Name: a novel method for the culture and polarized stimulation of human intestinal mucosa explants
Uploaded: 2013-05-01T12:00:00
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우리는 산소 챔버를 제공하는 우수한 기술 지원 및 박사 안토니오 디 Sabatino의를 위해 에리카 Mileti 감사합니다. 자금 조달 : MR에와 폰다 치오 Cariplo와 마리 퀴리 국제 교육 이동성 네트워크 (크로스 토크 부여 계약 번호 : 21553-2)에 의해 지원 :이 작품은 7 EU 프레임 워크 프로그램 (Dendroworld IBDase, ERC)에서 교부금에 의해 지원되었다 KT.

1. 얻기 및 조직 준비 <ol><li> 조직 (건강 또는 IBD 점막)이 수술하는 동안 얻을 수 있습니다. 일단 시편은 4 ° C에서 또는 얼음에 펜 / Strep의로 보충 칼슘 + + / 마그네슘 + + 무료 HBSS 버퍼에 유지 가능한 빨리 실험실로 전송을 절제합니다. </li></ol> 시편의 * 사이즈는 조직의 가용성에 따라 달라 얻은 조직의 부분은, 진단을 위해 필요하지 않습니다 것을 엄격 건강하고...

<ol>
	<li>Schuller, S., Lucas, M., Kaper, J. B., Giron, J. A., Phillips, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ex+vivo+response+of+human+intestinal+mucosa+to+enteropathogenic+Escherichia+coli+infection.">The ex vivo response of human intestinal mucosa to enteropathogenic Escherichia coli infection.</a> Cell. Microbiol. 11, 521-530 (2009).</li><li>Tsilingiri, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotic+and+postbiotic+activity+in+health+and+disease:+comparison+on+a+novel+polarised+ex-vivo+organ+culture+model.">Probiotic and postbiotic activity in health and disease: comparison on a novel polarised ex-vivo organ culture model.</a> Gut. , (2012).</li><li>Tsilingiri, K., Rescigno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Should+probiotics+be+tested+on+ex+vivo+organ+culture+models?.">Should probiotics be tested on ex vivo organ culture models?.</a> Gut Microbes. , (2012).</li><li>Mileti, E., Matteoli, G., Iliev, I. D., Rescigno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+immunomodulatory+properties+of+three+probiotic+strains+of+Lactobacilli+using+complex+culture+systems:+prediction+for+in+vivo+efficacy.">Comparison of the immunomodulatory properties of three probiotic strains of Lactobacilli using complex culture systems: prediction for in vivo efficacy.</a> PLoS One. 4, e7056 (2009).</li><li>Cencic, A., Langerholc, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+cell+models+of+the+gut+and+their+applications+in+food+microbiology--a+review.">Functional cell models of the gut and their applications in food microbiology--a review.</a> Int. J. Food Microbiol. 141, S4-S14 (2010).</li><li>te Velde, A. A., Verstege, M. A., Hommes, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+appraisal+of+the+current+practice+in+murine+TNBS-induced+colitis.">Critical appraisal of the current practice in murine TNBS-induced colitis.</a> Inflamm. Bowel Dis. 12, 995-999 (2006).</li><li>Senior, P. V., Pritchett, C. J., Sunter, J. P., Appleton, D. R., Watson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crypt+regeneration+in+adult+human+colonic+mucosa+during+prolonged+organ+culture.">Crypt regeneration in adult human colonic mucosa during prolonged organ culture.</a> J. Anat. 134, 459-469 (1982).</li><li>Browning, T. H., Trier, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+culture+of+mucosal+biopsies+of+human+small+intestine.">Organ culture of mucosal biopsies of human small intestine.</a> J. Clin. Invest. 48, 1423-1432 (1969).</li><li>Besselink, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotic+prophylaxis+in+predicted+severe+acute+pancreatitis:+a+randomised,+double-blind,+placebo-controlled+trial.">Probiotic prophylaxis in predicted severe acute pancreatitis: a randomised, double-blind, placebo-controlled trial.</a> Lancet. 371, 651-659 (2008).</li><li>Lakhdari, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+NF-kappaB+modulation+capabilities+within+human+intestinal+commensal+bacteria.">Identification of NF-kappaB modulation capabilities within human intestinal commensal bacteria.</a> J. Biomed. Biotechnol. 2011, 282356 (2011).</li></ol>

