Name: quantitative measurement of the immune response and sleep in drosophila
Uploaded: 2012-12-04T13:00:00
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このプロトコルは、細菌感染にさらさハエから収集された四つの異なる読み出しを取得する2つの設定（ 図1）を使用しています。 2）生存転帰;、3）その場で細菌負荷、4）in vivoにおける NFκBのレポーター活性のリアルタイム測定、これらの出力）はスリープ/スリープ解除の動作を1が含まれています。 ショウジョウバエで利用可能な遺伝学的ツールとの...

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	<li>Majde, J. A., Krueger, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Links+between+the+innate+immune+system+and+sleep.">Links between the innate immune system and sleep.</a> J. Allergy Clin. Immunol. 116, 1188-1198 (2005).</li><li>Kuo, T. H., Pike, D. H., Beizaeipour, Z., Williams, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleep+triggered+by+an+immune+response+in+Drosophila+is+regulated+by+the+circadian+clock+and+requires+the+NFkappaB+Relish.">Sleep triggered by an immune response in Drosophila is regulated by the circadian clock and requires the NFkappaB Relish.</a> BMC Neurosci. 11, 1471-2202 (2010).</li><li>Preston, B. T., Capellini, I., McNamara, P., Barton, R. A., Nunn, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parasite+resistance+and+the+adaptive+significance+of+sleep.">Parasite resistance and the adaptive significance of sleep.</a> BMC Evol Biol. 9, 7 (2009).</li><li>Imeri, L., Opp, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+(and+why)+the+immune+system+makes+us+sleep.">How (and why) the immune system makes us sleep.</a> Nat. Rev. Neurosci. 10, 199-210 (2009).</li><li>Ayres, J. S., Schneider, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Signaling+Protease+Required+for+Melanization+in+Drosophila+Affects+Resistance+and+Tolerance+of+Infections.">A Signaling Protease Required for Melanization in Drosophila Affects Resistance and Tolerance of Infections.</a> PLoS Biol. 6, e305 (2008).</li><li>Chiu, J. C., Low, K. H., Pike, D. H., Yildirim, E., Edery, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assaying+Locomotor+Activity+to+Study+Circadian+Rhythms+and+Sleep+Parameters+in+Drosophila.">Assaying Locomotor Activity to Study Circadian Rhythms and Sleep Parameters in Drosophila.</a> J. Vis. Exp. (43), e2157 (2010).</li><li>Lee, J. E., Edery, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+Regulation+in+the+Ability+of+Drosophila+to+Combat+Pathogenic+Infections.">Circadian Regulation in the Ability of Drosophila to Combat Pathogenic Infections.</a> Curr. Biol. 18, 195-199 (2008).</li><li>Stone, E. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+circadian+clock+protein+timeless+regulates+phagocytosis+of+bacteria+in+Drosophila.">The circadian clock protein timeless regulates phagocytosis of bacteria in Drosophila.</a> PLoS Pathog. 8, e1002445 (2012).</li><li>Hill-Burns, E. M., Clark, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-linked+variation+in+immune+response+in+Drosophila+melanogaster.">X-linked variation in immune response in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 183, 1477-1491 (2009).</li><li>Short, S. M., Lazzaro, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+and+male+genetic+contributions+to+post-mating+immune+defence+in+female+Drosophila+melanogaster.">Female and male genetic contributions to post-mating immune defence in female Drosophila melanogaster.</a> Proc. Biol. Sci. 277, 3649-3657 (2010).</li><li>Williams, J. A., Sathyanarayanan, S., Hendricks, J. C., Sehgal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+sleep+and+the+immune+response+in+Drosophila:+a+role+for+the+NFkappaB+relish.">Interaction between sleep and the immune response in Drosophila: a role for the NFkappaB relish.</a> Sleep. 30, 389-400 (2007).</li><li>Ramsden, S., Cheung, Y. Y., Seroude, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+analysis+of+the+Drosophila+immune+response+during+aging.">Functional analysis of the Drosophila immune response during aging.</a> Aging Cell. 7, 225-236 (2008).</li><li>Williams, J. A., Su, H. S., Bernards, A., Field, J., Sehgal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+circadian+output+in+Drosophila+mediated+by+neurofibromatosis-1+and+Ras/MAPK.">A circadian output in Drosophila mediated by neurofibromatosis-1 and Ras/MAPK.</a> Science. 293, 2251-2256 (2001).</li><li>Hedengren, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relish,+a+central+factor+in+the+control+of+humoral+but+not+cellular+immunity+in+Drosophila.">Relish, a central factor in the control of humoral but not cellular immunity in Drosophila.</a> Mol. Cell. 4, 827-837 (1999).