Name: laser-inflicted injury of zebrafish embryonic skeletal muscle
Uploaded: 2013-01-30T12:00:00
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우리는 기술적 인 도움과 조언을 밥 Nowak (ANDOR 기술)을 감사드립니다. SA-S. 독일 Forschungsgemeinschaft (DFG)의 하이젠 베르크 친목에 의해 지원됩니다. 이 작품은 기금 SE2016/7-1을 DFG의 지원을했습니다.

1. 단일 셀 라벨 β-고를 프로모터의 조절하에 플라스미드 인코딩 GFP 또는 GFP-융합 단백질과 함께 한 세포 단계 배아를 삽입. 개발 과정, GFP는 다음 모자이크 방식으로 표현된다. 여기, 우리는 사용 된 유전자 변형 구조 TG [β-고를 : α-actinin-GFP], 그 β-고를 프로모터의 제어에 따라 α-Actinin-GFP 융합 단백질을 남깁니다.에게 2. 배아 퍼가기 <ol clas...

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레이저로 인한 손상은 zebrafish 배아의 제어 조건 하에서 재생을 연구하기 위해 셀을 흡열하여 원하는 크기의 상처를 가하는위한 강력한 방법입니다. 특히, 세포는 정확하게 타겟팅 할 수 있습니다 (그림 2)와 상해 지역뿐만 아니라 타이밍이 모두 제어 할 수 있습니다. 그 후, 부상 사이트 및 재생 프로세스는 쉽게, 모니터링 기록 (그림 3) 및 (그림 1) 분석됩니다...

<table border="1"><tbody><tr><td> 가열 블록 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 짝 # 5 포셉 </td><td> 뒤몽 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 유리 슬라이드 </td><td> Menzel </td><td></td><td> 76 X 26mm </td></tr><tr><td> Coverslips </td><td> 로스 </td><td></td><td> 50 X 24mm # 1 </td></tr><tr><td> 석유 젤리 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Stereomicroscope </td><td> Leica </td><td></td><td> MZFLIII </td></tr><tr><td> Micropoint 레이저 </td><td> ANDOR 기술 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 형광 현미경 </td><td> Zeiss </td><td></td><td> Axioplan II </td></tr><tr><td> Metamorph 소프트웨어 </td><td> 분자 장치 </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 시약 <ul><li> 낮은 녹는 점 아가로 오스 (# 50081,Lonza) </li><li> Tricaine 재고 솔루션 : 400 밀리그램 Tricaine (# A-5040, 시그마 - 알드리치) / 100 ML DH 2 O pH를 9.0 </li><li> E3 중간 (5 MM NaCl, 0.17 MM KCl, 0.33 MM CaCl 2, 0.33 MM MgSO 4) </li></ul></td></tr></tbody></table>

laser-inflicted injury of zebrafish embryonic skeletal muscle

다양한 실험 방법은 손쥐 근육 영양 장애 모델도 myotoxin 주사 (bupivacaine, cardiotoxin 또는 notexin), 근육 transplantations (denervation-devascularization 유도 재생), 집중적 인 운동을 포함하여 근육 재생을 연구하는 목적으로 근육 부상을 유발하기 위해 마우스를 사용하지만, 한 MDX 마우스 (이 방법의 검토 1 참조) 등. zebrafish에서 유전자 접근법은 근육의 영양 장애의 phenotypes (예 : runzel 2 sapje 3 등) 전시 및 영양 장애 - 관련 유전자의 표현 4 차단 oligonucleotide morpholinos를 안티센스 돌연변이가 포함되어 있습니다. 또, 화학 접근함으로써 결국 근육 영양 장애 5 연결 hypercontraction, 그 결과도 Galanthamine, 화학 화합물 억제 acetylcholinesterase와 예 가능합니다. 그러나, 유전 및 약리 접근 g물리적으로 입은 부상의 정도가보다 쉽게 spatially과 시간적으로 한 통제하는 반면 enerally, 개인 내의 모든 근육에 영향을 미칩니다. 현지화 신체적 부상은 내부 통제 등의 contralateral 근육 평가를 할 수 있습니다. 다른 그룹은 최근 매우 로컬 개별 배아 zebrafish 근육의 플라즈마 막에 손상을하기 위해 두 광자 레이저 (822 nm 정도)의 사용을보고하면서 실제로, 우리는 최근 zebrafish 배아 6 골격근 재생을 공부하는 레이저로 인한 세포 절개를 사용 세포 7. 여기, 우리는 zebrafish 배아의 골격근 세포 손상에 대한 micropoint 레이저 (ANDOR 기술)를 사용하는 방법을보고합니다. micropoint 레이저는 435 nm의 파장을 대상으로 휴대 절제에 적합한 고 에너지 레이저입니다. 레이저는 현미경이 동일한 시간 F에서 사용할 수있는 방식으로 (우리의 설치, Zeiss의 광학 현미경)을 현미경에 연결되어또는 샘플에와 남긴 상처 (brightfield 또는 형광)의 효과를 시각화를위한 레이저 빛을 초점을 맞추고. 레이저 펄스를 제어하기위한 매개 변수 파장, 강도, 그리고 펄스의 수를 포함합니다. 의 투명성과 외부 배아 발달로 인해, zebrafish 배아는 레이저 유도 부상 및 모두 후속 복구를 공부 높은 의무가 있습니다. 1 ~ 2 일 후 수정을, somitic 골격근 세포는 점차적으로 꼬리 8, 9 트렁크에서 somitogenesis의 진행으로 인해 뒤쪽하기 위해 앞의 성숙을 받고있다. 이 단계에서 배아는 자발적으로 경련과 수영을 시작합니다. zebrafish는 최근 성인 zebrafish 10, 11 부상 후 다시 생성 할 수 있습니다 조직의 여러 유형 (등 혈관, neuronal, 심장)으로, 조직 재생 연구의 중요한 척추 모델 생물체로 인식되었습니다.