인간의 장 점막에 대한 치료가 유효하게 테스트 할 수있는 생리학 관련 모델에 대한 필요성은 오랫동안 강조하고있다. 많은 연구자들은 그 목적을 위해 지금까지 사용한 셀 5와 마우스 모델 모두 6 잠재적 인 유물과 결함을 발견했습니다. 유망한 전임상 데이터가 자주 얻을 수있다하더라도, 실제로, 이들은 거의 중요한 임상 이득으로 변환하지 않습니다. 이 ?...

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Regeant</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog No.</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Reagents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X HBSS</td>
			<td>Eurocalne</td>
			<td>ECM4006XL</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peni/Strepto</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>DE17602E</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15750-037</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE12614</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS-Na</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16000-044</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100X ITS-X</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>51500-056</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>Tebu-bio</td>
			<td>100-15</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE17605E</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non essential aminoacids 100X</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140-035</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaPyr</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11360-039</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Materials</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cloning cylinders 6x8 mm</td>
			<td>BellCo</td>
			<td>2090-00608</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cloning cylinders 8x8 mm</td>
			<td>BellCo</td>
			<td>2090-0080</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cloning cylinders 10x10 mm</td>
			<td>BellCo</td>
			<td>2090-01010</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal grids</td>
			<td>Home made</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centre well organ culture plate</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353037</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical glue (Vetbond)</td>
			<td>3M</td>
			<td>1469SB</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen Jars</td>
			<td>Home made</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen tanks</td>
			<td>Air Liquid Sanit&agrave;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a novel method for the culture and polarized stimulation of human intestinal mucosa explants

몇 가지 모델은 현재 현실적으로 상호 작용의 다양한 일어나는 복잡한 인간의 대장의 미세 환경을 시뮬레이션하기 위해 존재한다. 동시에 실수로 음식을 섭취하는 병원성 미생물에 대하여 효과적인 면역 반응을 설치하는 동안 그들은 음식 항원에 대한 전체 면역 반응을 유도 내성 형성으로 적절한 항상성이 직접 이러한 상호 작용에 따라 달라집니다. 장내 항상성은 점액의 부착 / 분해를 조절하는 미생물 (식품 관련 유익한 박테리아 변종 포함)와 호스트 간의 여러 복잡한 상호 작용을 통해도 보존되어, 상피 장벽 항균 펩타이드의 생산, 그리고 &quot;교육&quot; 인구의 고유, 장내 상주 림프 세포의 tolerogenic 또는 면역 표현형 제어 &#39;를 상피 세포. 이러한 상호 작용은 생체 분석에로 재현하는 지금까지 매우 어려웠을배양 세포주 또는 말초 혈액 단핵 세포를 사용하여. 또한, 마우스 모델은 인간의 창자에 대하여 장 점막 (점액 층 조직, 공생 박테리아 사회)의 구성 요소에 실질적으로 차이가 있습니다. 따라서, 이러한 과민성 대장 증후군, 염증성 장 질환이나 대장 암과 같은 중요한 스트레스 관련 또는 병적 조건을 병원에 데려 수 치료의 다양한 연구가 수행하기 어려운되었습니다. 이러한 문제를 해결하기 위해, 우리는 우리가 편광 방식으로, 호스트 미생물 및 면역 반응에 의해 현장 조화에서 자신을 유지 인간의 창자 점막의 절편을 자극 할 수있는 새로운 시스템을 개발했다. 편광 혀끝의 자극의 결과에 대한 매우 중요 면역 반응을 이끌어. 그것은 반복적으로 그들이 장 EPI의 정점 얼굴을 무시할 때 동일한 자극이 완전히 다른 반응을 일으킬 수 것으로 나타났습니다thelium, basolaterally 상피 세포를 자극하거나 고유 층의 구성 요소와 직접 접촉으로 오는 tolerogenic에서 면역 원성에 대한 표현형을 전환하고 지역에서 불필요하고 과도한 염증을 일으키는 원인. 우리는 접착에 의해 점막의 정점 얼굴에 자극의 영역이 같은 프로토콜에 설명한다 구분 동굴 실린더 편광 자극을 달성했다. 우리는 다른 세 가지 유산균 균주의 차등 효과 사이 검토하기 위해이 모델을 사용했다. 우리는이 모델 시스템이 건강과 질병 상태에서 프로바이오틱스의 면역 특성을 평가하는 매우 강력한 것을 보여줍니다.

