Name: dissection and immunohistochemistry of larval, pupal and adult drosophila retinas
Uploaded: 2012-11-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas at JoVE.com

이 작품은 HY에 Ehrman의 교제에 의해 지원되었다. H., DV, JR에 뉴욕 대학교 학장의 학위 논문 CD에 DJ로 휄로 십, NIH GrantR01 EY13010 및 DFG 교제에 RJJ, NIH 그랜트 F32EY016309에 의학 연구 박사 친목을위한 제인 코핀 일즈 기념 기금 (RI 2208/1- 1). 우리는 원고에 대한 의견 니나 Vogt와 파멜라 Boodram 감사드립니다.

1. 소개 세 번째 instar 애벌레의, midpupal과 성인 무대 :이 동영상에서는, 우리는 세 가지 정의 개발 기간의 망막 dissections 및 immunohistochemistry하는 방법을 설명합니다. 우리 프로토콜 다른 pupal 단계 (초기 단계에 대한 자세한 내용은, 16 참조)를 위해 일이지만 하나의 초점 평면과 핵의 모든 푸에르토 리코 놈들이의 시각화을 용이하게하는, 쉽게 식별 할 수있는 이미지에 적?...

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	<li>Ready, D. F., Hanson, T. E., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+Drosophila+retina,+a+neurocrystalline+lattice.">Development of the Drosophila retina, a neurocrystalline lattice.</a> Dev. Biol. 53, 217-240 (1976).</li><li>Hardie, R. C., D, O. t. t. o. s. o. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+organization+of+the+fly+retina.">Functional organization of the fly retina.</a> Sensory Physiology. 5, 1-79 (1985).</li><li>O'Tousa, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+ninaE+gene+encodes+an+opsin.">The Drosophila ninaE gene encodes an opsin.</a> Cell. 40, 839-850 (1985).</li><li>Zuker, C. S., Cowman, A. F., Rubin, G. 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1. 문제 해결 우리의 경험에서 dissections가 연습 (최대 몇 주까지)이 필요하고 테이블에 팔꿈치와 팔을 쉴 의해 손가락 분해 요리와 접촉을 갖춘 편안한 손의 위치 21 달성에 의해 촉진된다. 이렇게 만 엄지 손가락, 색인 및 중간 손가락이 미묘한 움직임을 수행합니다. photoreceptors를 손상시키지 않고 얇은 판을 제거하면 아마도 가장 어려운 단계입니?...

<table border="1"><tr><td></td><td></td><td></td><td> 시약 </td></tr><tr><td> (PBS1x, 산도 7.4) 생리 인산염 버퍼 </td><td> 시그마 </td><td></td><td> 10X 재고 솔루션 (20)를 준비합니다. 실온에서 1X PBS와 상점을 얻기 위해 증류수로 희석. dissections 전에 얼음에 냉각. </td></tr><tr><td> 트리톤 - X 100 </td><td> 시그마 </td><td> 9002-93-1 </td><td> 주의 :! 자극 장갑을 착용한다. 와 0.3 % 트리톤 X-100 (PBST). 50 ML의 1xPBS 준비 실온에서 보관하십시오. </td></tr><tr><td> 37%의 포름 알데히드 용액 </td><td> 피셔 과학 </td><td> F75P1GAL </td><td> 주의 :! 독성, 가능성이 인간의 발암 물질이 장갑을 착용한다. 고정 단계 전에, 신선한 얼음에 PBS로 diluting하여 화학 퓸 배출 후드에 매장을 3.7 % 용액을 준비. </td></tr><tr><td> 5% 정상적인 말 혈청 </td><td> 잭슨 Immuno 연구 </td><td> 008-000-001 </td><td> PBST 5 % V / V 희석을 준비합니다. 네도에서 보관하십시오. </td></tr><tr><td> 기본 및 보조 항체 (예 : 돈키 안티 - 양, 알렉사 형석 488, 동키 - 반 토끼, 알렉사 형석 555, 돈키 안티 - 마우스 알렉사 형석 647) </td><td> Invitrogen 분자 프로브 </td><td> A11015 A31572 A31571 </td><td> 네도에서 PBST과 매장에서 1:800 보조 항체를 희석. </td></tr><tr><td> 알렉사 형석 488 Phalloidin </td><td></td><td> A12379 </td><td> 차 항체 용액에 1:100을 희석. </td></tr><tr><td> Slowfade 골드 Antifade 시약 </td><td> Invitrogen 분자 프로브 </td><td> S36936 </td><td> 매체를 장착. -20도에서 보관하십시오. </td></tr><tr><td> Glycerol </td><td> 피셔 과학 </td><td> G31-1 </td><td> 장착하십시오. 온도는 실온에서 증류수, 상점과 50 %의 희석의 10 ML를 준비합니다. </td></tr><tr><td> CO 2 </td><td></td><td></td><td> 파리 성충을 anesthetizing하십시오. </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 장비 </td></tr><tr><td> 두 날카로운 집게 (뒤몽 # 55) </td><td> 정밀 과학 도구 </td><td> 11255-20 </td><td></td></tr><tr><td> Sylgard 184 실리콘 엘라스토머 키트 </td><td> 다우 코닝 </td><td></td><td> Sylgard 혼합으로 플라스틱 페트리 접시를 작성하여 Sylgard의 분해 요리를 준비합니다. </td></tr><tr><td> 세 잘 유리 분해 요리 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 21-379 </td><td></td></tr><tr><td> TWO minutien 해부 핀 (0.1 mm 직경)와 두 개의 pinholders (12 ㎝) </td><td> 정밀 과학 도구 </td><td> 26002-10 </td><td> 두 pinholders의 각 한 minutien 핀을 삽입하고 후크를 형성하기 위해 핀 중 하나를 구부린다. </td></tr><tr><td> 현미경 커버 용지 (22x22-1과 24x40-1) </td><td> 피셔 과학 </td><td> 12 542A </td><td></td></tr><tr><td> 현미경 슬라이드 (25x75x1.0 mm, precleaned) </td><td> 피셔 과학 </td><td> 12-550-143 </td><td></td></tr><tr><td> 1.5 ML의 microcentrifuge 관 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 폴란드어 또는 스카치 테이프를 손톱 삭제 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 궤도 셰이커 </td><td> Bellco </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 슬라이드 홀더 상자 </tD&gt; <td> 피셔 과학 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> Bemis </td><td> PM996 </td><td></td></tr><tr><td> 얇은 붓 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> P20와 P200 micropipettes 및 팁 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 현미경을 해부 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 얼음과 작은 양동이 </td><td></td><td></td><td> 유리 잘 판, 해부하는 망막과 솔루션을 냉각하십시오. </td></tr></table>

