Name: enumeration of major peripheral blood leukocyte populations for multicenter clinical trials using a whole blood phenotyping assay
Uploaded: 2012-09-16T14:00:00
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우리는이 방법, 원고 및 비디오의 개발에서의 도움을 제시카 존스, 에리카 클락, 콘 스턴스 Ducar, 도나 스미스, 로이 루이스, 릴리 Apedaile, 조앤 Wiesner, 데빈 아담스, 코리 McBain와 스티븐 Voght 감사드립니다. 이 작품은 빌과 멜린다 게이츠 재단 CAVD 보조금 38,645 (MJM)와 건강 교부금의 국립 연구소 UM1 AI068618 및 AI069481 U01 (MJM)에 의해 지원되었다. EA-N. NIH 그랜트 T32 AI007140에서 지원됩니다. 우리는 그들의 관대 한 장비 기증을 위해 제임스 B. 펜들턴 자선 신탁 감사드립니다.

참고 : 빛의 형광 - 복합 항체를 보호하기 위해 라이트와 바이오 안전 캐비넷의 모든 단계를 수행합니다. 1. 항체 염색법 패널 준비 <ol><li> 항체 염색법 패널은 표 1에서 찾을 수 있습니다. 항체 농도는 전체 피와 적정에 의해 정의하고 동일한 유동 세포 계측법 장비와 스테인드 phenotyping 샘플을 취득하는 데 사용됩니다 절차를 사용해야합니다. </li><li> 적절...

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	<li>Taylor, M. J., London, N. J., Thirdborough, S. M., Lake, S. P., James, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cryobiology+of+rat+and+human+dendritic+cells:+preservation+and+destruction+of+membrane+integrity+by+freezing.">The cryobiology of rat and human dendritic cells: preservation and destruction of membrane integrity by freezing.</a> Cryobiology. 27, 269-278 (1990).</li><li>Reimann, K. A., Chernoff, M., Wilkening, C. L., Nickerson, C. E., Landay, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preservation+of+lymphocyte+immunophenotype+and+proliferative+responses+in+cryopreserved+peripheral+blood+mononuclear+cells+from+human+immunodeficiency+virus+type+1-infected+donors:+implications+for+multicenter+clinical+trials.+The+ACTG+Immunology+Advanced+Technology+Laboratories.">Preservation of lymphocyte immunophenotype and proliferative responses in cryopreserved peripheral blood mononuclear cells from human immunodeficiency virus type 1-infected donors: implications for multicenter clinical trials. The ACTG Immunology Advanced Technology Laboratories.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 7, 352-359 (2000).</li><li>Boonlayangoor, P., Telischi, M., Boonlayangoor, S., Sinclair, T. F., Millhouse, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+human+granulocytes:+study+of+granulocyte+function+and+ultrastructure.">Cryopreservation of human granulocytes: study of granulocyte function and ultrastructure.</a> Blood. 56, 237-245 (1980).</li><li>Perfetto, S. P., Ambrozak, D., Nguyen, R., Chattopadhyay, P., Roederer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+assurance+for+polychromatic+flow+cytometry.">Quality assurance for polychromatic flow cytometry.</a> Nat Protoc. 1, 1522-1530 (2006).</li><li>Brando, B., Barnett, D., Janossy, G., Mandy, F., Autran, B., Rothe, G., Scarpati, B., D'Avanzo, G., D'Hautcourt, J. L., Lenkei, R., Schmitz, G., Kunkl, A., Chianese, R., Papa, S., Gratama, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytofluorometric+methods+for+assessing+absolute+numbers+of+cell+subsets+in+blood.+European+Working+Group+on+Clinical+Cell+Analysis.">Cytofluorometric methods for assessing absolute numbers of cell subsets in blood. European Working Group on Clinical Cell Analysis.</a> Cytometry. 42, 327-346 (2000).</li><li>Bull, M., Lee, D., Stucky, J., Chiu, Y. L., Rubin, A., Horton, H., McElrath, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+blood+processing+parameters+for+optimal+detection+of+cryopreserved+antigen-specific+responses+for+HIV+vaccine+trials.">Defining blood processing parameters for optimal detection of cryopreserved antigen-specific responses for HIV vaccine trials.</a> J. Immunol Methods. 322, 57-69 (2007).</li><li>Kantor, A. B., Roederer, M., Herzenberg, L., Blackwell, C., Weir, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The handbook of Experimental Immunology. 43, 1-49 (1996).</li><li>Hulspas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+and+the+stability+of+phycoerythrin-tandem+dye+conjugates.">Flow cytometry and the stability of phycoerythrin-tandem dye conjugates.</a> Cytometry A. 75, 966-972 (2009).</li><li>Le Roy, C., Varin-Blank, N., Ajchenbaum-Cymbalista, F., Letestu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+APC-tandem+dyes+are+degraded+through+a+cell-dependent+mechanism.">Flow cytometry APC-tandem dyes are degraded through a cell-dependent mechanism.</a> Cytometry A. 75, 882-890 (2009).</li><li>Mandy, F., Brando, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enumeration+of+absolute+cell+counts+using+immunophenotypic+techniques.">Enumeration of absolute cell counts using immunophenotypic techniques.</a> Curr. Protoc. Cytom. Chapter 6, Unit 6 (2001).</li><li>Vuckovic, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+dendritic+cells+in+clinical+practice+using+a+new+whole+blood+single-platform+TruCOUNT+assay.">Monitoring dendritic cells in clinical practice using a new whole blood single-platform TruCOUNT assay.</a> J. Immunol Methods. 284, 73-87 (2004).</li><li>Lichtner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+dendritic+cells+and+interferon-alpha+production+in+patients+with+tuberculosis:+correlation+with+clinical+outcome+and+treatment+response.">Circulating dendritic cells and interferon-alpha production in patients with tuberculosis: correlation with clinical outcome and treatment response.</a> Clin. Exp. Immunol. 143, 329-337 (2006).</li><li>Hosmalin, A., Lichtner, M., Louis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+analysis+of+dendritic+cell+subsets:+the+dendritogram.">Clinical analysis of dendritic cell subsets: the dendritogram.</a> Methods Mol. Biol. 415, 273-290 (2008).</li></ol>

