Name: metabolic profile analysis of zebrafish embryos
Uploaded: 2013-01-14T12:00:00
Duration: 5 min 41 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Metabolic Profile Analysis of Zebrafish Embryos at JoVE.com

המחברים מבקשים להודות לחברי צוות של מתקן אוניברסיטת דיקין דג הזברה למתן טיפול גידול בעלי מתמשך מצוין. י.ג. נתמך על ידי מלגת אלפרד דיקין דוקטורי מחקר ומענק מחקר מרכזי מאוניברסיטת דיקין. SLM נתמך על ידי מלגת פיתוח קריירת NHMRC. ACW נתמך על ידי גרנט הפעלת NHMRC. כל המחברים נתמכים על ידי המרכז למחקר הרפואי המולקולרי והאסטרטגי מחקר באוניברסיטת דיקין.

חלק 1: טיפול כימי של עוברי דג זברה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף עוברי דג זברה לאחר הפריה. לדגור על 28.5 מעלות צלזיוס במדיום E3 ב100 × 15 מ&quot;מ צלחות פטרי. הערה: לכלאה באתר או שמן אדום-O מכתים, 1-פניל-2-Thiourea (PTU) בריכוז סופי של 0.2 מ&quot;מ הוא הוסיף לדכא היווצרות פיגמנט, 1, אך אינו הכרחי לניתוח סוסון ים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחקרים פרמקולוגיים, להוסיף את הכימיקל הנדרש בריכוז סופי מתאים לפיתוח עוברי דג זברה בסביבות 26 הפרית הודעה לשעה (hpf) עם רכב בלבד שליטת הערה מתאימה:. למעכבים פרמקולוגיים רגישים לאור, עוברים יכולים להיות מותרים לפתח ב לפני חשכה לניתוח. </li></ol> חלק 2: פרופיל מטבולים חי באמצעות 24 Analyser XF סוסון הים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני כל ריצה, מחסנית Analyser סוסון ים XF 24 כי בתי O 2 ו-H <sעד&gt; + fluorophores מכויל באמצעות תהליך אוטומטי שבוצע על ידי המנתח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת צלחת האיון 24 גם XF 24. רצף הניסוי הבא הוא מועסק: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מאז צריכת חמצן היא רגישה לתנודות טמפרטורה, 4 בארות המשמשות לבקרה לתנודות טמפרטורה אפשריות ברחבי הצלחת. בארות אלה אינם מכילות עוברים, אך מלאות ב700 μl של מדיום E3 (איור 2 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> את 20 הבארות הנותרות (ראה מסגרת 2.2) מלאות ב700 μl של מדיום E3 ועובר בכל אחד (2B איור). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור כל ניסוי, 10 עוברי מטופלים עם רכב בלבד (שליטה) ו 10 טופל במעכבים כימיים (מטופלים). עוברי בקרה וטופלו לסירוגין (למשל A2 גם: עובר שליטה; גם A3: עובר שטופל: A4 גם: עובר שליטה; A5 עובר יחס טוב, וכו &#39;). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסך לכיד איון הוא הוסיף בחלק העליון של. כל היטב כדי להבטיח שהדגימה נשארת בתא המדידה במשך הבדיקה (האיור 2B) הערה: עוברים כימיים שטופלו להישאר עם התמיסה הכימית המקורית לאורך כל ההליך, ללא צורך לשטוף את כימי לפני ההרצה של מנתח סוסון הים תכנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פעם סיים, הצלחת הוא נטען לתוך Analyser סוסון הים וassay הוא התחיל. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח של דגימות. שני מבחנים שונים מבוצעים באופן שגרתי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תכנית אסאל נשימה / נשימה מרבית (כ משך. 90 דקות). שינויים בנשימה בסיסית לחזק תפקוד מטבולים, ואילו הנשמה מרבית היא מדד לקיבולת כוללת ייצור אנרגיה ושינויים בפרמטר זה קשור למספר מצבים פתולוגיים הן ופיסיולוגיים. קיבולת הנשימה, או קיבולת למערכת נוספת כדי להגדיל את ייצור ה-ATP, מחושבת גםמבדיקה זו על ידי החיסור של בסיס מהנשמה מקסימלי. שלוש חזרות של כל תמהיל (2 דקות) / מחזור המדידה (2 דקות) לחכות דקות (1) / מבוצעת כדי להקים בסיס נשימה ראשונה. בסיומו של המחזור השלישי, ריכוז סופי של 2.5 מיקרומטר של FCCP (המיטוכונדריה protonophore / uncoupler) נוסף לכל גם מאפשר מדידה של נשימה מרבית. אז מחזור המדידה חוזר על עצמו 5-8 פעמים (איור 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תכנית ה-ATP מחזור / דליפת פרוטון (משך כ. 60 דקות). נשימה עקב תחלופת ATP מייצגת את הפונקציה העיקרית של המיטוכונדריה בצורה של ייצור ה-ATP, תוך נשימה עקב דליפת פרוטון, או בנשימה כשהתיר, קשורה קשר בל אנתק עם פרמטרים אחרים של מיטוכונדריה כולל הנשמת בסיס והיווצרות מיני חמצן תגובתי. נשימה עקב תחלופת ATP מיוצגת על ידי ההבדל בנשימה לאחר התוספת של oligomycin מיקרומטר 25 (מעכב שלsynthase TP) בהשוואה לנשימה בסיסית. הנשמה נותקה, או בנשימה עקב דליפת פרוטון, נקבעה על ידי חישוב ההפרש בין נשימת oligomycin בתיווך ונשימה לאחר התוספת של 25 מיקרומטר rotenone (מעכב אני מורכב). מחזורי מדידה חוזרים 8 פעמים לאחר תוספת של כל מעכב המיטוכונדריה. </li></ol></li></ol> בתום הריצות, אומרים ערכים של 10 שליטה ו10 עוברים שטופלו כימי מחושבים. חלק 3: שמן אדום-O כתמים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עוברים ב50 hpf הם dechorionated באמצעות מלקחיים עדינים וקבועים ב4% PFA הלילה ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמן אדום-O צביעה מבוצעת, כפי שתוארה קודם לכן 2 (ראה איור 4). </li></ol>

