Name: enumeration of major peripheral blood leukocyte populations for multicenter clinical trials using a whole blood phenotyping assay
Uploaded: 2012-09-16T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Enumeration of Major Peripheral Blood Leukocyte Populations for Multicenter Clinical Trials Using a Whole Blood Phenotyping Assay at JoVE.com

Bu yöntem, el yazması ve video gelişiminde onların yardım için Jessica Jones, Erica Clark, Constance Ducar, Donna Smith, Roy Lewis, Lily Apedaile, Joanne Wiesner, Devin Adams, Corey McBain ve Stephen Voght ederim. Bu çalışma Bill ve Melinda Gates Vakfı CAVD hibe 38645 (MJM) ve Sağlık hibe Ulusal Sağlık Enstitüleri UM1 AI068618 ve U01 AI069481 (MJM) tarafından desteklenmiştir. EA-N. NIH Grant T32 AI007140 tarafından desteklenmektedir. Biz onların cömert donanım bağışı için James B. Pendleton Charitable Trust ederim.

Not: ışıktan fluorofor konjuge antikorlar korumak için, ışığı bir biyo-güvenlik kabini tüm adımları gerçekleştirin. 1. Antikor Boyama Paneli Hazırlama <ol><li> Antikor boyama pano Tablo 1 &#39;de bulunabilir. Antikor konsantrasyonu bütün kan ile titrasyon ile belirlenen ve aynı akış sitometrisi ekipman ve lekeli fenotipleme numuneleri elde etmek için kullanılacak olan prosedürler kullanılarak verilmelidir. </li><li> Uygun boyama titreleri ...

<ol>
	<li>Taylor, M. J., London, N. J., Thirdborough, S. M., Lake, S. P., James, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cryobiology+of+rat+and+human+dendritic+cells:+preservation+and+destruction+of+membrane+integrity+by+freezing.">The cryobiology of rat and human dendritic cells: preservation and destruction of membrane integrity by freezing.</a> Cryobiology. 27, 269-278 (1990).</li><li>Reimann, K. A., Chernoff, M., Wilkening, C. L., Nickerson, C. E., Landay, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preservation+of+lymphocyte+immunophenotype+and+proliferative+responses+in+cryopreserved+peripheral+blood+mononuclear+cells+from+human+immunodeficiency+virus+type+1-infected+donors:+implications+for+multicenter+clinical+trials.+The+ACTG+Immunology+Advanced+Technology+Laboratories.">Preservation of lymphocyte immunophenotype and proliferative responses in cryopreserved peripheral blood mononuclear cells from human immunodeficiency virus type 1-infected donors: implications for multicenter clinical trials. The ACTG Immunology Advanced Technology Laboratories.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 7, 352-359 (2000).</li><li>Boonlayangoor, P., Telischi, M., Boonlayangoor, S., Sinclair, T. F., Millhouse, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+human+granulocytes:+study+of+granulocyte+function+and+ultrastructure.">Cryopreservation of human granulocytes: study of granulocyte function and ultrastructure.</a> Blood. 56, 237-245 (1980).</li><li>Perfetto, S. P., Ambrozak, D., Nguyen, R., Chattopadhyay, P., Roederer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+assurance+for+polychromatic+flow+cytometry.">Quality assurance for polychromatic flow cytometry.</a> Nat Protoc. 1, 1522-1530 (2006).</li><li>Brando, B., Barnett, D., Janossy, G., Mandy, F., Autran, B., Rothe, G., Scarpati, B., D'Avanzo, G., D'Hautcourt, J. L., Lenkei, R., Schmitz, G., Kunkl, A., Chianese, R., Papa, S., Gratama, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytofluorometric+methods+for+assessing+absolute+numbers+of+cell+subsets+in+blood.+European+Working+Group+on+Clinical+Cell+Analysis.">Cytofluorometric methods for assessing absolute numbers of cell subsets in blood. European Working Group on Clinical Cell Analysis.</a> Cytometry. 42, 327-346 (2000).</li><li>Bull, M., Lee, D., Stucky, J., Chiu, Y. L., Rubin, A., Horton, H., McElrath, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+blood+processing+parameters+for+optimal+detection+of+cryopreserved+antigen-specific+responses+for+HIV+vaccine+trials.">Defining blood processing parameters for optimal detection of cryopreserved antigen-specific responses for HIV vaccine trials.</a> J. Immunol Methods. 322, 57-69 (2007).</li><li>Kantor, A. B., Roederer, M., Herzenberg, L., Blackwell, C., Weir, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The handbook of Experimental Immunology. 43, 1-49 (1996).</li><li>Hulspas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+and+the+stability+of+phycoerythrin-tandem+dye+conjugates.">Flow cytometry and the stability of phycoerythrin-tandem dye conjugates.</a> Cytometry A. 75, 966-972 (2009).</li><li>Le Roy, C., Varin-Blank, N., Ajchenbaum-Cymbalista, F., Letestu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+APC-tandem+dyes+are+degraded+through+a+cell-dependent+mechanism.">Flow cytometry APC-tandem dyes are degraded through a cell-dependent mechanism.</a> Cytometry A. 75, 882-890 (2009).</li><li>Mandy, F., Brando, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enumeration+of+absolute+cell+counts+using+immunophenotypic+techniques.">Enumeration of absolute cell counts using immunophenotypic techniques.</a> Curr. Protoc. Cytom. Chapter 6, Unit 6 (2001).</li><li>Vuckovic, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+dendritic+cells+in+clinical+practice+using+a+new+whole+blood+single-platform+TruCOUNT+assay.">Monitoring dendritic cells in clinical practice using a new whole blood single-platform TruCOUNT assay.</a> J. Immunol Methods. 284, 73-87 (2004).</li><li>Lichtner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+dendritic+cells+and+interferon-alpha+production+in+patients+with+tuberculosis:+correlation+with+clinical+outcome+and+treatment+response.">Circulating dendritic cells and interferon-alpha production in patients with tuberculosis: correlation with clinical outcome and treatment response.</a> Clin. Exp. Immunol. 143, 329-337 (2006).</li><li>Hosmalin, A., Lichtner, M., Louis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+analysis+of+dendritic+cell+subsets:+the+dendritogram.">Clinical analysis of dendritic cell subsets: the dendritogram.</a> Methods Mol. Biol. 415, 273-290 (2008).</li></ol>

