Name: laser-inflicted injury of zebrafish embryonic skeletal muscle
Uploaded: 2013-01-30T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle at JoVE.com

Biz teknik yardım ve danışma için Bob Nowak (Andor Teknolojisi) teşekkür ederim. SA-S. Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) bir Heisenberg dostluk tarafından desteklenmektedir. Bu eser hibe SE2016/7-1 DFG tarafından desteklenmiştir.

1. Tek Hücreler Etiketleme Bir β-aktin promotörü kontrolü altında bir plasmid kodlama GFP ya da GFP füzyon proteini ile tek-hücreli embriyoların enjekte edilir. Gelişimi sırasında, GFP sonra bir mozaik bir şekilde ifade edilir. Burada kullanılan transgenik yapı Tg [β-aktin: α-aktinin-GFP] olup β-aktin promotörü kontrolü altında α-aktinin-GFP füzyon proteini yerleştirir. 2. Embriyo Katıştırma <ol class="lalpha"><li> Ze...

<ol>
	<li>Charge, S. B., Rudnicki, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+regulation+of+muscle+regeneration.">Cellular and molecular regulation of muscle regeneration.</a> Physiol. Rev. 84, 209-238 (2004).</li><li>Steffen, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+runzel+muscular+dystrophy+is+linked+to+the+titin+gene.">The zebrafish runzel muscular dystrophy is linked to the titin gene.</a> Dev. Biol. 309, 180-192 (2007).</li><li>Bassett, D., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+zebrafish+model+of+muscular+dystrophy.">Identification of a zebrafish model of muscular dystrophy.</a> Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 31, 537-540 (2004).</li><li>Kawahara, G., Serafini, P. R., Myers, J. A., Alexander, M. S., Kunkel, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+zebrafish+dysferlin+by+morpholino+knockdown.">Characterization of zebrafish dysferlin by morpholino knockdown.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 413, 358-363 (2011).</li><li>Behra, M., Etard, C., Cousin, X., Str&#228;hle, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+zebrafish+mutants+to+identify+secondary+target+effects+of+acetylcholine+esterase+inhibitors.">The use of zebrafish mutants to identify secondary target effects of acetylcholine esterase inhibitors.</a> Toxicol. Sci. 77, 325-333 (2004).</li><li>Otten, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xirp+proteins+mark+injured+skeletal+muscle+in+zebrafish.">Xirp proteins mark injured skeletal muscle in zebrafish.</a> PLoS One. 7, e31041 (2012).</li><li>Roostalu, U., Str&#228;hle, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+molecular+interactions+at+damaged+sarcolemma.">In vivo imaging of molecular interactions at damaged sarcolemma.</a> Dev. Cell. 22, 515-529 (2012).</li><li>Stickney, H. L., Barresi, M. J., Devoto, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somite+development+in+zebrafish.">Somite development in zebrafish.</a> Dev. Dyn. 219, 287-303 (2000).</li><li>Stellabotte, F., Dobbs-McAuliffe, B., Fernandez, D. A., Feng, X., Devoto, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+somite+cell+rearrangements+lead+to+distinct+waves+of+myotome+growth.">Dynamic somite cell rearrangements lead to distinct waves of myotome growth.</a> Development. 134, 1253-1257 (2007).</li><li>Choi, W. Y., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+regeneration.">Cardiac regeneration.</a> Curr. Top. Dev. Biol. 100, 319-344 (2012).</li><li>Stewart, S., Stankunas, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limited+dedifferentiation+provides+replacement+tissue+during+zebrafish+fin+regeneration.">Limited dedifferentiation provides replacement tissue during zebrafish fin regeneration.</a> Dev. Biol. 365, 339-349 (2012).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. , 203-253 (1995).</li></ol>