</li><li>Leulier, F., Rodriguez, A., Khush, R. S., Abrams, J. M., Lemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+caspase+Dredd+is+required+to+resist+gram-negative+bacterial+infection.">The Drosophila caspase Dredd is required to resist gram-negative bacterial infection.</a> EMBO Rep. 1, 353-358 (2000).</li><li>Wu, L. P., Choe, K. -. M., Lu, Y., Anderson, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+Immunity:+Genes+on+the+Third+Chromosome+Required+for+the+Response+to+Bacterial+Infection.">Drosophila Immunity: Genes on the Third Chromosome Required for the Response to Bacterial Infection.</a> Genetics. 159, 189-199 (2001).</li><li>Dionne, M. S., Ghori, N., Schneider, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+melanogaster+is+a+genetically+tractable+model+host+for+Mycobacterium+marinum.">Drosophila melanogaster is a genetically tractable model host for Mycobacterium marinum.</a> Infect. Immun. 71, 3540-3550 (2003).</li><li>Romeo, Y., Lemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+immunity:+methods+for+monitoring+the+activity+of+Toll+and+Imd+signaling+pathways.">Drosophila immunity: methods for monitoring the activity of Toll and Imd signaling pathways.</a> Methods Mol. Biol. 415, 379-394 (2008).</li><li>Lu, Y., Wu, L. P., Anderson, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+antibacterial+arm+of+the+Drosophila+innate+immune+response+requires+an+I{kappa}B+kinase.">The antibacterial arm of the Drosophila innate immune response requires an I{kappa}B kinase.</a> Genes Dev. 15, 104-110 (2001).</li><li>Koh, K., Evans, J. M., Hendricks, J. C., Sehgal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+for+age-associated+changes+in+sleep:wake+cycles.">A Drosophila model for age-associated changes in sleep:wake cycles.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 103, 13843-13847 (2006).</li><li>Bushey, D., Hughes, K. A., Tononi, G., Cirelli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleep,+aging,+and+lifespan+in+Drosophila.">Sleep, aging, and lifespan in Drosophila.</a> BMC Neurosci. 11, 1471-2202 (2010).</li><li>Allee, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The social life of animals. , (1938).</li><li>Stanewsky, R., Jamison, C. F., Plautz, J. D., Kay, S. A., Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+circadian-regulated+elements+contribute+to+cycling+period+gene+expression+in+Drosophila.">Multiple circadian-regulated elements contribute to cycling period gene expression in Drosophila.</a> Embo. J. 16, 5006-5018 (1997).</li><li>Levine, J. D., Funes, P., Dowse, H. B., Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signal+analysis+of+behavioral+and+molecular+cycles.">Signal analysis of behavioral and molecular cycles.</a> BMC Neurosci. 3, 1 (2002).</li><li>Ayres, J. S., Schneider, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+anorexia+in+resistance+and+tolerance+to+infections+in+Drosophila.">The role of anorexia in resistance and tolerance to infections in Drosophila.</a> PLoS Biol. 7, e1000150 (2009).</li><li>Plautz, J. D., Kaneko, M., Hall, J. C., Kay, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Independent+photoreceptive+circadian+clocks+throughout+Drosophila.">Independent photoreceptive circadian clocks throughout Drosophila.</a> Science. 278, 1632-1635 (1997).</li><li>Huber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleep+homeostasis+in+Drosophila+melanogaster.">Sleep homeostasis in Drosophila melanogaster.</a> Sleep. 27, 628-639 (2004).</li><li>Zimmerman, J. E., Raizen, D. M., Maycock, M. H., Maislin, G., Pack, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+video+method+to+study+Drosophila+sleep.">A video method to study Drosophila sleep.</a> Sleep. 31, 1587-1598 (2008).</li><li>Toth, L. A., Rehg, J. E., Webster, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+differences+in+sleep+and+other+pathophysiological+sequelae+of+influenza+virus+infection+in+naive+and+immunized+mice.">Strain differences in sleep and other pathophysiological sequelae of influenza virus infection in naive and immunized mice.</a> J. Neuroimmunol. 58, 89-99 (1995).</li><li>Hendricks, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rest+in+Drosophila+is+a+sleep-like+state.">Rest in Drosophila is a sleep-like state.</a> Neuron. 25, 129-138 (2000).</li><li>Wu, M. N., Koh, K., Yue, Z., Joiner, W. J., Sehgal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetic+screen+for+sleep+and+circadian+mutants+reveals+mechanisms+underlying+regulation+of+sleep+in+Drosophila.">A genetic screen for sleep and circadian mutants reveals mechanisms underlying regulation of sleep in Drosophila.</a> Sleep. 31, 465-472 (2008).</li></ol>