<ol>
	<li>N&#252;sslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Zebrafish. , (2002).</li><li>Schlombs, K., Wagner, T., Scheel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Site-1+protease+is+required+for+cartilage+development+in+zebrafish.">Site-1 protease is required for cartilage development in zebrafish.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 14024-14029 (2003).</li><li>Ingham, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+power+of+the+zebrafish+for+disease+analysis.">The power of the zebrafish for disease analysis.</a> Hum. Mol. Genet. 18, R107-R112 (2009).</li><li>Nasevicius, A., Ekker, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+targeted+gene+'knockdown'+in+zebrafish.">Effective targeted gene 'knockdown' in zebrafish.</a> Nat. Genet. 26, 216-220 (2000).</li><li>Stackley, K. D., Beeson, C. C., Rahn, J. J., Chan, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioenergetic+profiling+of+zebrafish+embryonic+development.">Bioenergetic profiling of zebrafish embryonic development.</a> Plos One. 6, e25652 (2011).</li><li>McGee, S. L., Sadli, N., Morrison, S., Swinton, C., Suphioglu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DHA+protects+against+zinc+mediated+alterations+in+neuronal+cellular+bioenergetics.">DHA protects against zinc mediated alterations in neuronal cellular bioenergetics.</a> Cell Physiol. Biochem. 28, 157-162 (2011).</li><li>Sivitz, W. I., Yorek, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+in+diabetes:+from+molecular+mechanisms+to+functional+significance+and+therapeutic+opportunities.">Mitochondrial dysfunction in diabetes: from molecular mechanisms to functional significance and therapeutic opportunities.</a> Antioxid. Redox Signal. 12, 537-577 (2010).</li><li>Bournat, J. C., Brown, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+in+obesity.">Mitochondrial dysfunction in obesity.</a> Curr. Opin. Endocrinol. Diabetes Obes. 17, 446-452 (2010).</li><li>Ghafourifar, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+in+multiple+sclerosis.">Mitochondria in multiple sclerosis.</a> Front Biosci. 13, 3116-3126 (2008).</li><li>Winklhofer, K. F., Haass, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+in+Parkinson's+disease.">Mitochondrial dysfunction in Parkinson's disease.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1802, 29-44 (2010).</li><li>Maruszak, A., Zekanowski, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+and+Alzheimer's+disease.">Mitochondrial dysfunction and Alzheimer's disease.</a> Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 35, 320-330 (2011).</li><li>de Moura, M. B., dos Santos, L. S., S, L., Van Houten, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+in+neurodegenerative+diseases+and+cancer.">Mitochondrial dysfunction in neurodegenerative diseases and cancer.</a> Environ. Mol. Mutagen. 51, 391-405 (2010).</li></ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