이 보고서에서 우리는 유동 세포 계측법에 의해 신선한 전체 혈액의 백혈구 인구를 열거위한 구슬 기반의 방법을 제시하고 중앙 샘플 분석 multicenter 임상 시험에서의 사용에 대한 매개 변수가 필요 다룹니다. 이 방법은 토대로 및 BD Trucount 프로토콜을 최적화 multicenter 임상 실험 환경에서의 신뢰성 사용할 수 있습니다. 착색 분석은 간단하다하고 가능한 혈액 처리 연구실 기술자가 수행 할 및 분석...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> 절대 계산 튜브를 Trucount </td><td> BD Biosciences </td><td> 340334 </td></tr><tr><td> 10X FACS는 솔루션을 Lysing </td><td> BD Biosciences </td><td> 349202 </td></tr><tr><td> 절연 카테고리 B &amp; 면제 운송 시스템, </td><td> SAF-T-박 </td><td> STP-320 </td></tr><tr><td> CD45 단클론 항체 AmCyan </td><td> BD Biosciences </td><td> 339192 </td></tr><tr><td> 3 번 CD FITC 단클론 항체 </td><td> BD Biosciences </td><td> 349201 </td></tr><tr><td> CD8 PerCp - 사 5.5 단클론 항체 </td><td> BD Biosciences </td><td> 341051 </td></tr><tr><td> CD4 알렉사 형석 700 단클론 antibo마구 </td><td> BD Biosciences </td><td> 557922 </td></tr><tr><td> HLA-DR ECD 단클론 항체 </td><td> Beckman 보습 바로 앞에 달린 풀 베는 날 </td><td> IM3636 </td></tr><tr><td> CD14 단클론 항체 v450 </td><td> BD Biosciences </td><td> 560349 </td></tr><tr><td> CD19 PE 단클론 항체 </td><td> BD Biosciences </td><td> 555413 </td></tr><tr><td> CD16 APC-H7 단클론 항체 </td><td> BD Biosciences </td><td> 560195 </td></tr><tr><td> CD56 PE-Cy7 단클론 항체 </td><td> BD Biosciences </td><td> 335791 </td></tr><tr><td> CD11c APC 단클론 항체 </td><td> BD Biosciences </td><td> 559877 </td></tr><tr><td> CD123 PE-Cy5 단클론 항체 </td><td> BD Biosciences </td><td> 551065 </td></tr></tbody></table>

