Name: dissection and immunohistochemistry of larval, pupal and adult drosophila retinas
Uploaded: 2012-11-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas at JoVE.com

この作品はHYにEhrmanの交わりによってサポートされていました。 H.、DV、JRにニューヨーク大学ディーンの論文をCDにDJのフェローシップは、NIH GrantR01 EY13010とDFG交わりRJJ、NIHグラントF32EY016309に医学研究ポスドクのためのジェーン棺チャイルズメモリアル基金（RI 2208/1- 1）。我々は、原稿上のコメントのためのニーナ·フォークトとパメラBoodramに感謝します。

1。はじめに三齢幼虫、midpupalと成虫：このビデオでは、3つの定義済みの発達期間における網膜の解剖および免疫組織化学のための方法を説明します。我々のプロトコルは、他の蛹の段階のために動作しますが（それ以前の段階の詳細については、16を参照）は、1つの焦点面とその核にイメージングのためのすべてのPRに最適であるように、我々は、midpupal舞台を選...

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	<li>Ready, D. F., Hanson, T. E., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+Drosophila+retina,+a+neurocrystalline+lattice.">Development of the Drosophila retina, a neurocrystalline lattice.</a> Dev. Biol. 53, 217-240 (1976).</li><li>Hardie, R. C., D, O. t. t. o. s. o. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+organization+of+the+fly+retina.">Functional organization of the fly retina.</a> Sensory Physiology. 5, 1-79 (1985).</li><li>O'Tousa, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+ninaE+gene+encodes+an+opsin.">The Drosophila ninaE gene encodes an opsin.</a> Cell. 40, 839-850 (1985).</li><li>Zuker, C. S., Cowman, A. F., Rubin, G. 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J., Kussell, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stochastic+De-repression+of+Rhodopsins+in+Single+Photoreceptors+of+the+Fly+Retina.">Stochastic De-repression of Rhodopsins in Single Photoreceptors of the Fly Retina.</a> PLoS Comput. Biol. 8, e1002357 (2012).</li><li>Johnston, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interlocked+feedforward+loops+control+cell-type-specific+Rhodopsin+expression+in+the+Drosophila+eye.">Interlocked feedforward loops control cell-type-specific Rhodopsin expression in the Drosophila eye.</a> Cell. 145, 956-968 (2011).</li><li>Jukam, D., Desplan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binary+regulation+of+Hippo+pathway+by+Merlin/NF2,+Kibra,+Lgl,+and+Melted+specifies+and+maintains+postmitotic+neuronal+fate.">Binary regulation of Hippo pathway by Merlin/NF2, Kibra, Lgl, and Melted specifies and maintains postmitotic neuronal fate.</a> Dev. Cell. 21, 874-887 (2011).</li><li>Vasiliauskas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feedback+from+rhodopsin+controls+rhodopsin+exclusion+in+Drosophila+photoreceptors.">Feedback from rhodopsin controls rhodopsin exclusion in Drosophila photoreceptors.</a> Nature. 479, 108-112 (2011).</li><li>Kumar, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Building+an+ommatidium+one+cell+at+a+time.">Building an ommatidium one cell at a time.</a> Dev. Dyn. 241, 136-149 (2012).</li></ol>

1。トラブルシューティング我々の経験では、解剖の練習（最大〜数週間）が必要で、テーブルの上に、解剖皿に接触して指で肘や前腕を置くことによって快適な手の位置21を達成することによって促進される。そのように、唯一の親指、人差し指と中指が微妙な動きを実行します。 感光体を傷つけることなく薄層を除去することは、?...

