Name: isolation, characterization and comparative differentiation of human dental pulp stem cells derived from permanent teeth by using two different methods
Uploaded: 2012-11-24T14:00:00
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Wir danken Dr. Leila Shakeri &amp; Dr. Aref Dournaei für ihre kritischen Diskus und Mr. Mohammad Reza Khadem Sharif für seine technische Unterstützung.

Ein. Bereiten Sie die Enzymlösung und Proliferation Medium (PM) <ol><li> Make Collagenase Typ I Lösung: Einwaage Collagenase Typ I (12 mg / ml) und lösen sich in 1 ml PBS und Filter unter Verwendung einer Spritze 0,2 um Filter. Dann legen Sie es 15 ml Tube und halten Sie sie bei -20 ° C bis benötigt. </li><li> Machen Dispase Lösung: abwiegen Dispase (16 mg / ml) auflösen und in 1 ml PBS und Filter mit einer 0,2 um Spritzenfilter. Dann legen Sie es 15 ml Tube und halten Sie sie ...

<ol>
	<li>Volponi, A. A., Pang, Y., Sharpe, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-based+biological+tooth+repair+and+regeneration.">Stem cell-based biological tooth repair and regeneration.</a> Trends Cell Biol. 20, 715-722 (2010).</li><li>Nosrat, I. V., Widenfalk, J., Olson, L., Nosrat, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+cells+produce+neurotrophic+factors,+interact+with+trigeminal+neurons+in+vitro,+and+rescue+motoneurons+after+spinal+cord+injury.">Dental pulp cells produce neurotrophic factors, interact with trigeminal neurons in vitro, and rescue motoneurons after spinal cord injury.</a> Dev. Biol. 238, 120-132 (2001).</li><li>Gandia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+dental+pulp+stem+cells+improve+left+ventricular+function,+induce+angiogenesis,+and+reduce+infarct+size+in+rats+with+acute+myocardial+infarction.">Human dental pulp stem cells improve left ventricular function, induce angiogenesis, and reduce infarct size in rats with acute myocardial infarction.</a> Stem Cells. 26, 638-645 (2008).</li><li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+(DPSCs)+in+vitro+and+in+vivo.">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.. 97, 13625-13630 (2000).</li><li>Graziano, A., d'Aquino, R., Laino, G., Papaccio, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+stem+cells:+a+promising+tool+for+bone+regeneration.">Dental pulp stem cells: a promising tool for bone regeneration.</a> Stem Cell Rev. 4, 21-26 (2008).</li><li>Kerkis, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+transplantation+of+human+immature+dental+pulp+stem+cells+from+baby+teeth+to+golden+retriever+muscular+dystrophy+(GRMD)+dogs:+Local+or+systemic.">Early transplantation of human immature dental pulp stem cells from baby teeth to golden retriever muscular dystrophy (GRMD) dogs: Local or systemic.</a> J. Transl. Med. 6, 35 (2008).</li><li>Onyekwelu, O., Seppala, M., Zoupa, M., Cobourne, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tooth+development:+2.+Regenerating+teeth+in+the+laboratory.">Tooth development: 2. Regenerating teeth in the laboratory.</a> Dent. Update. 34, 20-29 (2007).</li><li>Cordeiro, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+tissue+engineering+with+stem+cells+from+exfoliated+deciduous+teeth.">Dental pulp tissue engineering with stem cells from exfoliated deciduous teeth.</a> J. Endod. 34 (08), 962-969 (2008).</li><li>Pierdomenico, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipotent+mesenchymal+stem+cells+with+immunosuppressive+activity+can+be+easily+isolated+from+dental+pulp.">Multipotent mesenchymal stem cells with immunosuppressive activity can be easily isolated from dental pulp.</a> Transplantation. 80, 836-842 (2005).</li><li>de Mendonca Costa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstruction+of+large+cranial+defects+in+nonimmunosuppressed+experimental+design+with+human+dental+pulp+stem+cells.">Reconstruction of large cranial defects in nonimmunosuppressed experimental design with human dental pulp stem cells.</a> J. Craniofac. Surg. 19, 204-210 (2008).</li><li>Tirino, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+the+identification,+characterization+and+banking+of+human+DPSCs:+current+strategies+and+perspectives.">Methods for the identification, characterization and banking of human DPSCs: current strategies and perspectives.</a> Stem Cell Rev. 7, 608-615 (2011).</li><li>Tirino, V., Paino, F., De Rosa, A., Papaccio, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification,+isolation,+characterization,+and+banking+of+human+dental+pulp+stem+cells.">Identification, isolation, characterization, and banking of human dental pulp stem cells.</a> Methods Mol. Biol. 879, 443-463 (2012).</li><li>Eslaminejad, M. B., Vahabi, S., Shariati, M., Nazarian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+Growth+and+Characterization+of+Stem+Cells+from+Human+Dental+Pulp+of+Deciduous+Versus+Permanent+Teeth.">In vitro Growth and Characterization of Stem Cells from Human Dental Pulp of Deciduous Versus Permanent Teeth.</a> J. Dent. (Tehran). 7, 185-195 (2010).</li><li>Wei, X., Ling, J., Wu, L., Liu, L., Xiao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+mineralization+markers+in+dental+pulp+cells.">Expression of mineralization markers in dental pulp cells.</a> J. Endod. 33, 703-708 (2007).