enumeration of major peripheral blood leukocyte populations for multicenter clinical trials using a whole blood phenotyping assay

말초 혈 백혈구의 Cryopreservation 널리 임상 실험에 면역 반응 평가를위한 세포를 보존하기 위해 사용하고 면역 평가의 용이성 및 표준화를위한 많은 장점을 제공하지만,이 과정의 해로운 효과는 같은 과립 성 백혈구와 같은 일부 세포 집합, B 세포에 관찰 된 수 있습니다 , 1-3 및 수지상 세포. 신선한 백혈구를 시금하면 세포의 생체 상태에서의보다 정확한 사진을 제공하지만, 종종 큰 임상 시험의 맥락에서 수행 할 수 어렵습니다. 신선한 세포 assays은 시간이 오래 걸릴 경우, 자신의 응용 프로그램으로 인해 실험실 직원의 필요한 노동 시간에 비현실적 일 수 자원 봉사 약속과 시간대에 의존하고. 또한, 재판이 여러 센터에서 실시하는 경우, assays을 수행하기 위해 필요한 자원과 훈련 연구소는 임상 사이트에 충분한 가까이에 위치 할 수 없습니다. 이러한 문제를 해결하기 위해, 우리는 devel이예와 같은 assays보다 더 강력한 세포 유형 특정 정보를하였으며, 표현형과 말초 혈 내의 주요 백혈구 인구를 열거, Trucount 튜브 (산호세, CA Becton 디킨슨)와 함께 사용할 수있는 11 색 항체 염색법 패널을 oped 완전한 혈액 카운트 (CBC) 또는 몇 세포 유형에 얼룩 Trucount 관을위한 상용 가능한 패널 assays. 착색 절차는 간단합니다, 신선한 전체 혈액의 약 100 μl가 필요하고 가능한 표준 혈액 처리 연구소가 수행 할 수있게 약 45 분 정도 소요됩니다. 그것은 BD Trucount 튜브 기술 데이터 시트 (에서 적응 <a href="http://www.bdbiosciences.com/external_files/is/doc/tds/Package_Inserts_CE/live/web_enabled/23-3483-06_PI_Trucount tubes_CE_EN.pdf" target="_blank">버전 2,010분의 8</a> ). 착색 항체 칵테일은 중앙 검정 실험실에서 대량으로 사전에 준비 사이트 처리 실험실로 배송 될 수 있습니다. 스테인드 튜브가 해결 될 수 있습니다및 다색의 유동 세포 계측법 분석을위한 중앙 분석 실험실에 배송을 위해 냉동. 이 착색 패널에서 생성 된 데이터는 개입과 관련하여 시간이 지남에 따라 백혈구 농도의 변화를 추적 할 쉽게 더 관심의 특정 세포 유형의 활성화 상태를 평가하기 위해 개발 될 수 사용할 수 있습니다. 이 보고서에서 우리는 신선한 전체 혈액 및 multicenter 임상 실험을 지원하는 중앙 검정 실험실에서 이러한 스테인드 샘플을 분석하는 단계에 착색을 수행 할 혈액 처리 연구실 기술자가 사용하는 절차를 보여줍니다. 비디오 정보는 HIV 백신 평가판 네트워크 (HVTN)에 임상 시험 혈액 추첨의 컨텍스트에서 수행되기 때문에 절차.

