Name: dissection and immunohistochemistry of larval, pupal and adult drosophila retinas
Uploaded: 2012-11-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas at JoVE.com

Diese Arbeit wurde durch ein Ehrman Stipendium für HY unterstützt. H., Jane Coffin Childs Memorial Fund for Medical Research Postdoc-Stipendium, um RJJ, NIH Grant F32EY016309 auf DV, ein New York University Deans Dissertation Fellowship DJ, NIH GrantR01 EY13010 auf CD und ein DFG-Stipendium für JR (RI 2208/1- 1). Wir danken Nina Vogt und Pamela Boodram für Kommentare zum Manuskript.

Ein. Einführung In diesem Video beschreiben wir Methoden zur Netzhaut Dissektionen und Immunhistochemie an drei definierten Entwicklungszeiten: die dritte Larvenstadium Larvenstadium, das midpupal und die erwachsenen Stadium. Obwohl unser Protokoll auch für andere Puppen Stufen (für Details auf die früheren Stadien, siehe 16), wählten wir die midpupal Bühne, wie es optimal für die Bildgebung ist alles PRs in einer Brennebene und ihre Kerne sind leicht zu identifizieren, die e...

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	<li>Ready, D. F., Hanson, T. E., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+Drosophila+retina,+a+neurocrystalline+lattice.">Development of the Drosophila retina, a neurocrystalline lattice.</a> Dev. Biol. 53, 217-240 (1976).</li><li>Hardie, R. C., D, O. t. t. o. s. o. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+organization+of+the+fly+retina.">Functional organization of the fly retina.</a> Sensory Physiology. 5, 1-79 (1985).</li><li>O'Tousa, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+ninaE+gene+encodes+an+opsin.">The Drosophila ninaE gene encodes an opsin.</a> Cell. 40, 839-850 (1985).</li><li>Zuker, C. S., Cowman, A. F., Rubin, G. 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Ein. Fehlerbehebung Nach unserer Erfahrung erfordern Dissektionen Praxis (bis zu mehreren Wochen) und werden durch das Erreichen eine bequeme Handhaltung 21 durch ruhen die Ellenbogen und Unterarme auf den Tisch und mit den Fingern in Kontakt mit der Dissektion Gericht erleichtert. Auf diese Weise wird nur der Daumen, Zeigefinger und Mittelfinger durchführen subtilen Bewegungen. Entfernen der Lamina ohne Beschädigung der Photorezeptoren ist wahrscheinli...