Lazer-aracılı yaralanma zebrafish embriyo kontrollü koşullarda rejenerasyon incelemek amacıyla hücreleri ablasyonu ile istenilen büyüklükte yaralar için güçlü bir yöntemdir. Özellikle, tam hücreler hedef olabilir (Şekil 2) ve yara alanı gibi zamanlama her ikisi de kontrol edilebilir. Daha sonra, yaralanma bölgesinde ve yenilenme işlemleri kolayca izlenir, kaydedilmiş (Şekil 3) ve (Şekil 1) analiz edilir. Lazer de x-ve y-ekseninde odaklanmıştır ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Isıtma bloğu </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Çifti # 5 forseps </td><td> Dumont </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Cam slayt </td><td> Menzel </td><td></td><td> 76 x 26 mm </td></tr><tr><td> Lameller </td><td> Roth </td><td></td><td> 50 x 24 mm # 1 </td></tr><tr><td> Vazelin </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Stereomikroskopta </td><td> Leica </td><td></td><td> MZFLIII </td></tr><tr><td> Micropoint lazer </td><td> Andor Teknoloji </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Flüoresans mikroskobu </td><td> Zeiss </td><td></td><td> Axioplan II </td></tr><tr><td> Metamorph yazılımı </td><td> Molecular Devices </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Reaktifler <ul><li> Düşük erime noktalı agaroz (# 50081,Lonza) </li><li> Tricaine stok solüsyonu: 400 mg Tricaine (# A-5040, Sigma-Aldrich) / 100 ml dH 2 O pH 9.0 </li><li> E3, orta (5 mM NaCl, 0.17 mM KCI, 0.33 mM CaCl2, 0,33 mM MgSO4) </li></ul></td></tr></tbody></table>

laser-inflicted injury of zebrafish embryonic skeletal muscle

Çeşitli deneysel yaklaşımlar murin müsküler distrofi modelleri de myotoxin enjeksiyonları (bupivakain, cardiotoxin veya notexin), kas nakilleri (denervasyon-devaskülarizasyonun bağlı rejenerasyon), yoğun egzersiz, kas yenilenme çalışma amacı ile kas yaralanma ikna etmek için fare kullanılır, ama oylandı mdx fare (bu yaklaşımların bir inceleme için 1&#39;e bakınız) gibi. Zebrafish, genetik yaklaşımlar müsküler distrofi fenotipleri (örneğin runzel 2 ya da 3 sapje gibi) sergilerler ve distrofi ile ilişkili genlerin ekspresyonunu engellemek 4 morpholinos antisens oligonükleotid mutantları sayılabilir. Bunun yanı sıra, kimyasal yaklaşımlar ve böylece sonuçta müsküler distrofi 5 yol açar hypercontraction oluşur, bunların, aynı zamanda Galanthamine, bir asetilkolinesteraz inhibe edici kimyasal bileşik, örneğin mümkündür. Ancak, genetik ve farmakolojik yaklaşımlar gfiziksel yaralanmalar ölçüde daha kolay ve mekansal 1 kontrol edilir ise enerally, bireyin içindeki tüm kasları etkileyebilir. Lokalize fiziksel yaralanma bir iç kontrol olarak kontralateral kas değerlendirmesini sağlar. Başka bir grup son zamanlarda çok lokal bireyin embriyonik zebrafish kas plazma zarı zarar iki foton lazer (822 nm) kullanımı rapor Nitekim, biz son zamanlarda, zebrafish embriyo 6 iskelet kas yenilenme incelemek için lazer aracılı hücre ablasyon kullanılır hücreleri 7. Burada, zebrafish embriyo iskelet kas hücre hasarı için Micropoint lazer (Andor Teknolojisi) kullanımı için bir yöntem sunulmuştur. Micropoint lazer 435 nm dalga boyunda hedeflenen hücre ablasyon için uygun bir yüksek enerjili lazer. Lazer mikroskop aynı zamanda f da kullanılabilir ki bu tür bir şekilde (bizim kurulum, Zeiss bir optik mikroskop) bir mikroskop ile bağlanırveya numune üzerine ve yaralama (aydınlık veya floresans) etkileri görselleştirmek için lazer ışık odaklama. Lazer darbeleri kontrol parametreleri dalga boyu, yoğunluk ve bakliyat numarasını içerir. Şeffaflığını ve dış embriyonik gelişme nedeniyle, zebrafish embriyo lazer kaynaklı yaralanma ve hem de daha sonraki iyileşme incelemek için çok müsait olan. 1 ila 2 gün sonrası fertilizasyon, somitic iskelet kas hücreleri giderek kuyruk 8, 9 gövdesinden somitogenesis ilerlemesi nedeniyle posterior anterior olgunlaşması uğrarlar. Bu aşamalarda, embriyo kendiliğinden seğirme ve yüzme başlatabilir. Zebrafish yakın yetişkin zebrafish 10, 11 yaralanma sonrası rejenere edilebilir dokuların birçok türleri (vb vasküler, nöronal, kardiyak) gibi, doku rejenerasyon çalışması için önemli bir omurgalı model organizma olarak kabul edilmiştir.