Bu yazıda, flow sitometri ile taze tam kan lökosit popülasyonlarının numaralandırma için bir boncuk-tabanlı bir yöntem sunmak ve merkezi numune analizi ile çok merkezli bir klinik çalışmada kullanılması için gerekli parametreleri kapsamaktadır. Bu yöntem üzerine kurulmuş ve BD Trucount protokolü optimize eder ve çok merkezli klinik ortamda güvenilir kullanım sağlar. Boyama testi basit ve uygulanabilir kan işleme laboratuar teknisyenleri bunu gerçekleştirmek için ve analiz için merkezi bir t...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Mutlak Sayım Tüpler Trucount </td><td> BD Biosciences </td><td> 340334 </td></tr><tr><td> 10X FACS Çözüm Lysing </td><td> BD Biosciences </td><td> 349202 </td></tr><tr><td> İzoleli Kategori B &amp; Muaf Nakliye Sistemi, </td><td> Saf-T-Pak </td><td> STP-320 </td></tr><tr><td> AmCyan CD45 monoklonal antikor </td><td> BD Biosciences </td><td> 339192 </td></tr><tr><td> FITC CD3 monoklonal antikor </td><td> BD Biosciences </td><td> 349201 </td></tr><tr><td> CD8 PerCp-Cy 5.5 monoklonal antikor </td><td> BD Biosciences </td><td> 341051 </td></tr><tr><td> CD4 Alexa Fluor 700 monoklonal antikorlardy </td><td> BD Biosciences </td><td> 557922 </td></tr><tr><td> HLA-DR ECD monoklonal antikoru </td><td> Beckman Coulter </td><td> IM3636 </td></tr><tr><td> V450 CD14 monoklonal antikor </td><td> BD Biosciences </td><td> 560349 </td></tr><tr><td> PE CD19 monoklonal antikor </td><td> BD Biosciences </td><td> 555413 </td></tr><tr><td> CD16 APC-H7 monoklonal antikor </td><td> BD Biosciences </td><td> 560195 </td></tr><tr><td> CD56-PE Cy7 monoklonal antikor </td><td> BD Biosciences </td><td> 335791 </td></tr><tr><td> CD11c APC monoklonal antikor </td><td> BD Biosciences </td><td> 559877 </td></tr><tr><td> CD123 PE-Cy5 monoklonal antikor </td><td> BD Biosciences </td><td> 551065 </td></tr></tbody></table>