このプロトコルは、どのような動作を調査するためのアプローチを概説し、特に睡眠、免疫応答パラメータにリンクされています。これらのパラメータは、in vivoでのルシフェラーゼレポーターによって測定された細菌負荷、生存転帰、およびNFκB活性が挙げられる。一緒に、これらのパラメータは、ハエは感染と闘うことができるどれだけの情報を提供します。細菌負荷と生存転帰は?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 材料名 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 注釈 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 機器 </td></tr><tr><td>インキュベーター</td><td>パーシバルサイエンティフィック株式会社</td><td> I30BLLC8 I36VLC8 </td><td>プログラムされた光/温度スケジュールを実行することが可能な任意のインキュベーターが適切である。 </td></tr><tr><td> ショウジョウバエ Activitiyモニター</td><td> Trikinetics社、マサチューセッツ州ウォルサム</td><td> DAM2 </td><td>他の場所で6説明したように、このシステムは、コンピュータインターフェース、ソフトウェア、および他の付属品を必要とします。 </td></tr><tr><td>パイレックスガラス管</td><td> Trikinetics社、マサチューセッツ州ウォルサム</td><td> PGT-5x65 </td><td></td></tr><tr><td>マイクロプレートシンチレーションおよび発光カウンター</td><td>パーキンエルマー</td><td>トップカウントNXT 12検出器</td><td>発光を検出することが可能な任意のマイクロプレートリーダーは、レポーターアッセイのこのタイプのために使用することができます。トップカウントは、複数の検出器と自動スタッカーが入っていますが、複数のプレートから連続的に読み取るようにプログラムされることが可能である。 </td></tr><tr><td> FluorChem 8900 </td><td>アルファイノテック</td><td></td><td>細菌培養のイメージングは​​オプションです。可視光機能を備えた任意のデジタルイメージングシステムで十分です。 </td></tr><tr><td>マイクロピペットプラー</td><td> Tritechリサーチ社</td><td>ナリシゲPC-10 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 用品 </td></tr><tr><td>ホウケイ酸塩のガラス管</td><td>世界の精密計測器株式会社</td><td> 1B100F-4 </td><td></td></tr><tr><td> 3 mlのシリンジ</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> BD 305482 </td><td></td></tr><tr><td>注射針</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> BD 305196 </td><td> 18 G - 配管の損傷を防ぐために、針の先端を切り落とした。 </td></tr><tr><td>シリコーンチューブは、id（0.030 &quot;）外径（0.065&quot;）の壁厚さ（0.018 &quot;） </td><td> VWR </td><td> 60985-706 </td><td>シリンジにガラスキャピラリー針を取り付けるために使用される</td></tr><tr><td> 3方活栓</td><td>アメリカンPharmaseal会社</td><td> K75 </td><td></td></tr><tr><td> Kontesペレット杵コードレスモーター</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> K749540-0000 </td><td></td></tr><tr><td> Kontesペレット杵</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> K749521-1590 </td><td></td></tr><tr><td> 3ミリメートルガラス球</td><td> VWR </td><td> 26396-630 </td><td></td></tr><tr><td>マイクロマイクロライト1 + </td><td>サーモサイエンティフィック</td><td> 7571 </td><td>セレクトン発光に適した96ウェルプレートには、 - 彼らは不透明でなければなりません。 </td></tr><tr><td> TopSeal-:96ウェルマイクロプレート</td><td>パーキンエルマー</td><td> 6005185 </td><td>マイクロプレス上の接着封止膜</td></tr><tr><td> D-ルシフェリン、カリウム塩</td><td>ゴールドバイオテクノロジー、（株） </td><td> LUCNA </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> ソフトウェア </td></tr><tr><td> Insomniac2 </td><td>作者に要望に応じて利用できる</td><td>カスタム;レスリーアッシュモア博士によって書かれた（ウェストミンスター大学） </td><td>睡眠2,6,11の分析のために日常的に使用されているMATLABベースのソフトウェア</td></tr><tr><td> Drosonex </td><td>作者に要望に応じて利用できる</td><td>カスタム;トーマスCoradetti（歩道ソフトウェア）によって書かれた</td><td>で収集された生データファイルから生存分析に使用するPC MSVC6プログラムTrikineticsシステム</td></tr><tr><td> Photoshop CS3の</td><td>アドベ</td><td></td><td>デジタル画像（オプション）からのcfu /プレートの番号を得るために有用</td></tr></tbody></table>