레이저로 인한 부상은 고정 일일 된 배아에서 수행되었다. 그림 1에 도시 된 바와 같이, 몇 레이저 펄스는 일반적으로 체절 경계 사이에 뻗어있는 손상된, 코일, 고를 풍부한 myofibrils로 쉽게 알아볼 수, 작은 상처를 생성 할 수 있습니다. 레이저 펄스의 더 많은 그러나 대부분의 myofibrils이 파괴되어 크게 손상 체절 블록에서 발생합니다. 그럼에도 불구하고, 우리는 그대로 큰 사람보다 ?...

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Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle

여기에 제시된 방법은 고 에너지 레이저 펄스와 시간을 통해 이러한 부상과 회복의 후속 분석 라이브 zebrafish 배아의 정확한 부상을 포함한다. 우리는 또한 유전자 하나의 표시 또는 골격근 세포의 그룹이 동안 레이저 광 유도 손상 후 추적 할 수있는 방법을 보여줍니다.

Zebrafish 배아 골격근의 레이저 쏜 부상

Various experimental approaches have been used in mouse to induce muscle injury with the aim to study muscle regeneration, including myotoxin injections ...

Research

JoVE Journal

Biology

Microdissection of Zebrafish Embryonic Eye Tissues

Zebrafish 배아 눈 조직의 Microdissection

Zebrafish is a popular animal model for research on eye development because of its rapid ex utero development and good fecundity. By 3 days post ...

연구

생물학

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

성인 및 배아 골격근의 Microexplant 문화 및 골격 근육 줄기 세포의 분리

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Mitochondrial Isolation from Skeletal Muscle

골격근에서 Mitochondrial 절연

Mitochondria are organelles controlling the life and death of the cell. They participate in key metabolic reactions, synthesize most of the ATP, and ...

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

골격근에서 Progenitors의 정화

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

Immunostaining of Dissected Zebrafish Embryonic Heart

해부 Zebrafish 배아 심장의 Immunostaining

Zebrafish embryo becomes a popular in vivo vertebrate model for studying cardiac development and human heart diseases due to its advantageous embryology ...

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

절연 골격근의 수축성, Fatigability 및 Alternans의 예 VIVO 평가

 
Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

Analysis of Embryonic and Larval Zebrafish Skeletal Myofibers from Dissociated Preparations

해리 된 준비에서 배아와 애벌레 Zebrafish의 골격 근섬유의 분석

The zebrafish has  proven to be a valuable model system for exploring skeletal muscle function and  for studying human muscle diseases. Despite  the many ...

Analysis of Skeletal Muscle Defects in Larval Zebrafish by Birefringence and Touch-evoke Escape Response Assays

Zebrafish (Danio rerio) have become a particularly effective tool for modeling human diseases affecting skeletal muscle, including muscular ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

Zebrafish의에서 콩팥 세포 독소 미세 주입은 급성 신장 손상을 모델링하기

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...