Name: laser-inflicted injury of zebrafish embryonic skeletal muscle
Uploaded: 2013-01-30T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle at JoVE.com

نشكر بوب نوفاك (أندور التكنولوجيا) للمساعدة التقنية والمشورة. SA-S. معتمد من قبل زمالة هايزنبرغ للجمعية الألمانية للبحوث (DFG). وأيد هذا العمل من قبل DFG منحة SE2016/7-1.

1. وضع العلامات خلايا مفردة حقن الأجنة مرحلة واحدة الخلية مع GFP الترميز البلازميد أو أي بروتين GFP الانصهار تحت سيطرة أحد المروجين β-أكتين. خلال التنمية، وأعرب عن GFP ثم بطريقة الفسيفساء. هنا، استخدمنا المعدلة وراثيا بناء تيراغرام [?...

<ol>
	<li>Charge, S. B., Rudnicki, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+regulation+of+muscle+regeneration.">Cellular and molecular regulation of muscle regeneration.</a> Physiol. Rev. 84, 209-238 (2004).</li><li>Steffen, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+runzel+muscular+dystrophy+is+linked+to+the+titin+gene.">The zebrafish runzel muscular dystrophy is linked to the titin gene.</a> Dev. Biol. 309, 180-192 (2007).</li><li>Bassett, D., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+zebrafish+model+of+muscular+dystrophy.">Identification of a zebrafish model of muscular dystrophy.</a> Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 31, 537-540 (2004).</li><li>Kawahara, G., Serafini, P. R., Myers, J. A., Alexander, M. S., Kunkel, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+zebrafish+dysferlin+by+morpholino+knockdown.">Characterization of zebrafish dysferlin by morpholino knockdown.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 413, 358-363 (2011).</li><li>Behra, M., Etard, C., Cousin, X., Str&#228;hle, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+zebrafish+mutants+to+identify+secondary+target+effects+of+acetylcholine+esterase+inhibitors.">The use of zebrafish mutants to identify secondary target effects of acetylcholine esterase inhibitors.</a> Toxicol. Sci. 77, 325-333 (2004).</li><li>Otten, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xirp+proteins+mark+injured+skeletal+muscle+in+zebrafish.">Xirp proteins mark injured skeletal muscle in zebrafish.</a> PLoS One. 7, e31041 (2012).</li><li>Roostalu, U., Str&#228;hle, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+molecular+interactions+at+damaged+sarcolemma.">In vivo imaging of molecular interactions at damaged sarcolemma.</a> Dev. Cell. 22, 515-529 (2012).</li><li>Stickney, H. L., Barresi, M. J., Devoto, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somite+development+in+zebrafish.">Somite development in zebrafish.</a> Dev. Dyn. 219, 287-303 (2000).</li><li>Stellabotte, F., Dobbs-McAuliffe, B., Fernandez, D. A., Feng, X., Devoto, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+somite+cell+rearrangements+lead+to+distinct+waves+of+myotome+growth.">Dynamic somite cell rearrangements lead to distinct waves of myotome growth.</a> Development. 134, 1253-1257 (2007).</li><li>Choi, W. Y., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+regeneration.">Cardiac regeneration.</a> Curr. Top. Dev. Biol. 100, 319-344 (2012).</li><li>Stewart, S., Stankunas, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limited+dedifferentiation+provides+replacement+tissue+during+zebrafish+fin+regeneration.">Limited dedifferentiation provides replacement tissue during zebrafish fin regeneration.</a> Dev. Biol. 365, 339-349 (2012).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. , 203-253 (1995).</li></ol>

