomme in vivo i dette relevante hvirveldyr model.

<html> Vi er interesseret i at forstå den rolle specifikke gener på stofskiftet, især respirationsfrekvens og lipidmetabolisme. Vi derfor behandlede vildtype zebrafisk embryoner fra 26 HPF fremefter med en specifik farmakologisk inhibitor af enzymet, der kodes af et af disse gener. Ved 50 HPF blev halvdelen af ​​køretøjet og inhibitor-behandlede embryoer analyseret under anvendelse af Søhest for mitokondriefunktion, mens den anden halvdel blev fikseret i 4% PFA natten over ved 4 ° C og derefter farvet for lipid deposition med olie-rød-O. Behandling med det specifikke enzym inhibitor medførte en ~ 2 gange stigning i basal respiration (figur 4A), hvilket var forbundet med en forøgelse af lipidaflejring især i telencephalon og under otisk vesikel (figur 4B, C). pload/4300/4300fig1highres.jpg &quot;/&gt; Figur 1. Skematisk fremstilling af kemisk behandling af zebrafisk embryoner. Vildtype, genetisk manipulerede eller farmakologisk behandlet zebrafisk embryoner er baggrund. <img src="/files/ftp_upload/4300/4300fig2.jpg" alt="Figur 2" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/4300/4300fig2highres.jpg"/> Figur 2. XF24 ø plade sat op. (A) Fire brønde indeholder embryonale medium kun som temperaturkontrol (markeret med X), og de ​​andre indeholder ét æg / brønd. (B) Close-up af en brønd (C6), der viser en 50 HPF vildtype embryo behandlet med vehikel (DMSO) er omfattet af en ø capture skærm (pilespids). <img src="/files/ftp_upload/4300/4300fig3.jpg" alt="Figur 3" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/4300/4300fig3highres.jpg"/> Figur 3. Respiration parametre for vildtype 50 HPF zebrafisk embryoner. (A) For hver måling er gennemsnittet af de 20 individuelle embryoner præsenteret. Basal respiration (Mean: 299,7, SD: 75,7; SEM: 16,9), Maksimal respiration (Mean: 387,4, SD: 93,3; SEM: 20,9), Spare Respiratory Capacity (Mean: 87,7; SD: 72,0; SEM: 16,1). (B) For hver måling, er gennemsnittet af de 20 individuelle resultater præsenteret. Basal mitochondrial respiration, mitochondrial respiration på grund af ATP omsætning, mitochondrial ukoblet respiration og ikke-mitokondrie åndedræt. Mt: mitochondrial, SRC: Spare Respiratory Kapacitet SD: Standardafvigelse, SEM: Standard Error over Mean. Resultaterne er præsenteret i pmol O 2 forbrugt / min / embryo. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4300/4300fig3large.jpg" target="_blank">Klik her for at se større figur</a> . <img src="/files/ftp_upload/4300/4300fig4.jpg" alt="Figur 4" /> Figur 4. Reprærepræsentative resultater af kemisk eksponering på basal respiration og lipidaflejring. (A, B) 50 HPF embryo farvet med Oil-Red O i lateral view. Embryonet inkuberet med selektiv inhibitor (B) viser mere Olie-rød-O-farvning i telencephalon (pilespids) og ned under otisk vesikel (pil) sammenlignet med en vehikel-behandlede kontrolgruppe embryo. (C) Basal respiration viser et ~ 2 gange stigning i kemisk behandlede embryoer (n = 10 embryoner pr gruppe). Resultaterne er præsenteret i pmol O 2 / min / embryo.

Watch this Scientific Journal Video about Metabolic Profile Analysis of Zebrafish Embryos at JoVE.com

Metabolic Profile Analysis of Zebrafish Embryos

Zebrafisk repræsenterer en magtfuld hvirveldyr model, der har været underudnyttet for metaboliske studier. Her beskriver vi en hurtig måde at måle<em&gt; In vivo</em&gt; Metaboliske profil udvikle zebrafisk, der tillader sammenligning af forskellige mitokondriefunktion parametre mellem genetisk eller farmakologisk manipulerede embryoer og derved øge anvendeligheden af ​​denne organisme.

Metaboliske profil Analyse af zebrafisk embryoner

A growing goal in the field of metabolism is to determine the impact of genetics on different aspects of mitochondrial function. Understanding these ...

Research

JoVE Journal

Biology

Microinjection of mRNA and Morpholino Antisense Oligonucleotides in Zebrafish Embryos.

An essential tool for investigating the role of a gene during development is the ability to perform gene knockdown, overexpression, and misexpression ...

Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function

One of the advantages of studying zebrafish is the ease and speed of manipulating protein levels in the embryo.  Morpholinos, which are synthetic ...

Generating Chimeric Zebrafish Embryos by Transplantation

One of the most powerful tools used to gain insight into complex developmental processes is the analysis of chimeric embryos. A chimera is defined as an ...

Two-Photon-Based Photoactivation in Live Zebrafish Embryos

Photoactivation of target compounds in a living organism has proven a valuable approach to investigate various biological processes such as embryonic ...

Eukaryotic Polyribosome Profile Analysis

Protein synthesis is a complex cellular process that is regulated at many levels. For example, global translation can be inhibited at the initiation phase ...

Imaging Glycans in Zebrafish Embryos by Metabolic Labeling and Bioorthogonal Click Chemistry

Imaging glycans in vivo has recently been enabled using a bioorthogonal chemical reporter strategy by treating cells or organisms with azide- or ...

Analysis of Apoptosis in Zebrafish Embryos by Whole-mount Immunofluorescence to Detect Activated Caspase 3

Analyse af apoptose i zebrafisk embryoner Whole-mount Immunofluorescens Detect Aktiveret Caspase 3

Whole-mount immunofluorescence to detect activated Caspase 3 (Casp3 assay) is useful to identify cells undergoing either intrinsic or extrinsic apoptosis ...

Analysis of Oxidative Stress in Zebrafish Embryos

Analyse af oxidativt stress i zebrafisk embryoner

High levels of reactive oxygen species (ROS) may cause a change of cellular redox state towards oxidative stress condition. This situation causes ...

Semi-automated Imaging of Tissue-specific Fluorescence in Zebrafish Embryos

Semi-automatiske Imaging af Vævsspecifik Fluorescens i zebrafisk embryoner

Zebrafish embryos are a powerful tool for large-scale screening of small molecules. Transgenic zebrafish that express fluorescent reporter proteins are ...

Production of Haploid Zebrafish Embryos by In Vitro Fertilization

Production of Haploid Zebrafish Embryos by In Vitro Fertilization

Produktion af haploide zebrafisk embryoner<em&gt; In Vitro</em&gt; Befrugtning

The zebrafish has become a mainstream vertebrate model that is relevant for many disciplines of scientific study. Zebrafish are especially well suited for ...