Lazer-aracılı yaralanma immobilize 1 gün-yaşlı embriyolar üzerinde yapıldı. Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi, bir kaç lazer atımlarının normal olarak somite sınırları arasında gerilir hasarlı, sarmal, Aktin-zengin miyofibril tarafından kolayca tanınabilir, küçük bir yara oluşturabilir. Lazer atımlarının sayısı arttıkça, ancak en fazla miyofibril yok edilir bir ağır hasar somite blok neden olur. Yine de, biz kelimenin tam anlamıyla büyük olanlardan daha hızlı iyil...

Watch this Scientific Journal Video about Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle at JoVE.com

Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle

Burada sunulan yöntem, yüksek enerjili lazer darbeleri ve zamanla bu yaralanmalar ve kurtarma ileri analizi ile canlı zebrafish embriyo kesin hasar oluşur. Ayrıca genetik olarak tek etiketli veya iskelet kas hücre gruplarının sırasında ve lazer ışık kaynaklı hasar sonrası takip edilebilir göstermek.

Zebra balığı Embriyonik İskelet Kası Lazer-yaralama

Various experimental approaches have been used in mouse to induce muscle injury with the aim to study muscle regeneration, including myotoxin injections ...

Research

JoVE Journal

Biology

Microdissection of Zebrafish Embryonic Eye Tissues

Zebra balığı Embriyonik Göz Dokular, Mikrodisseksiyon

Zebrafish is a popular animal model for research on eye development because of its rapid ex utero development and good fecundity. By 3 days post ...

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

Yetişkin ve Embriyonik İskelet, Kas Microexplant Kültür ve İskelet Kası Kök Hücre İzolasyonu

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Mitochondrial Isolation from Skeletal Muscle

İskelet Kası Mitokondrial İzolasyon

Mitochondria are organelles controlling the life and death of the cell. They participate in key metabolic reactions, synthesize most of the ATP, and ...

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

İskelet Kası progenitörlerin saflaştırılması

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

Immunostaining of Dissected Zebrafish Embryonic Heart

Zebra balığı Embriyonik Kalp Dissected, immün

Zebrafish embryo becomes a popular in vivo vertebrate model for studying cardiac development and human heart diseases due to its advantageous embryology ...

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

İzole İskelet Kaslar Kasılma, çabuk yorulma ve Alternans Ex Vivo Değerlendirilmesi

 
Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

Analysis of Embryonic and Larval Zebrafish Skeletal Myofibers from Dissociated Preparations

Disosiye Müstahzarlar gelen Embriyonik ve larval Zebra balığı İskelet myofibers Analizi

The zebrafish has  proven to be a valuable model system for exploring skeletal muscle function and  for studying human muscle diseases. Despite  the many ...

Analysis of Skeletal Muscle Defects in Larval Zebrafish by Birefringence and Touch-evoke Escape Response Assays

Zebrafish (Danio rerio) have become a particularly effective tool for modeling human diseases affecting skeletal muscle, including muscular ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

Zebra balığı Nephrotoxin Mikroenjeksiyon Akut Böbrek Yaralanması Model

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...