enumeration of major peripheral blood leukocyte populations for multicenter clinical trials using a whole blood phenotyping assay

Periferik kan lökositleri Kriyoprezervasyon yaygın klinik çalışmalarda bağışıklık yanıtı değerlendirme için hücreleri korumak için kullanılan ve immünolojik değerlendirme kolaylığı ve standardizasyon için birçok avantaj sunmaktadır, ancak bu sürecin olumsuz etkileri, granülosit gibi bazı hücre alt, B hücreleri üzerinde gözlenmiştir edilir , 1-3 ve dendritik hücreler. Taze lökositleri assaying hücrelerinin in vivo durumda daha doğru bir görüntü verir, ancak sık sık büyük klinik çalışmalarda bağlamında gerçekleştirmek zordur. Taze hücresi tayinlerinde zaman alıcı varsa, bunların uygulama nedeniyle laboratuvar personelinin gerekli çalışma saatleri için pratik olabilir, gönüllü taahhütler ve zamanlamalar bağlıdır ve. Buna ek olarak, çalışmalar birden fazla merkezde yürütülen zaman, testleri gerçekleştirmek için gerekli kaynakları ve eğitim laboratuvarları klinik siteleri için yeterli yakınında yer olmayabilir. Bu sorunları çözmek için, var develBöyle bir gibi testlere göre daha güçlü bir hücre tipinde belirli bir bilgi elde edilmesinde, fenotip için ve periferik kan içinde büyük lökosit popülasyonları numaralandırmasına; Trucount tüpler (San Jose, CA Becton Dickinson) ile birlikte kullanılabilecek bir 11 renkli antikor boyama paneli intravazasyonunda tam kan sayımı (CBC) veya sadece birkaç hücre tipleri için leke Trucount tüpler için tasarlanmış piyasada bulunan paneller ile ölçülür. Boyama işlemi basittir, taze tam kan sadece 100 ul gerektirir ve uygulanabilir standart kan işleme laboratuarları gerçekleştirmek için yapım, yaklaşık 45 dakika sürer. Bu BD Trucount tüp teknik föy (uyarlanmıştır <a href="http://www.bdbiosciences.com/external_files/is/doc/tds/Package_Inserts_CE/live/web_enabled/23-3483-06_PI_Trucount tubes_CE_EN.pdf" target="_blank">sürüm 8/2010</a> ). Boyama antikor kokteyli merkezi bir tahlil laboratuvarından toplu olarak önceden hazırlanan ve site işleme laboratuarları sevk edilebilir. Vitray tüpler sabit olabilirve renkli akım sitometri analizi için merkezi tahlil laboratuvarından gönderilmek için dondurulmuş. Bu boyama panelinden üretilen veri müdahale ile ilgili olarak zaman içinde lökosit konsantrasyonlarda değişiklikleri izlemek için ve kolay bir şekilde daha fazla ilgi belirli hücre tipleri aktivasyonu durumları değerlendirmek için geliştirilmiş olabilir kullanılabilir. Bu yazıda, taze tam kan ve çok merkezli klinik araştırma merkezi bir destek tahlil laboratuvarında bu lekeli numunelerin analiz adımları boyama gerçekleştirmek için kan işleme laboratuvar teknisyenleri tarafından kullanılan yordam göstermek. Video ayrıntılar bu HIV aşısı Denemeler Ağı (HVTN) içinde bir klinik deneme kan alımından bağlamında yapılır gibi işlem.