quantitative measurement of the immune response and sleep in drosophila

免疫応答とホストの動作の間の複雑な相互作用は、種の広い範囲に記載されている。過剰睡眠は、特に、哺乳類1感染に対する反応として起こることが知られており、また、最近、 キイロショウジョウバエ 2に記載されている。これは、一般的に睡眠が感染時に宿主に有益であり、それは強力な免疫システム3,4の維持に重要であることが受け入れられている。しかし、この仮説を支持する実験的証拠は、4限られており、免疫応答時の過剰睡眠の機能は不明なままである。我々は、この複雑な問題に対処するための学際的なアプローチを使用していて、単純な遺伝モデル系、ショウジョウバエキイロショウジョウバエの研究を行ってきた。我々はハエの運動行動と睡眠を測定するための標準的なアッセイを使用し、このアッセイはハエinfecteにおける挙動を測定するために使用される方法を示してい細菌の病原性株でd。このアッセイはまた、感染時に個々のハエの生存期間を監視するのに役立ちます。免疫機能の追加措置は、感染症およびNFκB、 ショウジョウバエの自然免疫応答の中心となる重要な転写因子の活性化をクリアするハエの能力を含んでいます。感染時の生存転帰と細菌クリアランスの両方が一緒に感染に対する抵抗性と寛容の指標である。許容範囲は、感染による被害を制限し、それによりシステム5内病原体の高レベルにもかかわらず、生き残るためには、ホストの能力と定義されていて抵抗が、感染をクリアするには、ハエの能力を指します。感染中のNFκB活性のリアルタイム監視は、感染時に生存の分子機構への洞察を提供します。これらの簡単なアッセイにおけるショウジョウバエの使用は睡眠の遺伝学的および分子生物学的解析を容易にと免疫応答とどのようにこれらの2複雑なシステムが相互に影響を受けています。

<ol><li>感染症は、睡眠を促進する。前述したように、この例では、NFκBの遺伝子、 レリッシュ（REL E20）14を欠くカントン-S（CS）は、野生型ハエや変異ハエは2 DAM2アクティビティモニター（各遺伝子型についてn = 32）にロードされ、感染していた。ハエが動作し、感染2,7,8で概日時計の影響を排除するために一定の光の中で維持した。 DDBJリリースE20の変異体は、以前...

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Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

免疫応答と行動の間のリンクを理解するために、我々は中に運動行動を測定する方法を説明します<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;細菌感染だけでなく、モニタリングの生存、細菌負荷、及び先天性免疫、NFκBの重要な調節因子でのリアルタイムのアクティビティによって免疫応答をマウントするには、ハエの能力の中に。

免疫応答やスリープ中の定量的測定<em&gt;ショウジョウバエ</em

A complex interaction between the immune response and  host behavior has been described in a wide range of species. Excess sleep, in  particular, is known ...

Research

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An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

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Novel Whole-tissue Quantitative Assay of Nitric Oxide Levels in Drosophila Neuroinflammatory Response

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In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

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西ナイルウイルス変異株の感染に対するMyD88非介在細胞性免疫応答のインビトロ分析

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