Name: isolating primary melanocyte-like cells from the mouse heart
Uploaded: 2014-09-29T13:00:00
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इस काम VVPMDL को स्वास्थ्य पुरस्कार R01 HL105734 के राष्ट्रीय संस्थान द्वारा समर्थित किया गया स्वास्थ्य अनुसंधान कैरियर पुरस्कार K08 HL094748 के राष्ट्रीय संस्थान द्वारा, भाग में, का समर्थन किया है. VVP अनुदान 11IRG900384 द्वारा समर्थित अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन का एक अभिनव शोधकर्ता है.

1 आवश्यक समाधान और उपकरण तैयारी <ol><li> सबसे पहले, 15 मिनट के लिए उन्हें autoclaving द्वारा सर्जिकल उपकरण (सीधे आकार संदंश, घुमावदार आकार संदंश, सीधे आकार कैंची, और घुमावदार आकार कैंची) बाँझ. 121 डिग्री सेल्सियस पर. ऊतक ...

<ol>
	<li>Hornyak, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitf+dosage+as+a+primary+determinant+of+melanocyte+survival+after+ultraviolet+irradiation.">Mitf dosage as a primary determinant of melanocyte survival after ultraviolet irradiation.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 22, 307-318 (2009).</li><li>Yonetani, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+expansion+of+immature+melanoblasts+and+their+ability+to+repopulate+melanocyte+stem+cells+in+the+hair+follicle.">In vitro expansion of immature melanoblasts and their ability to repopulate melanocyte stem cells in the hair follicle.</a> J. Invest. Dermatol. 128, 408-420 (2008).</li><li>Levin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanocyte-like+cells+in+the+heart+and+pulmonary+veins+contribute+to+atrial+arrhythmia+triggers.">Melanocyte-like cells in the heart and pulmonary veins contribute to atrial arrhythmia triggers.</a> J. Clin. Invest. 119, 3420-3436 (2009).</li><li>Patel, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+insights+in+the+cellular+basis+of+atrial+fibrillation.">Novel insights in the cellular basis of atrial fibrillation.</a> Expert Rev. Cardiovasc. Ther. 8, 907-915 (2010).</li><li>Sviderskaya, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+neurons+and+melanocytes+induced+from+immortal+lines+of+postnatal+neural+crest-like+stem+cells.">Functional neurons and melanocytes induced from immortal lines of postnatal neural crest-like stem cells.</a> FASEB J. 23, 3179-3192 (2009).</li><li>Sviderskaya, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P16Ink4a+in+melanocyte+senescence+and+differentiation.">P16Ink4a in melanocyte senescence and differentiation.</a> J. Natl. Cancer. Inst. 94, 446-454 (2002).</li><li>Cook, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+melanoblasts+in+culture:+Expression+of+BRN2+and+synergistic+regulation+by+fibroblast+growth+factor-2,+stem+cell+factor,+and+endothelin-3.">Human melanoblasts in culture: Expression of BRN2 and synergistic regulation by fibroblast growth factor-2, stem cell factor, and endothelin-3.</a> J. Invest. Dermatol. 121, 1150-1159 (2002).</li><li>Fang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+conditions+for+the+generation+of+melanocytes+from+human+embryonic+stem+cells.">Defining the conditions for the generation of melanocytes from human embryonic stem cells.</a> Stem Cells. 24, 1668-1677 (2006).</li><li>Brito, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Timeline+and+distribution+of+melanocyte+precursors+in+the+mouse+heart.">Timeline and distribution of melanocyte precursors in the mouse heart.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 21, 464-470 (2008).</li><li>Yajima, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolation+of+heart+melanocytes+is+specified+and+the+level+of+pigmentation+in+the+heart+may+correlate+with+coat+color.">The isolation of heart melanocytes is specified and the level of pigmentation in the heart may correlate with coat color.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 21, 471-476 (2008).</li></ol>

कार्डिएक melanocytes सामान्यतः आलिंद अतालता चलाता को जन्म दे कि दिल के भीतर शारीरिक स्थानों में मौजूद हैं. इन क्षेत्रों में फेफड़े के नसों, atrioventricular वलय, पीछे बाएं आलिंद और अंडाकार रंध्र (चित्रा 4) शामिल है?...