דג זברה הוא מודל גנטי מבוסס היטב לשניהם קדימה (ENU mutagenesis) והפוך (עבד, אבץ האצבע nuclease ממוקד עקום החוצה, מציאת morpholino) גישה גנטית, 3,4, בעוד תפקוד גן בעוברי דג זברה יכול גם להיחסם בקלות או הופעל שימוש בתרכובות תרופתיות סלקטיביים ספציפיות למוצרים המקודדים. בשל ההתפתחות החיצונית שלהם והגודל קטן, עובר דג הזברה הם מתאימים במיוחד לניתוח מטבולים. עם זאת, מדידה חזקה של פרופיל המטבולי ומיטוכונדריה in vivo בעוברי דג זברה לא הושגה, ורק אחד תיאור ראשוני דיווחה 5. ניתוח סוסון הים תוכנן במקור למחקרים מטבוליים מבוססי תאים והודגם לתת תוצאות מדויקות ואמינות 6. היישום של מתודולוגיה חדשה זו לעוברי דג זברה הוא משמעותי, וסביר להניח כדי להגדיל את השימוש הרחב יותר של מודל זה למחקרים מטבוליים. במחקר זה, אנו מדגימים מדידה של מגוון פרמטרי נשימה בעוברי דג זברה באמצעות Analyser סוסון הים, כולל הנשמה בסיסית, נשימה מקסימלי, יכולת נשימה פנויה, מחזור ה-ATP ודליפת פרוטון. אנו מספקים גם דוגמה לאופן שיכולות להיות מתואמות עם מדידות כאלה פרמטרים פיסיולוגיים אחרים, בהצטברות שומנים במקרה זה, ושל השימוש במעכבים תרופתיים במערכת assay זה. בשילוב עם השימוש בעוברים גנטיים שהשתנו, זה מספק פלטפורמה ניסיונית רבה עצמה להבנת גורמים המשפיעים על חילוף חומרים. יש מגוון של יישומים למתודולוגיה חדשה זו, עם תפקוד המיטוכונדריה הוא מעורב במחלות של בני אדם רבות, כגון סוכרת 7 סוכרת, השמנת יתר 8, 9 טרשת נפוצה, פרקינסון 10, אלצהיימר 11 ואיזה סוג של 12 סוגי הסרטן. חשוב לציין, oעבודה מתבצעת ur in vivo, שבו כל ההשפעות הסביבתיות - כגון ציטוקינים וכו &#39;, פיתוח הקשור לצמיחה - הן פעילות, ובכך לספק מבט פיסיולוגי רלוונטי בנשימת vivo ופרופיל מטבולים. כמסכים כימיים גם מבוצעים באופן שגרתי בסוג פרוע ועוברי דג זברה מוטנטים רקע (איור 1), תרופות חדשניות שהשפעת הנשימה, תפקוד המיטוכונדריה או חילוף חומרים יכולה להיות מזוהית בקלות באמצעות מנתח סוסון הים. תוצאות שנוצרו באמצעות מנתח סוסון הים יכולות לשמש בשילוב עם מבחנים אחרים כדי לספק מידע נוסף. זה יכול לכלול ניתוח פיסיולוגי, כגון כתמי שמן אדומים, או ניתוח מולקולרי, כמו כלאה באתרו לסמני adipocyte ספציפיים כגון cebpα, Pparα, Pparγ, FAS וכו &#39; יש להישאר כמה מגבלות מתודולוגיה זו. למרות שאנו ואחרים היו מסוגלים להשתמש oligomycin לMEAsייצור ה-ATP ויור דליפת פרוטון בעוברים צעירים 5 (ראה איור 3), בעוברים מעל גיל 60 טיפול hpf oligomycin אינו יעיל. אנו מאמינים כי בעוברים מבוגרים oligomycin לא יכול לנטרל בקלות מאשר בעוברים צעירים עושים את התוצאות אי אפשר לפרש. מאחר שתוצאות oligomycin הן חובה לקביעת נשימה עקב מחזור ה-ATP והנשמה נותקה, אנו כרגע בבדיקת ריכוזים גבוהים יותר של עוברים oligomycin למבוגרים. עם זאת, antimycin A טיפולים להישאר יעילים יותר, עם מדידות אחרות, כגון נשימה בסיסית, נשימה מרבית ואת יכולת נשימה פנויה, ניתן לבצע בעוברי דג זברה מבוגרים, עד 68 hpf (לא מוצג). מגבלה נוספת בבאמצעות הגדרת Analyser סוסון הים הנוכחית היא גם מרחב הפיזי בתוך כל צלחת לכידת איון, כזה שהם מתאימים רק לעוברי דג זברה וזחלים צעירים. לכן, ביצוע metabolמחקרי IC על השמנת דיאטה מושרה בדגים בוגרים, למשל, עדיין לא אפשרי מבחינה טכנית. עם זאת, מחקר זה עשוי להנחות את הפיתוח של צלחות שתוכננו במיוחד לדגים צעירים או מבוגרים, וכך להרחיב את היקף ניתוח אפשרי.

