Name: isolating primary melanocyte-like cells from the mouse heart
Uploaded: 2014-09-29T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolating Primary Melanocyte-like Cells from the Mouse Heart at JoVE.com

Bu çalışma VVPMDL için Sağlık ödülü R01 HL105734 Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenen Sağlık Araştırma Kariyer Ödülü K08 HL094748 Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından, kısmen desteklenmektedir. VVP hibe 11IRG900384 tarafından desteklenen Amerikan Kalp Derneği&#39;nin Yenilikçi Araştırmacı olduğunu.

1. Gerekli Çözümler ve Ekipmanları hazırlanması <ol><li> İlk olarak, 15 dakika boyunca onları otoklav ile cerrahi aletler (düz şekli forseps, kavisli şekli forseps, düz şekli makas ve kavisli şekli makas) sterilize. 121 ° C &#39;de. Doku kadar kıyma için kullanılacak bir set kalplerini ve diğer set dışarı Anatomi için kullanılan araçların, 2 set hazırlayın. </li><li> Steril, filtrelenmiş su 900 ml MCDB153 kültür ortamı 1 paket çözülür ve toz çözününceye kadar yavaş yavaş karı...

<ol>
	<li>Hornyak, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitf+dosage+as+a+primary+determinant+of+melanocyte+survival+after+ultraviolet+irradiation.">Mitf dosage as a primary determinant of melanocyte survival after ultraviolet irradiation.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 22, 307-318 (2009).</li><li>Yonetani, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+expansion+of+immature+melanoblasts+and+their+ability+to+repopulate+melanocyte+stem+cells+in+the+hair+follicle.">In vitro expansion of immature melanoblasts and their ability to repopulate melanocyte stem cells in the hair follicle.</a> J. Invest. Dermatol. 128, 408-420 (2008).</li><li>Levin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanocyte-like+cells+in+the+heart+and+pulmonary+veins+contribute+to+atrial+arrhythmia+triggers.">Melanocyte-like cells in the heart and pulmonary veins contribute to atrial arrhythmia triggers.</a> J. Clin. Invest. 119, 3420-3436 (2009).</li><li>Patel, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+insights+in+the+cellular+basis+of+atrial+fibrillation.">Novel insights in the cellular basis of atrial fibrillation.</a> Expert Rev. Cardiovasc. Ther. 8, 907-915 (2010).</li><li>Sviderskaya, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+neurons+and+melanocytes+induced+from+immortal+lines+of+postnatal+neural+crest-like+stem+cells.">Functional neurons and melanocytes induced from immortal lines of postnatal neural crest-like stem cells.</a> FASEB J. 23, 3179-3192 (2009).</li><li>Sviderskaya, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P16Ink4a+in+melanocyte+senescence+and+differentiation.">P16Ink4a in melanocyte senescence and differentiation.</a> J. Natl. Cancer. Inst. 94, 446-454 (2002).</li><li>Cook, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+melanoblasts+in+culture:+Expression+of+BRN2+and+synergistic+regulation+by+fibroblast+growth+factor-2,+stem+cell+factor,+and+endothelin-3.">Human melanoblasts in culture: Expression of BRN2 and synergistic regulation by fibroblast growth factor-2, stem cell factor, and endothelin-3.</a> J. Invest. Dermatol. 121, 1150-1159 (2002).</li><li>Fang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+conditions+for+the+generation+of+melanocytes+from+human+embryonic+stem+cells.">Defining the conditions for the generation of melanocytes from human embryonic stem cells.</a> Stem Cells. 24, 1668-1677 (2006).</li><li>Brito, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Timeline+and+distribution+of+melanocyte+precursors+in+the+mouse+heart.">Timeline and distribution of melanocyte precursors in the mouse heart.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 21, 464-470 (2008).</li><li>Yajima, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolation+of+heart+melanocytes+is+specified+and+the+level+of+pigmentation+in+the+heart+may+correlate+with+coat+color.">The isolation of heart melanocytes is specified and the level of pigmentation in the heart may correlate with coat color.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 21, 471-476 (2008).</li></ol>

Kardiyak melanosit sık atriyal aritmi tetikler doğuran kalp içindeki anatomik yerlerde bulunurlar. Bu bölgeler pulmoner venler, atriyoventriküler halkasını, posterior sol atrium ve foramen ovale (Şekil 4) içerir. Bu hücreler aritmogenez oynadıkları rolü anlamak için, onları tecrit ve fizyolojisini incelemek için teknikler geliştirmek. Ancak, biz bu tekniği geliştirerek kalp melanosit sağlıklı ve daha büyük miktarlarda eksojen uyaranlara kardiyak melanosit yanıtını araştırmak...