Watch this Scientific Journal Video about Enumeration of Major Peripheral Blood Leukocyte Populations for Multicenter Clinical Trials Using a Whole Blood Phenotyping Assay at JoVE.com

Enumeration of Major Peripheral Blood Leukocyte Populations for Multicenter Clinical Trials Using a Whole Blood Phenotyping Assay

Bu raporda, biz büyük doğal ve adaptif lökosit popülasyonlarının numaralandırmak için taze tam kan üzerinde gerçekleştirilen bir feno testinin boyama ve analiz adımları göstermektedir. Biz çok merkezli klinik çalışma kapsamında bu işlemler gerçekleştirmek için konuları vurgulamaktadır.

Bir Tam Kan fenotipleme Testi Kullanarak Çok Merkezli Klinik Araştırmalar için Binbaşı Periferik Kan Lökosit Populasyonlarının Numaralama

Cryopreservation of peripheral blood leukocytes is widely used to preserve cells for immune response evaluations in clinical trials and offers many ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

Kompleman tükenmesi Özel Hücre Populasyonlarının tükenmesi

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Expansion, Purification, and Functional Assessment of Human Peripheral Blood NK Cells

Genişleme, Saflaştırılması, ve İnsan Periferik Kan NK Hücrelerinin Fonksiyonel Değerlendirme

Natural killer (NK) cells play an important role in immune surveillance against a variety of infectious microorganisms and tumors. Limited availability of ...

Expansion of Human Peripheral Blood  &gamma;&delta; T Cells using Zoledronate

Expansion of Human Peripheral Blood  ÃƒÅ½Ã‚Â³ÃƒÅ½Ã‚Â´ T Cells using Zoledronate

Zoledronate İnsan Periferik Kan Genişleme γδ T Hücreler

Human &gamma;&delta; T cells can recognize and respond to a wide variety of stress-induced antigens, thereby developing innate broad anti-tumor and ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Bakteriyel Yapışma Çalışma Kesme Stres Tanıtımı

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

A Functional Whole Blood Assay to Measure Viability of Mycobacteria, using Reporter-Gene Tagged BCG or M.Tb (BCG lux/M.Tb lux)

A Functional Whole Blood Assay to Measure Viability of Mycobacteria, using Reporter-Gene Tagged BCG or M.Tb BCG lux/M.Tb lux

Mikobakteriler canlılık Tedbir Fonksiyonel Tam Kan Testi, Reporter Gen BCG veya M. Tb (BCG Takip edilen konu kullanarak Lüks / M. Tb Lüks)

Functional assays have long played a key role in measuring of immunogenicity of a given vaccine. This is conventionally expressed as serum bactericidal ...

Fast and Specific Assessment of the Halogenating Peroxidase Activity in Leukocyte-enriched Blood Samples

Lökosit zenginleştirilmiş Kan Örneklerinde Halojenleyici Peroksidaz Faaliyet Hızlı ve Özgül Değerlendirme

In this paper a protocol for the quick and standardized enrichment of leukocytes from small whole blood samples is described. This procedure is based on ...

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate Fc&#947; Receptor-mediated Phagocytosis

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate FcÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³ Receptor-mediated Phagocytosis

Bir Monosit Tek tabakalı Testi Kullanımı Fcy reseptör aracılı fagositoz değerlendirin

Although originally developed for predicting transfusion outcomes of serologically incompatible blood, the monocyte monolayer assay (MMA) is a highly ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

Dextran fare ve insan birincil NK hücreleri Lentiviral iletim verimliliğini artırır

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Single-cell Analysis of Immunophenotype and Cytokine Production in Peripheral Whole Blood via Mass Cytometry

Tek hücreli Immunophenotype ve sitokin üretimde kitle sitometresi ile periferik tam kan analizi

Cytokines play a pivotal role in the pathogenesis of autoimmune diseases. Hence, the measurement of cytokine levels has been the focus of multiple studies ...

Characterization of Human Monocyte Subsets by Whole Blood Flow Cytometry Analysis

İnsan monosit alt kümeleri tam kan tarafından karakterizasyonu Akış Sitometresi Analizi

Monocytes are key contributors in various inflammatory disorders and alterations to these cells, including their subset proportions and functions, can ...