<table border="1"><tr><td></td><td></td><td></td><td> Reagens </td></tr><tr><td> Phosphat-gepufferte Salzlösung (PBS1x, pH 7,4) </td><td> Sigma </td><td></td><td> Bereiten 10x Stammlösung 20. Verdünnen mit destilliertem Wasser auf 1x PBS und bei Raumtemperatur lagern zu erhalten. Kühlen auf Eis, bevor Dissektionen. </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Sigma </td><td> 9002-93-1 </td><td> Achtung: Reizend Handschuhe tragen. Planen 50 ml 1xPBS mit 0,3% Triton X-100 (PBST). Lagerung bei Raumtemperatur. </td></tr><tr><td> 37% Formaldehyd-Lösung </td><td> Fisher Scientific </td><td> F75P1GAL </td><td> Achtung: Giftig, wahrscheinlich krebserzeugend für den Menschen Handschuhe tragen. Vor der Fixierung, frisch zubereiten 3,7% ige Lösung in einer chemischen Abzugshaube durch Verdünnen mit PBS, auf Eis lagern. </td></tr><tr><td> 5% normalem Pferdeserum </td><td> Jackson Immuno Research </td><td> 008-000-001 </td><td> Planen 5% v / v verdünnt in PBST. Bewahren Sie bei vier Grad. </td></tr><tr><td> Primäre und sekundäre Antikörper (zB Esel anti-Schaf Alexa Fluor 488, Esel-Anti-Kaninchen-Alexa Fluor 555, Esel anti-Maus Alexa Fluor 647) </td><td> Invitrogen Molecular Probes </td><td> A11015 A31572 A31571 </td><td> Verdünnen Sekundärantikörper 1:800 in PBST und lagern bei vier Grad. </td></tr><tr><td> Alexa Fluor 488 Phalloidin </td><td></td><td> A12379 </td><td> Verdünnen 1:100 in sekundären Antikörper-Lösung. </td></tr><tr><td> Slowfade Gold-Antifade Reagenz </td><td> Invitrogen Molecular Probes </td><td> S36936 </td><td> Eindeckmedium. Lagerung bei -20 Grad. </td></tr><tr><td> Glycerol </td><td> Fisher Scientific </td><td> G31-1 </td><td> Für die Montage. Bereiten 10 ml 50% iger Verdünnung mit destilliertem Wasser, Lagerung bei Raumtemperatur. </td></tr><tr><td> CO 2 </td><td></td><td></td><td> Für Betäubung erwachsenen Fliegen. </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Ausrüstung </td></tr><tr><td> Zwei scharfe Pinzette (Dumont # 55) </td><td> Fine Science Tools </td><td> 11255-20 </td><td></td></tr><tr><td> Sylgard 184 Silikon-Elastomer Kit </td><td> Dow Corning </td><td></td><td> Planen Sylgard Dissektion Schale durch Füllen einer Kunststoff-Petrischale mit Sylgard Mischung. </td></tr><tr><td> Drei-well Glas Dissektion Gerichten </td><td> Fisher Scientific </td><td> 21-379 </td><td></td></tr><tr><td> Two minutien Sezieren Stifte (0,1 mm Durchmesser) und zwei pinholders (12 cm) </td><td> Fine Science Tools </td><td> 26002-10 </td><td> Legen ein minutien Stiftes in jeder der beiden pinholders und beugen einer der Stifte, um einen Haken zu bilden. </td></tr><tr><td> Microscope Deckgläschen (22x22-1 und 24x40-1) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-542A </td><td></td></tr><tr><td> Objektträger (25x75x1.0 mm; vorgereinigt) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-550-143 </td><td></td></tr><tr><td> 1,5 ml Reaktionsgefäße </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Klaren Nagellack oder Klebeband </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Kreisschüttler </td><td> Bellco </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Diahalter box </td&gt; <td> Fisher Scientific </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> Bemis </td><td> PM996 </td><td></td></tr><tr><td> Dünnen Pinsel </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> P20 und P200 Mikropipetten und Tipps </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Seziermikroskop </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Kleine Eimer mit Eis </td><td></td><td></td><td> Zur Kühlung der Glas-Well-Platten, seziert Netzhaut und Lösungen. </td></tr></table>

dissection and immunohistochemistry of larval, pupal and adult drosophila retinas

Das Facettenauge von Drosophila melanogaster besteht aus etwa 750 Ommatidien (Einheit Augen). Jeder Ommatidium wird von etwa 20 Zellen, einschließlich Objektiv-sezernierenden Zapfenzellen, Pigmentzellen, einer Borste Zelle und acht Photorezeptoren (PRs) R1-R8 2 zusammen. Die PRs spezialisiert haben microvillar Strukturen, die Rhabdomeren, die lichtempfindliche Pigmente, die Rhodopsine (RHS) enthalten. Die Rhabdomere sechs PRs (R1-R6) ein Trapez bilden und enthalten Rh1 3 4. Die Rhabdomere von R7 und R8 im Tandem in die Mitte des Trapezes positioniert und den gleichen Weg des Lichtes. R7 und R8 PRs stochastisch exprimieren verschiedene Kombinationen von Rhs in zwei Subtypen 5: Im &#39;p&#39; Subtyp, Rh3 in p R7s mit RH5 in p R8S gekoppelt ist, während in der &#39;y&#39; Subtyp, Rh4 in y R7s zugeordnet ist Rh6 in y R8S 6 7 8. Frühe Angabe PRs und Entwicklung Ommatidien beginnt in der larvalen Auge antennalen Imaginalscheibe eine Monoschicht von Epithelzellen. Eine Welle der Differenzierung fegt über die Scheibe 9 und initiiert den Aufbau von undifferenzierten Zellen in Ommatidien 10-11. Die Gründer Zelle R8 wird in erster angegebenen rekrutiert R1-6 und dann R7 12-14. Anschließend, während Puppenentwicklung führt PR Differenzierung umfangreiche morphologische Veränderungen 15, einschließlich rhabdomere Bildung, Synaptogenese und schließlich rh Ausdruck. In diesem Protokoll beschreiben wir Methoden zur Netzhaut Dissektionen und Immunhistochemie an drei definierten Zeiträume der Netzhaut Entwicklung, die Anwendung auf eine Vielzahl von Fragen Netzhaut Bildung und Entwicklungswege angesprochen werden können. Hier verwenden wir diese Methoden, um die schrittweise PR Differenzierung am Ebene einzelner Zellen in whole mount Larven, midpupal und erwachsenen Netzhaut visualisieren ( <sTrong&gt; Abbildung 1).