हमने हाल ही में मेलेनिन संश्लेषण एंजाइम व्यक्त और आकृति विज्ञान त्वचीय melanocytes सदृश कि चूहों और इंसानों के दिल में एक उपन्यास सेल आबादी की पहचान की. हम इन कोशिकाओं &#39;हृदय melanocytes&#39; कहा जाता है और वे आलिंद अतालता अक्सर मनुष्यों में आरंभ चलाता है जहाँ से शारीरिक स्थानों में मौजूद हैं. हम भी हृदय melanocytes डीसीटी के germline विलोपन के साथ चूहों में आलिंद arrhythmias में योगदान मिला. कार्डिएक melanocytes कम वे सभी आलिंद कोशिकाओं के कम से कम 0.1% शामिल है, जहां माउस प्रांगण भर में वितरित कर रहे हैं. हृदय melanocytes की बिजली और जैविक गुणों की जांच करने के लिए हम Cre-inducible मेलानोसाईट विशिष्ट मार्कर का उपयोग माउस दिल से उन्हें अलग करने के लिए एक प्रक्रिया विकसित की है. हमारे प्रारंभिक प्रक्रिया नवजात murine cardiomyocytes और पैच दबाना रिकॉर्डिंग या पीसीआर विश्लेषण के लिए उपयुक्त कोशिकाओं के झुकेंगे बहुत छोटी संख्या को अलग करने के लिए इस्तेमाल किया उन लोगों से विकसित किया गया था. हालांकि, चंगा में सुधार करने के लिएवें और electrophysiological विश्लेषण या जैव रासायनिक अध्ययन में गहराई से अधिक के लिए हृदय melanocytes, की व्यवहार्यता, हम त्वचीय melanocytes अलग करने के लिए डिज़ाइन किया गया है उन से एक परिष्कृत प्रक्रिया विकसित की है. इस समीक्षा में वर्णित और प्रदर्शन की प्रक्रिया एक शुद्ध आबादी के रूप में या cardiomyocytes साथ चढ़ाया जा सकता है कि स्वस्थ हृदय melanocytes उत्पादन का लाभ दिया है.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of the reagent</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 <td>Comment</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>MCDB 153</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>M7403</td>
 <td>Dissolve in: Water</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DPBS, no calcium no magnesium</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>14190136 </td>
 <td>Stock Conc.: 1X 
 Working Conc.: 1X</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sodium Bicarbonate, or Sodium Bicarbonate Solution, 7.5% </td>
 <td>Sigma-Aldrich </td>
 <td>S5761 or S8761 </td>
 <td>Water 
 Stock Conc.: 1X 
 Working Conc.: 1X</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Penicillin-streptomycin </td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>15140163 </td>
 <td>Stock Conc.: 100X 
 Working Conc.: 1X</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fetal Bovine Serum</td>
 <td>Life Technology</td>
 <td>Certified</td>
 <td>Working Conc.: 4%</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>TPA</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>P1585</td>
 <td>DMSO 
 Stock Conc.: 3.2 &mu;M 
 Working Conc.: 32 nM</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Transferrin</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>T8158</td>
 <td>DPBS 
 Stock Conc.: 0.1 mg/ml 
 Working Conc.: 1 &mu;g/ml </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dibutyryl cyclic AMP</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>D0627</td>
 <td>DPBS 
 Stock Conc.: 0.5 mM 
 Working Conc.: 5 &mu;M</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Insulin</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>I6634</td>
 <td>10 mM 
 acetic acid 
 Stock Conc.: 1 mg/ml 
 Working Conc.: 5 &mu;g/ml</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Basic FGF</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>354060</td>
 <td>Water 
 Stock Conc.: 4 ng/&mu;l 
 Working Conc.: 4 ng/ml</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