</li><li>Nombela-Arrieta, C., Ritz, J., Silberstein, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+elusive+nature+and+function+of+mesenchymal+stem+cells.">The elusive nature and function of mesenchymal stem cells.</a> Nat. Rev. Mol Cell Biol. 12, 126-131 (2011).</li><li>Huang, G. T., Gronthos, S., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+derived+from+dental+tissues+vs.+those+from+other+sources:+their+biology+and+role+in+regenerative+medicine.">Mesenchymal stem cells derived from dental tissues vs. those from other sources: their biology and role in regenerative medicine.</a> J. Dent. Res. 88, 792-806 (2009).</li><li>Graziano, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scaffold's+surface+geometry+significantly+affects+human+stem+cell+bone+tissue+engineering.">Scaffold's surface geometry significantly affects human stem cell bone tissue engineering.</a> J. Cell Physiol. 214, 166-172 (2008).</li><li>d'Aquino, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+dental+pulp+stem+cells:+from+biology+to+clinical+applications.">Human dental pulp stem cells: from biology to clinical applications.</a> J. Exp. Zool. B. Mol. Dev. Evol. 312, 408-415 (2009).</li><li>Mitsiadis, T. A., Feki, A., Papaccio, G., Caton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+stem+cells,+niches,+and+notch+signaling+in+tooth+injury.">Dental pulp stem cells, niches, and notch signaling in tooth injury.</a> Adv. Dent. Res. 23, 275-279 (2011).</li><li>Shi, S., Gronthos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+niche+of+postnatal+mesenchymal+stem+cells+in+human+bone+marrow+and+dental+pulp.">Perivascular niche of postnatal mesenchymal stem cells in human bone marrow and dental pulp.</a> J. Bone Miner. Res. 18, 696-704 (2003).</li><li>Tomic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunomodulatory+properties+of+mesenchymal+stem+cells+derived+from+dental+pulp+and+dental+follicle+are+susceptible+to+activation+by+toll-like+receptor+agonists.">Immunomodulatory properties of mesenchymal stem cells derived from dental pulp and dental follicle are susceptible to activation by toll-like receptor agonists.</a> Stem Cells Dev. 20, 695-708 (2011).</li><li>Tsukamoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mineralized+nodule+formation+by+cultures+of+human+dental+pulp-derived+fibroblasts.">Mineralized nodule formation by cultures of human dental pulp-derived fibroblasts.</a> Arch. Oral Biol. 37, 1045-1055 (1992).</li><li>About, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+dentin+production+in+vitro.">Human dentin production in vitro.</a> Exp. Cell Res. 258, 33-41 (2000).</li><li>Couble, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odontoblast+differentiation+of+human+dental+pulp+cells+in+explant+cultures.">Odontoblast differentiation of human dental pulp cells in explant cultures.</a> Calcif. Tissue Int. 66, 129-138 (2000).</li><li>Onishi, T., Kinoshita, S., Shintani, S., Sobue, S., Ooshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulation+of+proliferation+and+differentiation+of+dog+dental+pulp+cells+in+serum-free+culture+medium+by+insulin-like+growth+factor.">Stimulation of proliferation and differentiation of dog dental pulp cells in serum-free culture medium by insulin-like growth factor.</a> Arch. Oral Biol. 44 (99), 361-371 (1999).</li><li>Huang, G. T., Sonoyama, W., Chen, J., Park, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+characterization+of+human+dental+pulp+cells:+various+isolation+methods+and+culturing+environments.">In vitro characterization of human dental pulp cells: various isolation methods and culturing environments.</a> Cell Tissue Res. 324, 225-236 (2006).</li><li>Bakopoulou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+the+impact+of+two+different+isolation+methods+on+the+osteo/odontogenic+differentiation+potential+of+human+dental+stem+cells+derived+from+deciduous+teeth.">Assessment of the impact of two different isolation methods on the osteo/odontogenic differentiation potential of human dental stem cells derived from deciduous teeth.</a> Calcif. Tissue Int. 88, 130-141 (2011).</li><li>Curtis, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EF1alpha+and+RPL13a+represent+normalization+genes+suitable+for+RT-qPCR+analysis+of+bone+marrow+derived+mesenchymal+stem+cells.">EF1alpha and RPL13a represent normalization genes suitable for RT-qPCR analysis of bone marrow derived mesenchymal stem cells.</a> BMC Mol. Biol. 11, 61 (2010).</li><li>Suchanek, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+stem+cells+and+their+characterization.">Dental pulp stem cells and their characterization.</a> Biomed. Pap. Med. Fac. Univ. Palacky Olomouc Czech Repub. 153, 31-35 (2009).</li><li>d'Aquino, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+postnatal+dental+pulp+cells+co-differentiate+into+osteoblasts+and+endotheliocytes:+a+pivotal+synergy+leading+to+adult+bone+tissue+formation.">Human postnatal dental pulp cells co-differentiate into osteoblasts and endotheliocytes: a pivotal synergy leading to adult bone tissue formation.</a> Cell Death Differ. 14, 1162-1171 (2007).</li><li>Atari, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+pluripotent+stem+cells+from+human+third+molar+dental+pulp.">Isolation of pluripotent stem cells from human third molar dental pulp.</a> Histol. Histopathol. 26, 1057-1070 (2011).</li></ol>