Biz son zamanlarda melanin sentezi enzimleri ifade ve morfolojik deri melanosit benzer farelerin ve insanların kalbinde yeni bir hücre popülasyonu tespit. Biz bu hücrelerin kalp melanosit &#39;olarak adlandırılan ve atriyal aritmi genellikle insanlar köken tetikler hangi anatomik yerlerde bulunurlar bulundu. Biz de kalp melanosit DCT germline silinmesi ile farelerde atriyal aritmi katkıda bulundu. Kardiyak melanosit seyrek hepsi atriyal hücrelerin en az% 0.1 içerirler fare atriyum boyunca dağıtılır. Kardiyak melanosit elektriksel ve biyolojik özelliklerinin incelenmesi için biz Cre-uyarılabilir melanosit spesifik işaretlerini kullanarak fare kalp onları izole etmek için bir prosedür geliştirmiştir. Bizim ilk işlemi yenidoğan kemirgen kardiyomiyositlerin ve yama kelepçe kayıtları veya PCR analizi için uygun hücrelerin vermiştir çok az sayıda izole etmek için kullanılan geliştirildi. Ancak, iyileşmek geliştirmek içininci ve elektrofizyolojik analiz veya biyokimyasal çalışmalar daha derinlemesine kardiyak melanosit, canlılığı, biz deri melanosit yalıtmak için tasarlanmış olanlar bir rafine prosedür geliştirmiştir. Bu derlemede anlatılan ve gösterilen prosedür saf nüfus olarak veya kardiyomiyositlerin ile kaplı olabilir sağlıklı kalp melanosit üretme avantajına sahiptir.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of the reagent</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 <td>Comment</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>MCDB 153</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>M7403</td>
 <td>Dissolve in: Water</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DPBS, no calcium no magnesium</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>14190136 </td>
 <td>Stock Conc.: 1X 
 Working Conc.: 1X</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sodium Bicarbonate, or Sodium Bicarbonate Solution, 7.5% </td>
 <td>Sigma-Aldrich </td>
 <td>S5761 or S8761 </td>
 <td>Water 
 Stock Conc.: 1X 
 Working Conc.: 1X</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Penicillin-streptomycin </td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>15140163 </td>
 <td>Stock Conc.: 100X 
 Working Conc.: 1X</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fetal Bovine Serum</td>
 <td>Life Technology</td>
 <td>Certified</td>
 <td>Working Conc.: 4%</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>TPA</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>P1585</td>
 <td>DMSO 
 Stock Conc.: 3.2 &mu;M 
 Working Conc.: 32 nM</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Transferrin</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>T8158</td>
 <td>DPBS 
 Stock Conc.: 0.1 mg/ml 
 Working Conc.: 1 &mu;g/ml </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dibutyryl cyclic AMP</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>D0627</td>
 <td>DPBS 
 Stock Conc.: 0.5 mM 
 Working Conc.: 5 &mu;M</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Insulin</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>I6634</td>
 <td>10 mM 
 acetic acid 
 Stock Conc.: 1 mg/ml 
 Working Conc.: 5 &mu;g/ml</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Basic FGF</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>354060</td>
 <td>Water 
 Stock Conc.: 4 ng/&mu;l 
 Working Conc.: 4 ng/ml</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

isolating primary melanocyte-like cells from the mouse heart

Biz farelerde atriyal aritmi tetikler katkıda farelerin ve insanların kalplerinde (aynı zamanda kardiyak melanosit olarak da bilinir) melanosit benzeri hücrelerin yeni bir nüfus tespit. Kardiyak melanosit elektriksel ve biyolojik özelliklerinin incelenmesi için biz yenidoğan kemirgen kardiyomiyositlerin yalıtmak için tasarlanmış olanlar türetilen fare kalpleri onları izole etmek için bir prosedür geliştirmiştir. Daha geniş olduğunda, yamalı kenetleme ve biyokimyasal çalışmalar için uygun sağlıklı kalp melanosit elde etmek amacıyla, ilk olarak izole edilmesi ve deri melanositleri izole etmek için tasarlanmış olanlar göre kalp melanosit kaplama için zarif bir prosedür geliştirilmiştir. Rafine işlemi bu incelemede gösterdi ve saf bir nüfus olarak veya kardiyomiyositlerin ile kaplı olabilir sağlıklı melanosit benzeri hücrelerin daha fazla sayıda üretir.