우리는 조직의 웰빙을 유지 적어도 24 시간 동안 문화 건강하고 IBD 인간의 창자 점막을 유지에 성공했다. 문화 시간의 대부분 (전체의 85 % 이상) O 2에서 일어났다면 이전의 관찰 1 항에 따라,이 조직이 기존의 인큐베이터에서 24 시간 (그림 2) 생존하지 않았습니다으로 만 가능했다. 우리는 또한 절편의 다양한 반응을 자극 (혀끝 대 기저)과 자극 2,3의 면역 원성?...

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A Novel Method for the Culture and Polarized Stimulation of Human Intestinal Mucosa Explants

우리는 적어도 24 시간 동안 자극의 다양한 종류에 대한 응답의 문화와 모니터링 인간의 장 점막의 유지 관리를위한 새로운 방법을 소개합니다. 우리의 방법으로, 조직의 극성이 혀끝의 경로를 통해 생리적 자극 수 있도록 유지됩니다.

인간의 장내 점막의 Explants의 문화와 편광 자극을위한 새로운 방법

Few models currently exist to realistically simulate the complex human intestine's micro-environment, where a variety of interactions take place. Proper ...

Research

JoVE Journal

Biology

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

조기 칙 태아 예 생체내 (새로운 문화)의 문화에 대한 방법

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

연구

생물학

Preparation and Culture of Rat Lens Epithelial Explants for Studying Terminal Differentiation

터미널 차별 유학을위한 준비 및 랫 렌즈 상피 Explants의 문화

The anterior surface of the ocular lens is covered by a monolayer of epithelial cells, which proliferate in an annular zone underlying the ciliary body.  ...

The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System

회전 형 바틀 문화 시스템을 사용 로던트 전체 엠브료 문화의 방법

Whole embryo culture (WEC) technique has been developed in 1950's by New and his colleagues, and applied for developmental biology 1. Although development ...

Blastomere Explants to Test for Cell Fate Commitment During Embryonic Development

Blastomere Explants는 배아 개발하는 동안 세포 운명의 헌신에 대해 테스트 할

Fate maps, constructed from lineage tracing all of the cells of an embryo, reveal  which tissues descend from each cell of the embryo.  Although fate maps ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

소설<em&gt; 생체</em배아 마우스 사랑을&gt; 문화 방법

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture

이식편 문화 치아 세균의 개발을 다음과 같은 사항에 대해 슬라이스 문화 방법

Explant culture allows manipulation of developing organs at specific time points&#160;and is therefore an important method for the developmental ...

Subcloning Plus Insertion (SPI) - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

Subcloning Plus Insertion SPI - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

서브 클로닝 플러스 삽입 (SPI) - 유전자 타겟팅 벡터의 신속한 건설 소설 Recombineering 방법

Gene targeting refers to the precise modification of a genetic locus using homologous recombination. The generation of novel cell lines and transgenic ...

A Method for Selecting Structure-switching Aptamers Applied to a Colorimetric Gold Nanoparticle Assay

색채 금 나노 입자 분석에 적용 구조 전환 앱 타머를 선택하는 방법

Small molecules provide rich targets for biosensing applications due to their physiological implications as biomarkers of various aspects of human health ...

Cryosectioning Method for Microdissection of Murine Colonic Mucosa

쥐 대장 점막의 이외에 Microdissection을위한 냉동 절편 방법

The colonic mucosal tissue provides a vital barrier to luminal antigens. This barrier is composed of a monolayer of simple columnar epithelial cells. The ...

An Ex Vivo Tissue Culture Model of Cartilage Remodeling in Bovine Knee Explants

소 무릎 이식에서 연골 리모델링의 전 생체 외 조직 문화 모델

Ex vivo culture systems cover a broad range of experiments dedicated to studying tissue and cellular function in a native setting. Cartilage is a unique ...