<html><table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> מנתח שטף XF 24 תאיים </td><td> סוסון ים Bioscience </td><td> 100737-101 </td><td> 24 פורמט היטב </td></tr><tr><td> microplate הלכידה איילט </td><td> סוסון ים Bioscience </td><td> 101122-100 </td><td> 24 פורמט היטב </td></tr><tr><td> פתרון XF Calibrant </td><td> סוסון ים Bioscience </td><td> 100840-000 </td><td></td></tr><tr><td> בינוני Assay XF </td><td> סוסון ים Bioscience </td><td> 101022-100 </td><td></td></tr><tr><td> שמן האדום-O </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> O0625 </td><td></td></tr><tr><td> 1-פניל-2-Thiourea (PTU) </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> P7629 </td><td>/ Zfbook/chapt10.html # wptohtml51 &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; http://zfin.org/zf_info/zfbook/chapt10.html # wptohtml51 </td></tr><tr><td> E3 (בינוני עוברי) </td><td> תוצרת עצמית </td><td> - </td><td> <a href="http://zfin.org/zf_info/zfbook/chapt10.html#wptohtml16" target="_blank">http://zfin.org/zf_info/zfbook/chapt10.html # wptohtml16</a> </td></tr><tr><td> מנות 100X15 מ&quot;מ פטרי </td><td> בז </td><td> 35-1029 </td><td></td></tr><tr><td> FCCP </td><td> סיגמא </td><td> C2920 </td><td></td></tr><tr><td> Oligomycin </td><td> סיגמא </td><td> 75351 </td><td></td></tr><tr><td> Antimycin </td><td> סיגמא </td><td> A8674 </td><td></td></tr></tbody></table>

metabolic profile analysis of zebrafish embryos

מטרה גוברת בתחום המטבוליזם היא לקבוע את ההשפעה של גנטיקה על היבטים שונים של מיטוכונדריה. הבנת יחסים אלה תעזור להבין את האטיולוגיה הבסיסית למגוון מחלות הקשורות בתפקוד המיטוכונדריה, כמו סוכרת והשמנת יתר. התקדמות במכשור, אפשרה הניטור של פרמטרים שונים של מיטוכונדריה בשורות תאים או הרקמות explants. כאן אנו מציגים שיטה לניתוח מהיר ורגיש של פרמטרי מיטוכונדריה in vivo במהלך התפתחות עוברית דג הזברה באמצעות מנתח סוסון ים Bioscience XF 24 תאי שטף. פרוטוקול זה משתמש בלכידת איילט microplates בי עובר יחיד יוצב בכל באר, המאפשרת מדידה של bioenergetics, כוללת: (i) הנשמה בסיסית; נשימה (ii) המיטוכונדריה הבזליים נשימה (iii) המיטוכונדריה בשל מחזור ה-ATP; (ד) המיטוכונדריה נשימה כשהתיר או יחסי הציבורoton דליפה ונשימה (iv) מקסימלי. שימוש בפרמטרי גישה זו עוברית דג זברת נשימה ניתן להשוות בין סוג פרוע ועוברים שעברו שינוי גנטי (מוטציה, גן על ביטוי או מציאת גן) או אלה מניפולציות פרמקולוגית. זה צפוי כי הפצתו של פרוטוקול זה תספק לחוקרים בכלים חדשים כדי לנתח את הבסיס הגנטי של הפרעות מטבוליות in vivo במודל של בעלי חיים בעלי חוליות רלוונטי זה.