الليزر بوساطة الإصابة هو وسيلة قوية لإلحاق جروح من الحجم المطلوب من قبل ablating الخلايا من أجل دراسة تجديد تحت ظروف محكومة في الجنين الزرد. خاصة، ويمكن أن تستهدف على وجه التحديد خلايا (الشكل 2) ويمكن التحكم كل من منطقة الإصابة وكذلك التوقيت. وبعد ذلك، يتم رصدها ب...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> كتلة التدفئة </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> الزوج رقم 5 ملقط </td><td> دومون </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الزجاج الشرائح </td><td> منزل </td><td></td><td> 76 × 26 مم </td></tr><tr><td> Coverslips </td><td> روث </td><td></td><td> 50 × 24 مم # 1 </td></tr><tr><td> الفازلين </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Stereomicroscope </td><td> لايكا </td><td></td><td> MZFLIII </td></tr><tr><td> Micropoint الليزر </td><td> ANDOR التكنولوجيا </td><td></td><td></td></tr><tr><td> مضان المجهر </td><td> زايس </td><td></td><td> Axioplan II </td></tr><tr><td> Metamorph البرمجيات </td><td> الجزيئية الأجهزة </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> الكواشف <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> منخفضة ذوبان نقطة الاغاروز (# 50081،Lonza) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Tricaine الأسهم الحل: 400 ملغ Tricaine (# A-5040، سيغما الدريخ) / 100 مل DH 2 O 9،0 درجة الحموضة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> E3 المتوسطة (5 ملي كلوريد الصوديوم، 0.17 ملي بوكل، 0.33 ملي CaCl 2، 0،33 ملم MgSO 4) </li></ul></td></tr></tbody></table>

laser-inflicted injury of zebrafish embryonic skeletal muscle

وقد استخدمت أساليب مختلفة في الماوس التجريبية للحث على اصابة في العضلات وذلك بهدف دراسة تجديد العضلات، بما في ذلك الحقن myotoxin (بوبيفاكايين، cardiotoxin أو notexin)، زرع العضلات (إزالة التعصيب-الناجم عن إزالة التوعية التجديد)، وممارسة مكثفة، ولكن أيضا نماذج الفئران ضمور العضلات مثل الماوس MDX (لمراجعة هذه المناهج انظر 1). في الزرد، والنهج الوراثية تشمل المسوخ التي تظهر الظواهر ضمور العضلات (مثل runzel 2 أو sapje 3) ومضاد morpholinos قليل النوكليوتيد التي تمنع التعبير عن الجينات المرتبطة ضمور 4. الى جانب ذلك، النهج الكيميائية من الممكن أيضا، على سبيل المثال مع Galanthamine، وهو مركب كيميائي تثبيط أستيل، مما يؤدي إلى hypercontraction، الأمر الذي يؤدي في نهاية المطاف إلى ضمور العضلات 5. ومع ذلك، والدوائية الجينية النهج زتؤثر enerally جميع العضلات داخل الفرد، في حين أن أكثر سهولة التحكم في مدى الجروح التي أصيب بها جسديا مكانيا وزمانيا 1. الإصابة البدنية المترجمة يسمح بتقييم العضلات المقابل باعتبارها الرقابة الداخلية. في الواقع، كنا مؤخرا بوساطة الليزر التذرية لدراسة الهيكل العظمي خلايا العضلات التجدد في الجنين الزرد 6، بينما مجموعة أخرى ذكرت مؤخرا استخدام ليزر ثنائي الفوتون (822 نانومتر) على الضرر محليا جدا غشاء البلازما من العضلات الفردية الزرد الجنينية الخلايا 7. هنا، ونحن التقرير وسيلة لاستخدام الليزر micropoint (أندور التكنولوجيا) لإصابة العضلات الهيكلية خلية في الجنين الزرد. الليزر هو ليزر micropoint الطاقة العالية الذي هو مناسبة لاجتثاث الخلايا المستهدفة في طول موجة من 435 نانومتر. توصيل الليزر لمجهر (في الإعداد لدينا، المجهر الضوئي من زايس) في مثل هذه الطريقة التي يمكن أن تستخدم المجهر في نفس الوقت وأو التركيز ضوء الليزر على العينة وتصور لآثار اصابة (brightfield أو مضان). المعلمات من أجل السيطرة على نبضات الليزر الطول الموجي وتشمل، وكثافة، وعدد النبضات. نظرا لشفافيتها والتطور الجنيني الخارجية، والجنين هو الزرد قابلة للغاية لإصابة الليزر التي يسببها كل من والانتعاش لدراسة لاحقة. بين 1 و 2 أيام بعد الإخصاب، somitic خلايا عضلات الهيكل العظمي الخضوع تدريجيا من النضج الخلفي سابقة لنظرا لتطور somitogenesis من الجذع إلى ذيل 8 و 9. في هذه المراحل، نشل الأجنة تلقائيا وبدء السباحة. تم مؤخرا التعرف على الزرد الفقاريات كائن حي نموذجا هاما لدراسة وترميم الأنسجة، وأنواع عديدة من الأنسجة (القلب، العصبية، الأوعية الدموية وغيرها) يمكن تجديدها بعد الإصابة في الزرد الكبار 10 و 11.