dissection and immunohistochemistry of larval, pupal and adult drosophila retinas

Drosophila melanogaster의 화합물 눈은 약 750 ommatidia (단위 눈)으로 구성되어 있습니다. 각 ommatidium는 렌즈 분비 콘 세포, 안료 세포, 억센 털 셀 및 8 photoreceptors (푸에르토 리코 놈들) R1-R8이 포함 약 20 세포로 구성되어 있습니다. 푸에르토 리코 놈들은 빛에 민감한 안료, Rhodopsins을 (RHS)를 포함 전문 microvillar 구조, rhabdomeres을 수 있습니다. 여섯 푸에르토 리코 놈들의 rhabdomeres (R1-R6)는 사다리꼴을 형성하고 Rh1 3 4이 포함되어 있습니다. R7 및 R8의 rhabdomeres는 사다리꼴의 중심에 직렬로 위치와 빛의 동일한 경로를 공유 할 수 있습니다. R7 및 R8 푸에르토 리코 놈들은 stochastically 두 가지 하위 유형 5 RHS의 다른 조합을 표현 : &#39;P&#39;하위 유형에서, P R7s의 Rh3는 P R8s에 Rh5와 결합되어, &#39;Y&#39;하위 유형에 Y R7s의 Rh4이 연관된 반면, Y의 Rh6는 6 7 8 R8s. 푸에르토 리코 놈들과 ommatidia 개발의 초기 사양은 애벌레의 눈 antennal imaginal 디스크, 상피 세포의 monolayer에서 시작됩니다. 차별화의 파도가 디스크 9에서 쓸어과 ommatidia 10-11로 undifferentiated 세포의 조립을 시작합니다. &#39;설립자 셀&#39;R8 먼저 지정하고 R7 12-14 R1-6 그리고 모집합니다.합니다 그 후, pupal 개발하는 동안, 홍보 차별화 rhabdomere 형성, synaptogenesis 결국 RH 표현을 포함한 다양한 형태학의 변화 15로 연결됩니다. 이 프로토콜에서는, 우리는 망막 형성과 발달 경로에 관한 질문의 다양한 해결하기 위해 적용 할 수있는 망막 개발의 세 정의 된 기간에서 망막 dissections 및 immunohistochemistry하는 방법을 설명합니다. 여기, 우리는 전체 마운트 애벌레의, midpupal 및 성인 망막 (의 단일 셀 레벨에서 stepwise PR 차별화를 시각적으로 이러한 방법을 사용 <s&gt; 그림 1) trong.

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Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas

<em&gt; Drosophila</em&gt; 망막은 틀에 박힌 방식으로 생성 된 세포 유형의 소수로 구성된 크리스탈과 같은 격자입니다<sup&gt; 1</sup&gt;. 정교한 유전자 분석에의 복종 할 의무는 복잡한 개발 프로그램의 연구를 할 수 있습니다. 이 프로토콜은 photoreceptor 차별화를 중심으로 세 이산 발달 단계에서 dissections와 망막의 immunohistochemistry에 대해 설명합니다.

애벌레의, Pupal 및 성인의 해부 및 Immunohistochemistry<em&gt; Drosophila</em&gt; 망막

The compound eye of Drosophila melanogaster consists of about 750 ommatidia (unit eyes). Each ommatidium is composed of about 20 cells, including ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

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Mapping and Application of Enhancer-trap Flippase Expression in Larval and Adult Drosophila CNS

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The serotonergic  feeding circuit in Drosophila  melanogaster larvae can be used to investigate neuronal substrates of  critical importance during the ...

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의 고품질의 디지털 비디오 취득<em&gt; 초파리</em&gt; 측면 관점에서 애벌레 및 성인 동작

Drosophila melanogaster is a powerful experimental model system for studying the function of the nervous system. Gene mutations that cause dysfunction of ...

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간단한 한 단계 성인의 전체 마운트 준비에 대한 해부 프로토콜<em&gt; 초파리</em&gt; 두뇌

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

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초파리 melanogaster Larval 및 성인 두뇌의 변화 분석

This protocol describes a method for measuring the metabolism in Drosophila melanogaster larval and adult brains. Quantifying metabolism in whole organs ...