Dieses Protokoll beschreibt den Prozess der Isolierung und Charakterisierung von hDPSCs von Zahnpulpa mit zwei Methoden, enzymatische Dissoziation und direkte Folge von Stammzellen aus Pulpagewebe Explantate. Zusätzlich wird in vitro Differenzierung dieser Zellen in Odontoblasten, wurde durch quantitative Alizarinrot S &amp; Assay QPCR beurteilt. Bestehenden Protokollen zur Isolierung Pulpagewebe aus menschlichen Zahns worden verschiedenen Instrumente wie Zangen (Knochenzange) 9, E...

Stammzellen sind Zellen, die klonogenen zwei bemerkenswerte Features, wie Multi-Potenz und Selbst-Erneuerung 15 bekannt zu besitzen. Unter allen Stammzellen mit verschiedenen Potenzen replikativen haben dentalen Stammzellen als die postnatale Stammzellen Aufmerksamkeit in den letzten Jahren ziehen wegen ihrer Zugänglichkeit, Plastizität und hohe proliferative Fähigkeit im Vergleich zu anderen adulten Stammzellen 16. Charakteristischerweise ähnlich zu den mesenchymalen Stammzellen sind Zahnpulpa Stammzellen adhärenten Zellen, die mehrfache klonogenen Differenzierungskapazität in Mesenchym und / oder nicht-Mesenchym Abstammungslinien, sowohl in vitro als auch in vivo aufweisen. 1-8,17,18 DPSCs werden identifiziert durch ihre negative Ausdruck von hämatopoetischen Antigene (zB CD45, CD34, CD14) und positive Expression CD90, CD29, CD73, CD105, CD44 und STRO-1. 19,20 Leicht erhalten Potenzial mit minimalen Schmerzen und Morbidität zu menschlichen DPSCs als wertvolleLage Quelle von MSCs zu den gewöhnlichen Quellen, wie Knochenmark mesenchymale Stammzellen 21 verglichen. Im Allgemeinen haben sich entweder durch Auswachsen DPSCs Verfahren, dh Migration von Stammzellen aus Zellstoff Gewebeexplantate (DPSC-OG) 22-24, und / oder durch enzymatischen Verdau (DPSC-ED) 4,6,25 isoliert worden. Frühere Studien haben gezeigt, dass der Isolierungsmethode und Kulturbedingungen können verschiedene Populationen oder Linien unter in vitro Durchlässe 26,27 induzieren. Im Fall der zweiten Zähne (pDPSCs), Huang et al offenbart, dass die enzymatische verdaut pDPSCs höheren Proliferationspotential haben im Vergleich zu den herausgewachsen DPSCs. 26 zudem im Falle von Milchzähnen (dDPSCs), es wurde nachgewiesen, dass STRO-1 &amp; CD34 Marker Ausdruck mehr in dDPSC-ED im Vergleich mit dDPSC-OG. Darüber hinaus erscheint dDPSC-ED höheren Mineralisierungsgeschwindigkeit in definierten osteo / odonto Medium. 27 Daher ist aufgrund der hervorragenden Potenzial DPSCs in regenerative Medizin, werden weitere Studien zum besseren Verständnis der möglichen verschiedenen Populationen, die aus verschiedenen Isolierungsverfahren abgeleitet sind erforderlich. Hier war es Versuch einfache Art Pulpenextraktion einzuführen, indem in einem Schritt dentalen Diamantscheibe um den Prozess der Pulpenextraktion erleichtern. Darüber hinaus wurde nach der Isolierung von menschlichen Zellstoff-Stammzellen durch Anlegen ED oder OG Methoden wurden allgemeinen Eigenschaften &amp; Differenzierungskapazität zwischen zwei Gruppen ebenfalls untersucht.