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Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas

Die<em&gt; Drosophila</em&gt; Netzhaut ist eine kristallartige Gitter aus einer kleinen Anzahl von Zelltypen, die in einer stereotypen Art und Weise erzeugt werden zusammengesetzt<sup&gt; 1</sup&gt;. Seine Eignung für anspruchsvolle genetische Analyse ermöglicht die Untersuchung von komplexen Entwicklungs-Programme. Dieses Protokoll beschreibt Dissektionen und Immunhistochemie von Netzhaut an drei diskrete Entwicklungsstufen, mit einem Fokus auf Photorezeptor Differenzierung.

Dissektion und Immunhistochemie von Larven, Puppen und Erwachsenenbildung<em&gt; Drosophila</em&gt; Netzhäute

The compound eye of Drosophila melanogaster consists of about 750 ommatidia (unit eyes). Each ommatidium is composed of about 20 cells, including ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas

Mapping and Application of Enhancer-trap Flippase Expression in Larval and Adult Drosophila CNS

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The Gal4/ UAS binary method is powerful for gene and neural circuitry manipulation in Drosophila. For most neurobiological studies, however, Gal4 ...

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Single Drosophila Ommatidium Dissection and Imaging

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The fruit fly Drosophila melanogaster has made invaluable contributions to neuroscience research and has been used widely as a model for neurodegenerative ...

Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection

Dissektion der erwachsenen Maus Utriculus und Adenovirus-vermittelten Hilfs-Zell-Infektion

Hearing loss and balance disturbances are often caused by death of mechanosensory hair cells, which are the receptor cells of the inner ear.  Since there ...

Functional Analysis of the Larval Feeding Circuit in Drosophila

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Funktionelle Analyse der Larvenfütterung Circuit in Drosophila</i

The serotonergic  feeding circuit in Drosophila  melanogaster larvae can be used to investigate neuronal substrates of  critical importance during the ...

Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts

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Live-Imaging von<em&gt; Drosophila</em&gt; Larven Neuroblasten

Stem cells divide asymmetrically to generate two progeny cells with unequal fate potential: a self-renewing stem cell and a differentiating cell. Given ...

Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective

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Erwerb von qualitativ hochwertigen digitalen Video<em&gt; Drosophila</em&gt; Larven und Verhalten der Erwachsenen aus einer seitlichen Perspektive

Drosophila melanogaster is a powerful experimental model system for studying the function of the nervous system. Gene mutations that cause dysfunction of ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

Ganze Berge Dissection und Immunfluoreszenz der erwachsenen Maus Cochlea

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

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Linear Agarose Kanäle zu studieren<em&gt; Drosophila</em&gt; Larval Krabbeln Verhalten

Drosophila larval crawling is emerging as a powerful model to study neural control of sensorimotor behavior. However, larval crawling behavior on flat ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

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Eine einfache Ein-Schritt-Dissection-Protokoll für Whole-mount Vorbereitung von Adult<em&gt; Drosophila</em&gt; Brains

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Metabolic Analysis of Drosophila melanogaster Larval and Adult Brains

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Stoffwechselanalyse von Drosophila Melanogaster Schildzecken und erwachsenen Gehirn

This protocol describes a method for measuring the metabolism in Drosophila melanogaster larval and adult brains. Quantifying metabolism in whole organs ...