isolating primary melanocyte-like cells from the mouse heart

हम चूहों में आलिंद अतालता चलाता है कि योगदान करने के चूहों और इंसानों के दिलों में (भी हृदय melanocytes के रूप में जाना जाता है) मेलानोसाईट कोशिकाओं की तरह का एक उपन्यास आबादी की पहचान की. हृदय melanocytes की बिजली और जैविक गुणों की जांच करने के लिए हम हम नवजात murine cardiomyocytes अलग करने के लिए डिज़ाइन किया गया है उन से व्युत्पन्न है कि माउस दिल से उन्हें अलग करने के लिए एक प्रक्रिया विकसित की है. अधिक व्यापक पैच दबाना या जैव रासायनिक अध्ययन के लिए उपयुक्त स्वस्थ हृदय melanocytes प्राप्त करने के लिए, हम अलग और मूल त्वचीय melanocytes अलग करने के लिए डिज़ाइन किया गया है उन पर आधारित हृदय melanocytes चढ़ाना के लिए एक परिष्कृत प्रक्रिया विकसित की है. परिष्कृत प्रक्रिया इस समीक्षा में प्रदर्शन किया और एक शुद्ध आबादी के रूप में या cardiomyocytes साथ चढ़ाया जा सकता है कि स्वस्थ मेलानोसाईट की तरह कोशिकाओं की बड़ी संख्या का उत्पादन किया जाता है.

इस आलेख में वर्णित प्रोटोकॉल हम पहले से murine हृदय से हृदय melanocytes के लिए अलग प्रकाशित एक की तुलना में एक बेहतर तकनीक है. यह प्रक्रिया हृदय मेलानोसाईट तरह कोशिकाओं लेबल मेलेनिन संश्लेषण एंजाइम विशिष्ट Cre-recombinase...

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Isolating Primary Melanocyte-like Cells from the Mouse Heart

इस प्रोटोकॉल में, ई डब्ल्यू आलिंद अतालता चूहों में चलाता है के लिए योगदान है कि चूहों और इंसानों के दिलों में (भी हृदय melanocytes के रूप में जाना जाता है) मेलानोसाईट कोशिकाओं की तरह का एक उपन्यास आबादी की पहचान की.

माउस दिल से प्राथमिक Melanocyte कोशिकाओं की तरह अलग

We identified a novel population of melanocyte-like cells (also known as cardiac melanocytes) in the hearts of mice and humans that contribute to atrial ...

Research

JoVE Journal

Biology

Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

वयस्क चूहा हार्ट Myocytes के प्राथमिक संस्कृति

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

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शीतल Musculoskeletal ऊतकों से स्टेम कोशिकाओं को अलग

Adult stem cells have long been discussed in regards to their application in regenerative medicine. Adult stem cells have generated a great deal of ...

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Clonogenic परख: पक्षपाती कक्ष

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नाइट्रिक ऑक्साइड और कोशिकाओं से superoxide इलेक्ट्रॉन paramagnetic अनुनाद स्पेक्ट्रोस्कोपी द्वारा कट्टरपंथी आयनों की जांच स्पिन जाल का उपयोग

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Selecting and Isolating Colonies of Human Induced Pluripotent Stem Cells Reprogrammed from Adult Fibroblasts

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Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

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विकासशील भ्रूण माउस हार्ट वाल्व क्षेत्र से प्रोटीन अलगाव

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अलगाव और माउस महाधमनी endothelial कोशिकाओं के प्राथमिक संस्कृति

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Primary Cell Cultures from the Mouse Retinal Pigment Epithelium

माउस रेटिना वर्णक उपकला से प्राथमिक सेल संस्कृतियों

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Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart

अलगाव, लक्षण वर्णन, और वयस्क माउस दिल से हृदय स्टेम कोशिकाओं के भेदभाव

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality around the world. A major goal of regenerative medicine is to replenish the dead ...