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog oder Lot. Anzahl </td><td> Kommentare (optional) </td></tr><tr><td> α-MEM </td><td> GIBCO </td><td> 11900-073 </td><td></td></tr><tr><td> Collagenase Typ I </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C0130-100MG </td><td></td></tr><tr><td> Dispase </td><td> GIBCO </td><td> 17105-041 </td><td></td></tr><tr><td> Penicillin / Streptomycin </td><td> GIBCO </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> Amphotericin B </td><td> GIBCO </td><td> 15290-018 </td><td></td></tr><tr><td> Fetal Bovine Serum definierten (FBS) </td><td> HyClone </td><td> SH30070.03 </td><td></td></tr><tr><td> L-Ascorbinsäure-2-Phosphat </td><td> Sigma </td><td> A8960-5G </td><td></td></tr><tr><td> L-Glutamin </td><td> GIBCO </td><td> 25030-024 </td><td></td></tr><tr><td> Dexamethasone </td><td> Sigma </td><td> D4902 </td><td></td></tr><tr><td> β-Glycerol Dinatriumsalz-Hydrat, BioUltra </td><td> Sigma </td><td> G9422-100G </td><td></td></tr><tr><td> Monobasischem Kaliumphosphat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P5655 </td><td></td></tr><tr><td> Osteogenesis Assay Kit </td><td> Millipore </td><td> PS01802031 </td><td></td></tr><tr><td> Mouse IgG2b-PE Isotypenkontrolle </td><td> BD Pharmingen </td><td> 50808088029 </td><td></td></tr><tr><td> FITC Maus IgG2b Isotyp-Kontrolle </td><td> BD Pharmingen </td><td> 559532 </td><td></td></tr><tr><td> FITC-Maus IgG1 κ Isotyp </td><td> BD Pharmingen </td><td> 11471471 </td><td></td></tr><tr><td> FITC / PE Maus-Anti-Human-CD34/CD45 </td><td> BD Pharmingen </td><td>341071 </td><td></td></tr><tr><td> PE-Anti-Human CD146 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 550315 </td><td></td></tr><tr><td> Monoklonalen Maus-Anti-Human-CD90/FITC </td><td> Daka </td><td> 00034418 </td><td></td></tr><tr><td> PE Maus anti-human CD73 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 550257 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-h CD105/Endoglin PE </td><td> BD Pharmingen </td><td> FAB10971P </td><td></td></tr><tr><td> PE-Maus Anti-Human CD11b/Mac1 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 5553888 </td><td></td></tr><tr><td> CD44 PE Maus anti human </td><td> BD Pharmingen </td><td> 555479 </td><td></td></tr><tr><td> Phosphatpufferlösung (PBS) </td><td> GIBCO </td><td> 003000 </td><td></td></tr><tr><td> 70-um Zellsieb </td><td> Falke </td><td> 352360 </td><td></td></tr><tr><td&gt; 0,2 um Spritzenfilter </td><td> Millex-GV </td><td> SLGV033RB </td><td></td></tr><tr><td> 25 cm 2 Kulturflasche </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> Z707481 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> EQUIPMENT </td></tr><tr><td> BD FACSCalibur </td><td> BD </td><td> 342975 </td><td></td></tr><tr><td> Multiskan Mikrotiterplatten-Spektrophotometer </td><td> Thermo Scientific </td><td> 51119200 </td><td></td></tr><tr><td> Fleurcense Mikroskop </td><td> Olymp </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Fließende Software Version 2.3.1 </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