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Enumeration of Major Peripheral Blood Leukocyte Populations for Multicenter Clinical Trials Using a Whole Blood Phenotyping Assay

이 보고서에서, 우리는 주요 타고난 및 적응 백혈구 인구를 열거하는 신선한 전체 혈액에서 수행 phenotyping 분석의 착색 및 분석 단계를 보여줍니다. 우리는 multicenter 임상 실험의 맥락에서이 절차를 수행하기위한 고려 사항을 강조.

전체 혈액 Phenotyping 분석을 사용하여 Multicenter 임상 시험을위한 주요 말초 혈 백혈구 인구의 열거

Cryopreservation of peripheral blood leukocytes is widely used to preserve cells for immune response evaluations in clinical trials and offers many ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

보완 고갈에 의해 특정 세포 집단의 고갈

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

연구

면역학 및 감염병학

Expansion, Purification, and Functional Assessment of Human Peripheral Blood NK Cells

확장, 정화, 그리고 사람 말초혈 NK 세포 기능 평가

Natural killer (NK) cells play an important role in immune surveillance against a variety of infectious microorganisms and tumors. Limited availability of ...

Expansion of Human Peripheral Blood  &gamma;&delta; T Cells using Zoledronate

Expansion of Human Peripheral Blood  ÃƒÅ½Ã‚Â³ÃƒÅ½Ã‚Â´ T Cells using Zoledronate

Zoledronate를 사용하는 사람 말초혈의 확장 γδ T 세포

Human &gamma;&delta; T cells can recognize and respond to a wide variety of stress-induced antigens, thereby developing innate broad anti-tumor and ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

세균성 접착 연구에 전단 응력을 소개합니다

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

A Functional Whole Blood Assay to Measure Viability of Mycobacteria, using Reporter-Gene Tagged BCG or M.Tb (BCG lux/M.Tb lux)

A Functional Whole Blood Assay to Measure Viability of Mycobacteria, using Reporter-Gene Tagged BCG or M.Tb BCG lux/M.Tb lux

Mycobacteria의 가능성을 측정하는 기능 전체 혈액 분석은 리포터 - 진 BCG 또는 M. TB (BCG 태그 사용 럭스 / M. TB 럭스)

Functional assays have long played a key role in measuring of immunogenicity of a given vaccine. This is conventionally expressed as serum bactericidal ...

Fast and Specific Assessment of the Halogenating Peroxidase Activity in Leukocyte-enriched Blood Samples

백혈구가 풍부한 혈액 샘플의 할로겐 퍼 옥시 다제 활동의 신속하고 구체적인 평가

In this paper a protocol for the quick and standardized enrichment of leukocytes from small whole blood samples is described. This procedure is based on ...

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate Fc&#947; Receptor-mediated Phagocytosis

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate FcÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³ Receptor-mediated Phagocytosis

단핵구 단층 분석의 사용은 Fcγ 수용체 - 매개 식균 작용을 평가하기

Although originally developed for predicting transfusion outcomes of serologically incompatible blood, the monocyte monolayer assay (MMA) is a highly ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

Dextran Murine 및 인간의 기본 NK 세포의 Lentiviral 변환 효율 향상

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Single-cell Analysis of Immunophenotype and Cytokine Production in Peripheral Whole Blood via Mass Cytometry

Immunophenotype 및 Cytokine 생산 대량 Cytometry 통해 주변 전 혈의 단일 세포 분석

Cytokines play a pivotal role in the pathogenesis of autoimmune diseases. Hence, the measurement of cytokine levels has been the focus of multiple studies ...

Characterization of Human Monocyte Subsets by Whole Blood Flow Cytometry Analysis

전체 혈액에 의해 인간 Monocyte 하위 집합의 Flow Cytometry 분석

Monocytes are key contributors in various inflammatory disorders and alterations to these cells, including their subset proportions and functions, can ...