Name: laser-inflicted injury of zebrafish embryonic skeletal muscle
Uploaded: 2013-01-30T12:00:00
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我々は、技術的なヘルプやアドバイスを貰えるボブ（アンドールテクノロジー）に感謝。 SA-S。ドイツ学術振興協会（DFG）のハイゼンベルク交わりによってサポートされています。この作品は、助成SE2016/7-1をDFGによってサポートされていました。

1。単一細胞を標識 β-アクチンプロモーターの制御下でGFPをコードするプラスミドまたは他のGFP融合タンパク質と1細胞期胚を注入します。開発中に、GFPはその後モザイク様式で発現されています。 、β-アクチンプロモーターの制御下にα-アクチニン-GFP融合タンパク質を置きます：ここでは、トランスジェニック構築TG [α-アクチニン-GFPのβ-アクチン ]?...

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	<li>Charge, S. B., Rudnicki, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+regulation+of+muscle+regeneration.">Cellular and molecular regulation of muscle regeneration.</a> Physiol. Rev. 84, 209-238 (2004).</li><li>Steffen, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+runzel+muscular+dystrophy+is+linked+to+the+titin+gene.">The zebrafish runzel muscular dystrophy is linked to the titin gene.</a> Dev. Biol. 309, 180-192 (2007).</li><li>Bassett, D., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+zebrafish+model+of+muscular+dystrophy.">Identification of a zebrafish model of muscular dystrophy.</a> Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 31, 537-540 (2004).</li><li>Kawahara, G., Serafini, P. R., Myers, J. A., Alexander, M. S., Kunkel, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+zebrafish+dysferlin+by+morpholino+knockdown.">Characterization of zebrafish dysferlin by morpholino knockdown.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 413, 358-363 (2011).</li><li>Behra, M., Etard, C., Cousin, X., Str&#228;hle, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+zebrafish+mutants+to+identify+secondary+target+effects+of+acetylcholine+esterase+inhibitors.">The use of zebrafish mutants to identify secondary target effects of acetylcholine esterase inhibitors.</a> Toxicol. Sci. 77, 325-333 (2004).</li><li>Otten, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xirp+proteins+mark+injured+skeletal+muscle+in+zebrafish.">Xirp proteins mark injured skeletal muscle in zebrafish.</a> PLoS One. 7, e31041 (2012).</li><li>Roostalu, U., Str&#228;hle, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+molecular+interactions+at+damaged+sarcolemma.">In vivo imaging of molecular interactions at damaged sarcolemma.</a> Dev. Cell. 22, 515-529 (2012).</li><li>Stickney, H. L., Barresi, M. J., Devoto, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somite+development+in+zebrafish.">Somite development in zebrafish.</a> Dev. Dyn. 219, 287-303 (2000).</li><li>Stellabotte, F., Dobbs-McAuliffe, B., Fernandez, D. A., Feng, X., Devoto, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+somite+cell+rearrangements+lead+to+distinct+waves+of+myotome+growth.">Dynamic somite cell rearrangements lead to distinct waves of myotome growth.</a> Development. 134, 1253-1257 (2007).</li><li>Choi, W. Y., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+regeneration.">Cardiac regeneration.</a> Curr. Top. Dev. Biol. 100, 319-344 (2012).</li><li>Stewart, S., Stankunas, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limited+dedifferentiation+provides+replacement+tissue+during+zebrafish+fin+regeneration.">Limited dedifferentiation provides replacement tissue during zebrafish fin regeneration.</a> Dev. Biol. 365, 339-349 (2012).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. , 203-253 (1995).</li></ol>

レーザー媒介傷害はゼブラフィッシュ胚で制御された条件の下で再生を勉強するために、細胞を切除することにより、所望の大きさの傷を負わせるための強力な方法です。特に、細胞を正確に標的とすることができる（ 図2）と傷害エリアとタイミングの両方を制御することができる。その後、損傷部位と再生のプロセスが容易に、監視記録された（ 図3）と（ <strong...

<table border="1"><tbody><tr><td>加熱ブロック</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ペア＃5鉗子</td><td>デュモン</td><td></td><td></td></tr><tr><td>スライドガラス</td><td>メンツェル</td><td></td><td> 76×26ミリメートル</td></tr><tr><td>カバースリップ</td><td>ロート</td><td></td><td> 50×24ミリメートル1位</td></tr><tr><td>ワセリン</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>実体顕微鏡</td><td>ライカ</td><td></td><td> MZFLIII </td></tr><tr><td> Micropointレーザー</td><td>アンドール·テクノロジー</td><td></td><td></td></tr><tr><td>蛍光顕微鏡</td><td>ツァイス</td><td></td><td> Axioplan II </td></tr><tr><td> Metamorphソフトウェア</td><td>分子デバイス</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 試薬 <ul><li>低融点アガロース（＃50081、ロンザ） </li><li> Tricaine原液：400mgのTricaine（＃-5040、シグマアルドリッチ）/ 100ミリリットルのdH 2 O pH9.0の</li><li> E3の媒体（5 mMのNaCl、0.17のKCl、0.33 mMのCaCl 2、0.33 mMのMgSO 4）し、 </li></ul></td></tr></tbody></table>