isolation, characterization and comparative differentiation of human dental pulp stem cells derived from permanent teeth by using two different methods

<p class="jove_content"&gt; Entwicklung Weisheitszähne sind leicht zugängliche Quelle von Stammzellen während der Erwachsenenalter, die durch Routine kieferorthopädischen Behandlungen erhalten werden konnte. Menschliche Zellstoff-Stammzellen (hDPSCs) besitzen eine hohe Proliferationspotential mit Multi-lineage Differenzierungspotenzial im Vergleich zu den gewöhnlichen Quelle von adulten Stammzellen<sup&gt; 1-8</sup&gt;; Daher hDPSCs konnten die gute Kandidaten für autologe Transplantation im Tissue Engineering und der regenerativen Medizin sein. Neben diesen Vorteilen besitzen die mesenchymalen Stammzellen (MSC) Funktionen wie immunolodulatory Wirkung machen hDPSCs wertvoller, selbst im Fall von Allograft Transplantation<sup&gt; 6,9,10</sup&gt;. Daher ist der erste Schritt für die Verwendung dieser Quelle von Stammzellen, um die beste Protokoll zur Isolierung von hDPSCs Pulpagewebe auszuwählen. Um dieses Ziel zu erreichen, ist es wichtig, die Wirkung verschiedener Trennung Bedingungen auf unterschiedliche zelluläre Verhaltensweisen wie ihre gemeinsame Oberflächenmarker &amp; auch ihre Differenzierungsfähigkeit zu untersuchen.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; So, hier sind wir trennen menschlichen Pulpagewebe aus beeinflusst dritten Backenzähne, und dann verwendet werden sowohl bestehende Protokolle auf Literatur, zur Isolierung hDPSCs,<sup&gt; 11-13</sup&gt;<em&gt; Dh</em&gt; Enzymatischen Spaltung von Pulpagewebe (DPSC-ED) oder Auswuchs aus Gewebeexplantate (DPSC-OG). In dieser Hinsicht haben wir versucht, die Trennung Methoden mit zahnärztlichen Diamantscheibe erleichtern. Dann werden diese Zellen im Hinblick auf Stromazellen-assoziierte Marker (CD73, CD90, CD105 und CD44), hämatopoetische / endothelialen Marker (CD34, CD45 und CD11b), perivaskuläre Marker, wie CD146 sowie STRO-1 gekennzeichnet. Anschließend wurden diese zwei Protokolle basierend auf der Differenzierung Potenz zu Odontoblasten sowohl durch quantitative Polymerasekettenreaktion (QPCR) &amp; Alizarinrot Färbung verglichen. QPCR wurden für die Bewertung der Expression der Mineralisierung Genen (; ALP, extrazellulären Matrix phosphoglycoprotein; MEPE &amp; Dentin Sialophosphoprotein; DSPP alkalische Phosphatase) verwendet.<sup&gt; 14</sup</p

<ol><li> DPSCs, die durch enzymatische Spaltung (DPSC-ED) erhalten wurden, werden hier am Tag 10, 15,18 (Figur 1) dargestellt. Die Kolonien eingeleitet, auf fast 3 bis 5 Tagen nach der Isolierung zu bilden. </li><li> Entwachsen DPSCs (DPSC-OG) sind in Abbildung 2 an Tag 5, 10, 13 und 18 dargestellt. Fibroblast-ähnliche Zellen aus Pulpagewebe in den Kolben wandern begann parallel Bestellung um fast 5 Tage nach der Aussaat. </li><li> DPSCs bei Passage 3 mit beiden Methoden sind in Abbildung 3 dargestellt...