<html> אנחנו מעוניינים בהבנת גני התפקיד ספציפיים בחילוף חומרים, ובמיוחד קצב נשימה וחילוף חומרים של שומנים בדם. לכן, אנחנו מטופלי עוברי דג זברת סוג בר מ26 ואילך hpf עם מעכב תרופתי ספציפי של אנזים מקודד על ידי אחד מהגנים הללו. בגיל 50 hpf, מחצית מהרכב ועוברי מעכב טופל נותחה באמצעות סוסון הים למיטוכונדריה, ואילו המחצית הנותרת היו קבועה ב4% PFA הלילה ב 4 ° C ומוכתם בהמשך לתצהיר שומנים עם שמן האדום-O. טיפול במעכב האנזים הספציפי הוביל ~ עלייה של 2 קיפול בנשימה בסיסית (איור 4 א), שהיה קשור עם עלייה בתצהיר שומנים במיוחד בtelencephalon ומתחת לשלפוחית ​​otic (האיור 4B, C). pload/4300/4300fig1highres.jpg &quot;/&gt; איור 1. ייצוג סכמטי של טיפול כימי של עוברי דג זברה. wildtype, מניפולציות גנטיות, או טיפול תרופתי עוברי דג זברה הוא רקע. <img src="/files/ftp_upload/4300/4300fig2.jpg" alt="איור 2" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/4300/4300fig2highres.jpg"/> איור 2. צלחת XF24 איון להגדיר. () ארבע בארות מכילות בינוניות עוברי רק כבקרת טמפרטורה (מסומן על ידי X) ואחרים מכילים עוברים אחד / כן. (ב) תקריב של באר אחת (C6) מראה עובר 50 hpf פראי סוג שטופל ברכב (DMSO) מכוסה על ידי מסך ללכוד איון (ראש החץ). <img src="/files/ftp_upload/4300/4300fig3.jpg" alt="איור 3" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/4300/4300fig3highres.jpg"/> איור 3. Respiratפרמטרים ליונים 50 עוברי דג זברה פרא סוג hpf. () לכל מדידה, הממוצע של 20 עוברים הבודדים מוצגים. נשימת אסאל (Mean: 299.7; SD: 75.7; SEM: 16.9), נשימה מקסימלי (ממוצע: 387.4; SD: 93.3; SEM: 20.9), קיבולת נשימת חילוף (ממוצע: 87.7; SD: 72.0; SEM: 16.1). (ב) לכל מדידה, הממוצע של 20 תוצאות הבודדות מוצג. נשימת אסאל המיטוכונדריה; נשימה המיטוכונדריאלי בשל מחזור ה-ATP; נשימה המיטוכונדריאלי כשהתיר ונשימה שאינה של המיטוכונדריה. הר: המיטוכונדריה; SRC: קיבולת נשימת חילוף; SD: סטיית תקן, SEM: שגיאת תקן של ממוצע. תוצאות מוצגות בpmol של O 2 צרך / דקות / עובר. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4300/4300fig3large.jpg" target="_blank">לחץ כאן לצפייה בדמות גדולה.</a> <img src="/files/ftp_upload/4300/4300fig4.jpg" alt="איור 4" /> איור 4. מייצגתוצאות sentative של חשיפה כימית בנשימה בסיסית ובתצהיר שומנים. (A, B) 50 עובר hpf המוכתם בשמן האדום O בתצוגה לרוחב. העובר הודגרו עם מעכב סלקטיבי (ב &#39;) מציג כתמים אדומים-O-שמן יותר בtelencephalon (ראש החץ) ומתחת לשלפוחית ​​otic (חץ) בהשוואה לעובר שליטה ברכב שטופל. (C) הנשמת אסאל תערוכות ~ גידול של פי 2 בעוברים שטופלו כימי (N = 10 עוברים לכל קבוצה). תוצאות מוצגות בpmol של O 2 / דקות / עובר.