Bu makalede açıklanan protokol daha önce sıçangil kalp, kalp melanosit izole etmek için yayınlanmış bir oranla geliştirilmiş bir tekniktir. Bu prosedür, kardiyak melanosit-benzeri hücreleri etiketlemek için melanin sentezi, enzim spesifik Kre-rekombinaz tarafından tahrik floresan belirteçlerin kullanımına başvurmaktadır. Atriyal miyositlerden kalp melanosit ayırt morfolojik farklılıklar henüz (Şekil 1A) geliştirdik değil çünkü, taze izole edilmiş embriyonik veya neonatal h...

Watch this Scientific Journal Video about Isolating Primary Melanocyte-like Cells from the Mouse Heart at JoVE.com

Isolating Primary Melanocyte-like Cells from the Mouse Heart

Bu protokolde, w e atriyal aritmi farelerde tetikler katkıda farelerin ve insanların kalplerinde (aynı zamanda kardiyak melanosit olarak da bilinir) melanosit benzeri hücrelerin yeni bir nüfus tespit.

Fare Kalpten İlköğretim Melanocyte gibi Hücreleri Ayırma

We identified a novel population of melanocyte-like cells (also known as cardiac melanocytes) in the hearts of mice and humans that contribute to atrial ...

Research

JoVE Journal

Biology

Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

Yetişkin Sıçan Kalp miyositler İlköğretim Kültür

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Isolating Stem Cells from Soft Musculoskeletal Tissues

Yumuşak Kas-iskelet Dokular Kök Hücre Yalıtımlı

Adult stem cells have long been discussed in regards to their application in regenerative medicine. Adult stem cells have generated a great deal of ...

Clonogenic Assay: Adherent Cells

Clonogenic Testi: yapışkan Hücreler

The clonogenic (or colony forming) assay has been established for more than 50 years; the original paper describing the technique was published in 19561. ...

Detection of Nitric Oxide and Superoxide Radical Anion by Electron Paramagnetic Resonance Spectroscopy from Cells using Spin Traps

Nitrik Oksit ve hücreler arası Elektron Paramanyetik Rezonans Spektroskopisi ile süperoksit Radikal Anyon tespiti Spin Tuzakları kullanarak

Reactive nitrogen/oxygen species (ROS/RNS) at low concentrations play an important role in regulating cell function, signaling, and immune response but in ...

Selecting and Isolating Colonies of Human Induced Pluripotent Stem Cells Reprogrammed from Adult Fibroblasts

İnsan İsteyerek Pluripotent Kök Hücre seçme ve ayırma Kolonileri Yetişkin Fibroblastlar gelen reprogrammed

Herein we present a protocol of reprogramming human adult fibroblasts into human induced pluripotent stem cells (hiPSC) using retroviral vectors encoding ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

İsteyerek Pluripotent Kök Hücrelerinin Elde Edilen Fare Üretimi

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Protein Isolation from the Developing Embryonic Mouse Heart Valve Region

Gelişmekte Embriyonik Fare Kalp Vana Bölgesi&#39;nde Protein İzolasyonu

Western blot analysis is a commonly employed technique for detecting and quantifying protein levels. However, for small tissue samples, this analysis ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

İzolasyon ve Fare aort endotel hücreleri İlköğretim Kültür

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Primary Cell Cultures from the Mouse Retinal Pigment Epithelium

Fare retina Pigment epiteli birincil hücre kültürleri

The retinal pigment epithelium (RPE) is a highly polarized multi-functional epithelium that is located between the neural retina and the choroid of the ...

Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart

Yalıtım, karakterizasyonu ve yetişkin fare kalp kalp kök hücre farklılaşma

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality around the world. A major goal of regenerative medicine is to replenish the dead ...