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Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Das beschriebene Verfahren Isolierung und Charakterisierung von menschlichen Zahnpulpa Stammzellen (hDPSCs) unter Verwendung entweder<strong&gt; Enzymatische Dissoziation von Zellstoff (DPSC-ED)</strong&gt; Oder<strong&gt; Direkte Folge von Stammzellen aus Pulpagewebe Explantate (DPSC-OG). Dann gefolgt von</strong&gt;<em&gt; In vitro</em&gt; Vergleichende Unterscheidung der beiden Arten von hDPSCs zu Odontoblasten.

Isolation, Charakterisierung und vergleichende Differenzierung humaner Dental Pulp Stammzellen aus bleibenden Zähne mit zwei verschiedenen Methoden abgeleitet

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patienten abgeleitet Zellkultur und Isolierung von CD133<sup&gt; +</sup&gt; Mutmaßliche Cancer Stem Cells von Melanoma

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

Forschung

Medizin

Isolation and Functional Characterization of Human Ventricular Cardiomyocytes from Fresh Surgical Samples

Isolierung und funktionelle Charakterisierung der Menschen ventrikuläre Kardiomyozyten von Fresh Chirurgische Proben

Cardiomyocytes from diseased hearts are subjected to complex remodeling processes involving changes in cell structure, excitation contraction coupling and ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

Isolierung von Krebs Stammzellen aus menschlichen Prostatakrebs-Proben

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Two Methods for Establishing Primary Human Endometrial Stromal Cells from Hysterectomy Specimens

Zwei Methoden zur Festlegung von primären humanen Endometrium Stromazellen aus Hysterektomie Proben

Many efforts have been devoted to establish in vitro cell culture systems. These systems are designed to model a vast number of in vivo processes. Cell ...

Enrichment for Chemoresistant Ovarian Cancer Stem Cells from Human Cell Lines

Bereicherung für chemoresistenten Eierstockkrebs Stammzellen aus menschlichen Zelllinien

Cancer stem cells (CSCs) are defined as a subset of slow cycling and undifferentiated cells that divide asymmetrically to generate highly proliferative, ...

Isolation and Cellular Phenotyping of Mesenchymal Stem Cells Derived from Synovial Fluid and Bone Marrow of Minipigs

Isolation und zelluläre Phänotypisierung von mesenchymalen Stammzellen abgeleitet von Synovialflüssigkeit und Knochenmark von Minipigs

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been established after isolation from various tissue sources, including bone marrow and synovial fluid. Recently, ...

Characterization of Immune Cells in Human Adipose Tissue by Using Flow Cytometry

Charakterisierung von Immunzellen im menschlichen Fettgewebe mittels Durchflusszytometrie

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the ...

Oral Biofilm Formation on Different Materials for Dental Implants

Mündliche Biofilmbildung auf unterschiedlichen Materialien für Zahnimplantate

Dental implants and their prosthetic components are prone to bacterial colonization and biofilm formation. The use of materials that provides low ...

An Enzyme-free Method for Isolation and Expansion of Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells

Eine enzymfreie Methode zur Isolierung und Expansion von humanen Adsetzen-abgeleiteten mesenchymalen Stammzellen

Mesenchymal stem cells (MSCs) are a population of multipotent cells that can be isolated from various adult and fetal tissues, including adipose tissue. ...

Ex Vivo Expansion of Hematopoietic Stem Cells from Human Umbilical Cord Blood-derived CD34+ Cells Using Valproic Acid

Ex Vivo Expansion of Hematopoietic Stem Cells from Human Umbilical Cord Blood-derived CD34+ Cells Using Valproic Acid

Ex-Vivo Expansion von hämatopoetischen Stammzellen aus menschlichen Nabelschnur Blut abgeleitet CD34+ Zellen mit Valproinsäure

Umbilical cord blood (UCB) units provide an alternative source of human hematopoietic stem cells (HSCs) for patients who require allogeneic bone marrow ...