laser-inflicted injury of zebrafish embryonic skeletal muscle

様々な実験的アプローチがmyotoxin注射（ブピバカイン、心臓毒性またはnotexin）、筋移植（除神経·脈管切除再生を誘導した）、激しい運動ではなく、ネズミ筋ジストロフィーのモデルを含む、筋肉の再生を研究することを目的として筋損傷を誘発するためにマウスに使用されてきたmdxマウス（これらの方法の見直しのための1を参照）など。ゼブラフィッシュでは、遺伝学的ア ​​プローチは、筋ジストロフィーの表現型（例えばrunzel 2またはsapje 3など）を展示し、筋ジストロフィーに関連する遺伝子の発現をブロック4オリゴヌクレオチド、アンチセンスモルフォ変異株が挙げられる。加えて、化学的ア ​​プローチは、それによって最終的に筋ジストロフィー5につながるhypercontraction、その結果、また、ガランタミン、化学阻害する化合物とアセチルコリンエステラーゼなどが可能です。しかし、遺伝的および薬理学的アプローチグラム物理的に与えた傷害の程度がより簡単に空間的にも時間的に制御されているのに対し、1 enerally、個々の内のすべての筋肉に影響を与えます。ローカライズされた物理的な損傷は、内部統制として、反対の筋肉の評価を可能にする。別のグループは最近、非常に局所的に個々の胚ゼブラフィッシュの筋肉の細胞膜にダメージを与える二光子レーザー（822 nm）での使用を報告しながら、実際、我々は最近、ゼブラフィッシュ胚6に骨格筋の再生を研究するためにレーザーを介する細胞アブレーションを使用細胞7。 ここでは、ゼブラフィッシュ胚における骨格筋細胞傷害に対してmicropointレーザー（アンドールテクノロジー）を使用する方法について検討する。 micropointレーザーは435 nmの波長での標的細胞の切除に適している高エネルギーのレーザーです。レーザー顕微鏡を同時にfで使用できるような方法で顕微鏡（我々のセットアップで、ツァイスの光学顕微鏡）に接続されているまたは試料上および創傷（明視野、蛍光）の効果を可視化するためのレーザー光を当てた。レーザーパルスを制御するためのパラメータは、波長、強度、パルス数を含む。 その透明性と外部の胚発生に起因して、ゼブラフィッシュ胚では、レーザ誘起損傷の両方のためとその後の回復を研究するために非常に適しています。 1〜2日後の受精、体節、骨格筋細胞が徐々にテール8,9にトランクから体節形成の進行による後方から前方に成熟する。これらの段階で、胚は、自発的にけいれんや水泳を開始します。ゼブラフィッシュは、最近、組織再生の研究のための重要な脊椎動物のモデル生物として認識されている、組織のように多くの種類（心臓、神経、血管など）が成人ゼブラフィッシュ10、11の損傷後に再生することができる。

レーザー媒介損傷が固定化された1日齢の胚で行われた。 図1に示すように、いくつかのレーザーパルスは、通常、体節の境界との間に張り渡されたときに、損傷を受け、コイル、アクチンに富んだ筋原線維で容易に認識でき、小傷を生成することができます。レーザーパルスの数値が高いしかし、ほとんどの筋原繊維が破壊された大規模な損傷を受けた体節ブロックになります?...

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Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle

ここで紹介する方法は、高エネルギーのレーザーパルスと時間でこれらの損傷とその回復のその後の分析でライブゼブラフィッシュ胚の正確な傷害を含む。我々はまた、遺伝的に単一標識又は骨格筋細胞のグループが中に、レーザー光誘起損傷後に追跡することができる方法を示しています。

ゼブラフィッシュ胚骨格筋のレーザー招いた傷害

Various experimental approaches have been used in mouse to induce muscle injury with the aim to study muscle regeneration, including myotoxin injections ...

Research

JoVE Journal

Biology

Microdissection of Zebrafish Embryonic Eye Tissues

ゼブラフィッシュ胚眼の組織の顕微解剖

Zebrafish is a popular animal model for research on eye development because of its rapid ex utero development and good fecundity. By 3 days post ...

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

大人と胚骨格筋のMicroexplantの文化と骨格筋幹細胞の単離

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Mitochondrial Isolation from Skeletal Muscle

骨格筋からのミトコンドリア単離

Mitochondria are organelles controlling the life and death of the cell. They participate in key metabolic reactions, synthesize most of the ATP, and ...

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

骨格筋からの前駆体の精製

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

Immunostaining of Dissected Zebrafish Embryonic Heart

ディテールに秘められたゼブラフィッシュ胚心臓の免疫染色

Zebrafish embryo becomes a popular in vivo vertebrate model for studying cardiac development and human heart diseases due to its advantageous embryology ...

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

隔離された骨格筋の収縮、倦怠感や交互の ex vivo での評価

 
Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

Analysis of Embryonic and Larval Zebrafish Skeletal Myofibers from Dissociated Preparations

解離調製物から胚および幼虫のゼブラフィッシュ骨格筋線維の分析

The zebrafish has  proven to be a valuable model system for exploring skeletal muscle function and  for studying human muscle diseases. Despite  the many ...

Analysis of Skeletal Muscle Defects in Larval Zebrafish by Birefringence and Touch-evoke Escape Response Assays

複屈折およびタッチ呼び起こすエスケープ応答アッセイによる幼虫のゼブラフィッシュ骨格筋の欠陥の分析

Zebrafish (Danio rerio) have become a particularly effective tool for modeling human diseases affecting skeletal muscle, including muscular ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

ゼブラフィッシュにおける腎毒素マイクロインジェクションは急性腎障害をモデルに

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...