Watch this Scientific Journal Video about Metabolic Profile Analysis of Zebrafish Embryos at JoVE.com

Metabolic Profile Analysis of Zebrafish Embryos

דג זברה מייצג מודל חוליות חזקה שהיה תחת מנוצל למחקרים מטבוליים. כאן אנו מתארים את הדרך מהירה למדידה<em&gt; In vivo</em&gt; פרופיל המטבולי של דג זברה מתפתח המאפשר השוואה של פרמטרי מיטוכונדריה שונים בין עוברים גנטיים או מניפולציה פרמקולוגית, ובכך להגדיל את הישימות של אורגניזם הזה.

ניתוח פרופיל המטבולי של עוברי דג זברה

A growing goal in the field of metabolism is to determine the impact of genetics on different aspects of mitochondrial function. Understanding these ...

Research

JoVE Journal

Biology

Microinjection of mRNA and Morpholino Antisense Oligonucleotides in Zebrafish Embryos.

Microinjection של mRNA ו oligonucleotides Morpholino antisense עוברי דג הזברה.

An essential tool for investigating the role of a gene during development is the ability to perform gene knockdown, overexpression, and misexpression ...

Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function

Microinjection של עוברי דג הזברה לנתח פונקציה ג&#39;ין

One of the advantages of studying zebrafish is the ease and speed of manipulating protein levels in the embryo.  Morpholinos, which are synthetic ...

Generating Chimeric Zebrafish Embryos by Transplantation

יצירת עוברים דג הזברה chimeric על ידי השתלה

One of the most powerful tools used to gain insight into complex developmental processes is the analysis of chimeric embryos. A chimera is defined as an ...

Two-Photon-Based Photoactivation in Live Zebrafish Embryos

שני הפוטונים מבוסס Photoactivation עוברי דג הזברה לחיות

Photoactivation of target compounds in a living organism has proven a valuable approach to investigate various biological processes such as embryonic ...

Eukaryotic Polyribosome Profile Analysis

האיקריוטים פרופיל Polyribosome ניתוח

Protein synthesis is a complex cellular process that is regulated at many levels. For example, global translation can be inhibited at the initiation phase ...

Imaging Glycans in Zebrafish Embryos by Metabolic Labeling and Bioorthogonal Click Chemistry

הדמיה Glycans בעוברים דג הזברה על ידי תיוג מטבולית וכימיה לחץ Bioorthogonal

Imaging glycans in vivo has recently been enabled using a bioorthogonal chemical reporter strategy by treating cells or organisms with azide- or ...

Analysis of Apoptosis in Zebrafish Embryos by Whole-mount Immunofluorescence to Detect Activated Caspase 3

ניתוח של אפופטוזיס בעוברי דג הזברה על ידי כל הר Immunofluorescence לזיהוי caspase הופעל 3

Whole-mount immunofluorescence to detect activated Caspase 3 (Casp3 assay) is useful to identify cells undergoing either intrinsic or extrinsic apoptosis ...

Analysis of Oxidative Stress in Zebrafish Embryos

ניתוח של סטרס חמצוני בעוברי דג הזברה

High levels of reactive oxygen species (ROS) may cause a change of cellular redox state towards oxidative stress condition. This situation causes ...

Semi-automated Imaging of Tissue-specific Fluorescence in Zebrafish Embryos

הדמיה חצי אוטומטית של הקרינה רקמות ספציפיות בעוברי דג הזברה

Zebrafish embryos are a powerful tool for large-scale screening of small molecules. Transgenic zebrafish that express fluorescent reporter proteins are ...

Production of Haploid Zebrafish Embryos by In Vitro Fertilization

Production of Haploid Zebrafish Embryos by In Vitro Fertilization

ייצור של הפלואידים עוברי דג הזברה על ידי<em&gt; במבחנה</em&gt; הפריה

The zebrafish has become a mainstream vertebrate model that is relevant for many disciplines of scientific study. Zebrafish are especially well suited for ...