تم إجراء الليزر إصابة بوساطة يجمد على الأجنة يوما 1. كما هو مبين في الشكل 1، يمكن للنبضات الليزر القليلة توليد جرح بسيط، يمكن التعرف عليها بسهولة من قبل التالفة، اللييفات العضلية ملفوف أكتين الغنية، التي امتدت عادة بين حدود الجسيدة. وهناك عدد أكبر من نبضات ال...

Watch this Scientific Journal Video about Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle at JoVE.com

Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle

الأسلوب المعروضة هنا تشمل إصابة الأجنة الزرد دقيقة حية مع نبضات الليزر عالية الطاقة وتحليل لاحقة من هذه الإصابات والشفاء مع مرور الوقت. نعرض أيضا كيف وصفت واحدة أو وراثيا يمكن تتبع مجموعات من خلايا عضلات الهيكل العظمي أثناء وبعد ضوء الليزر التي يسببها الضرر.

الليزر بإلحاق الضرر من العضلات الهيكلية اسماك الزرد الجنينية

Various experimental approaches have been used in mouse to induce muscle injury with the aim to study muscle regeneration, including myotoxin injections ...

Research

JoVE Journal

Biology

Microdissection of Zebrafish Embryonic Eye Tissues

Microdissection من الأنسجة الجنينية العين اسماك الزرد

Zebrafish is a popular animal model for research on eye development because of its rapid ex utero development and good fecundity. By 3 days post ...

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

الكبار والعضلات والهيكل العظمي الجنينية Microexplant الثقافة وعزل خلايا جذعية عضلية هيكلية

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Mitochondrial Isolation from Skeletal Muscle

الميتوكوندريا من عزل العضلات والهيكل العظمي

Mitochondria are organelles controlling the life and death of the cell. They participate in key metabolic reactions, synthesize most of the ATP, and ...

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

تنقية الأسلاف من الهيكل العظمي والعضلات

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

Immunostaining of Dissected Zebrafish Embryonic Heart

Immunostaining تشريح القلب الجنينية اسماك الزرد

Zebrafish embryo becomes a popular in vivo vertebrate model for studying cardiac development and human heart diseases due to its advantageous embryology ...

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

فيفو السابقين تقييم من تعب، وانقباض في عضلات الهيكل العظمي تناوب متفرقة

 
Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

Analysis of Embryonic and Larval Zebrafish Skeletal Myofibers from Dissociated Preparations

تحليل الجنينية واليرقات الزرد الهيكل العظمي Myofibers من الاستعدادات فصلها

The zebrafish has  proven to be a valuable model system for exploring skeletal muscle function and  for studying human muscle diseases. Despite  the many ...

Analysis of Skeletal Muscle Defects in Larval Zebrafish by Birefringence and Touch-evoke Escape Response Assays

Zebrafish (Danio rerio) have become a particularly effective tool for modeling human diseases affecting skeletal muscle, including muscular ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

سم كلوي حقن مكروي في الزرد لنموذج قصور كلوي حاد

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...