<table border="1"><tr><td></td><td></td><td></td><td> 試薬 </td></tr><tr><td> （PBS1x、pH7.4）をリン酸緩衝生理食塩水</td><td>シグマ</td><td></td><td> 10倍原液20を準備します。室温で1×PBSでストアを取得するために蒸留水で希釈します。解剖の前に氷の上で冷やす。 </td></tr><tr><td>トリトンX-100 </td><td>シグマ</td><td> 9002-93-1 </td><td> 注意：刺激性の手袋を着用してください。 0.3パーセントのTriton X-100（PBST）で50ml 1xPBSを準備します。室温で保管してください。 </td></tr><tr><td> 37％ホルムアルデヒド溶液</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> F75P1GAL </td><td> 注意：有毒、推定ヒト発がん性物質は、手袋を着用してください。固定ステップの前に、新たにPBSで希釈することにより化学ヒュームフードの3.7％溶液を調製し、氷上店。 </td></tr><tr><td> 5％正常ウマ血清</td><td>ジャクソンイムノリサーチ</td><td> 008-000-001 </td><td> PBSTで5％（v / v）の希釈液を調製します。 4℃で保管してください。 </td></tr><tr><td>一次抗体および二次抗体（ 例えばロバ抗ヒツジのAlexa Fluor 488、ロバ抗ウサギのAlexa Fluor 555、ロバ抗マウスのAlexa Fluor 647） </td><td> Invitrogenのモレキュラープローブ</td><td> A11015 A31572 A31571 </td><td> 4度でPBST及び​​店舗で1:800二次抗体を希釈します。 </td></tr><tr><td>のAlexa Fluor 488ファロイジン</td><td></td><td> A12379 </td><td>二次抗体溶液で1:100に希釈します。 </td></tr><tr><td> Slowfadeゴールド褪色防止試薬</td><td> Invitrogenのモレキュラープローブ</td><td> S36936 </td><td>メディアのマウント。 -20℃で保存してください。 </td></tr><tr><td> GlyceROL </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> G31-1 </td><td>取付用。室温で蒸留水、店舗で50％希釈液10mlを準備します。 </td></tr><tr><td> CO 2 </td><td></td><td></td><td>ハエの成虫を麻酔するため。 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 機器 </td></tr><tr><td> 2つの鋭い鉗子（デュモン＃55） </td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11255から20 </td><td></td></tr><tr><td>シルガード184シリコーンエラストマーキット</td><td>ダウコーニング</td><td></td><td>シルガード混合物でプラスチックシャーレを充填することにより、シルガード郭清皿を準備します。 </td></tr><tr><td>スリーウェルガラス解剖皿</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 21から379 </td><td></td></tr><tr><td> TWO minutien解剖ピン（0.1ミリメートル径）と2 pinholders（12 cm）の</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 26002から10 </td><td> 2 pinholdersのそれぞれに1 minutienピンを挿入し、フックを形成するために、ピンの1つを曲げる。 </td></tr><tr><td>顕微鏡カバースリップ（22x22の24x40-1とA-1） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 12-542A </td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡スライド（25x75x1.0ミリメートル;予備洗浄） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 12-550-143 </td><td></td></tr><tr><td> 1.5 mlのマイクロチューブ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>マニキュアやセロテープをクリア</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>オービタルシェーカー</td><td>ベルコ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>スライドホルダーボックス</tD&gt; <td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td></td><td></td></tr><tr><td>パラフィルム</td><td>ビーミス</td><td> PM996 </td><td></td></tr><tr><td>細い絵筆</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> P20とP200のピペットとヒント</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>解剖顕微鏡</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>氷と一緒に小さなバケツ</td><td></td><td></td><td>ガラスウェルプレート、解剖網膜やソリューションを冷却する。 </td></tr></table>

dissection and immunohistochemistry of larval, pupal and adult drosophila retinas

キイロショウジョウバエの複眼は約750 ommatidiumの複数形（ユニット目）から構成されています。それぞれの個眼は、レンズを分泌する錐体細胞、色素細胞、毛細胞と8つの光受容体（PRS）R1〜R8 2を含む約20の細胞で構成されています。 PRSは、特殊な微絨毛構造​​、光に敏感な顔料を含有rhabdomeres、ロドプシンを（RHS）があります。 6 PRのrhabdomeres（R1〜R6）は、台形を形成し、体Rh1 3 4が含まれています。 R7とR8のrhabdomeresは台形の中心にタンデムに配置され、光の同じパスを共有しています。 R7とR8 PRSは確率的に2メインサブタイプ5のRHSのさまざまな組み合わせを表現： &#39;p&#39;のサブタイプでは、p R7sでRH3 は p R8sでRH5と結合されて、 &#39;y&#39;のサブタイプには、y R7sでRH4が関連付けられているのに対し、 yの R8sでRH6 6 7 8。 PRSとommatidiumの複数形の開発の初期仕様では幼虫の目触角成虫原基は、上皮細胞の単層で始まる。差別化の波は、ディスク9に掃引とommatidiumの複数形10月11日に未分化細胞のアセンブリを開始します。 &#39;創始細胞&#39; R8はR7を12月14日 、第1及び新入社員、R1-6と指定されています。その後、蛹の開発中に、PRの分化は感桿分体形成、シナプス形成し、最終的にrhの発現を含む広範な形態学的変化15につながる。 このプロトコルでは、網膜の形成や発達経路に関するさまざまな問題に取り組むために適用することができる網膜の開発の3つの定義された期間、網膜における解剖および免疫組織化学のための方法を説明します。ここで、我々は全体のマウント幼虫、midpupalと成人網膜の単一細胞レベルで段階的なPRの分化を視覚化するために、これらのメソッドを使用します（ <sチョン·&gt;図1）。

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Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas

ザ<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;網膜は、紋切り型の方法で生成された細胞の種類の数が少ないからなる結晶状格子です<sup&gt; 1</sup&gt;。洗練された遺伝解析への従順は、複雑な発達プログラムの研究を可能にします。このプロトコルは、感光体の分化を中心に、3つの個別の発達段階で解剖し、網膜の免疫組織化学を説明しています。

幼虫、蛹および成人の解剖と免疫組織化学<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;網膜

The compound eye of Drosophila melanogaster consists of about 750 ommatidia (unit eyes). Each ommatidium is composed of about 20 cells, including ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas

Mapping and Application of Enhancer-trap Flippase Expression in Larval and Adult Drosophila CNS

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エンハンサートラップフリッパーゼの幼虫における発現と成人のマッピングとその応用ショウジョウバエ CNS

The Gal4/ UAS binary method is powerful for gene and neural circuitry manipulation in Drosophila. For most neurobiological studies, however, Gal4 ...

Single Drosophila Ommatidium Dissection and Imaging

Single Drosophila Ommatidium Dissection and Imaging

シングルショウジョウバエ個眼の解剖とイメージング

The fruit fly Drosophila melanogaster has made invaluable contributions to neuroscience research and has been used widely as a model for neurodegenerative ...

Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection

成体マウスの卵形嚢とアデノウイルス媒介助演細胞感染の解剖

Hearing loss and balance disturbances are often caused by death of mechanosensory hair cells, which are the receptor cells of the inner ear.  Since there ...

Functional Analysis of the Larval Feeding Circuit in Drosophila

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幼虫給電回路の機能解析ショウジョウバエ</i

The serotonergic  feeding circuit in Drosophila  melanogaster larvae can be used to investigate neuronal substrates of  critical importance during the ...

Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts

Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts

のライブイメージング<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;幼虫の神経芽細胞

Stem cells divide asymmetrically to generate two progeny cells with unequal fate potential: a self-renewing stem cell and a differentiating cell. Given ...

Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective

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の高品質のデジタルビデオを買収<em&gt;ショウジョウバエ</em横から見た&gt;幼虫と大人の行動

Drosophila melanogaster is a powerful experimental model system for studying the function of the nervous system. Gene mutations that cause dysfunction of ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

成体マウス蝸牛のホールマウント解剖および免疫蛍光

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

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勉強するリニアアガロースチャネルを使用します<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;幼虫クロールの動作

Drosophila larval crawling is emerging as a powerful model to study neural control of sensorimotor behavior. However, larval crawling behavior on flat ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

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大人のホールマウントの準備のためのシンプルなワンステップ解剖プロトコル<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;ブレインズ

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Metabolic Analysis of Drosophila melanogaster Larval and Adult Brains

Metabolic Analysis of Drosophila melanogaster Larval and Adult Brains

キイロショウジョウバエ幼虫と大人の脳の代謝解析

This protocol describes a method for measuring the metabolism in Drosophila melanogaster larval and adult brains. Quantifying metabolism in whole organs ...