Name: isolation, characterization and comparative differentiation of human dental pulp stem cells derived from permanent teeth by using two different methods
Uploaded: 2012-11-24T14:00:00
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Si ringrazia il Dr. Leila Shakeri &amp; Dr. Aref Dournaei per la loro discus critica e Mohammad Reza Khadem Sharif per i suoi supporti tecnici.

1. Preparare la soluzione enzimatica e medie proliferazione (PM) <ol><li> Marca Collagenasi I Soluzione: Pesare, collagenasi di tipo I (12 mg / ml) e sciogliere in 1 ml di PBS e filtro con un filtro 0,2 micron siringa. Poi posto 15 ml tubetto e la tiene a -20 ° C fino al momento dell&#39;uso. </li><li> Fai Soluzione dispasi: Pesare dispasi (16 mg / ml) e sciogliere in 1 ml di PBS e filtro con un filtro 0,2 micron siringa. Poi posto 15 ml tubetto e la tiene a 4 ° C fino al momento de...

<ol>
	<li>Volponi, A. A., Pang, Y., Sharpe, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-based+biological+tooth+repair+and+regeneration.">Stem cell-based biological tooth repair and regeneration.</a> Trends Cell Biol. 20, 715-722 (2010).</li><li>Nosrat, I. V., Widenfalk, J., Olson, L., Nosrat, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+cells+produce+neurotrophic+factors,+interact+with+trigeminal+neurons+in+vitro,+and+rescue+motoneurons+after+spinal+cord+injury.">Dental pulp cells produce neurotrophic factors, interact with trigeminal neurons in vitro, and rescue motoneurons after spinal cord injury.</a> Dev. Biol. 238, 120-132 (2001).</li><li>Gandia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+dental+pulp+stem+cells+improve+left+ventricular+function,+induce+angiogenesis,+and+reduce+infarct+size+in+rats+with+acute+myocardial+infarction.">Human dental pulp stem cells improve left ventricular function, induce angiogenesis, and reduce infarct size in rats with acute myocardial infarction.</a> Stem Cells. 26, 638-645 (2008).</li><li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+(DPSCs)+in+vitro+and+in+vivo.">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.. 97, 13625-13630 (2000).</li><li>Graziano, A., d'Aquino, R., Laino, G., Papaccio, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+stem+cells:+a+promising+tool+for+bone+regeneration.">Dental pulp stem cells: a promising tool for bone regeneration.</a> Stem Cell Rev. 4, 21-26 (2008).</li><li>Kerkis, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+transplantation+of+human+immature+dental+pulp+stem+cells+from+baby+teeth+to+golden+retriever+muscular+dystrophy+(GRMD)+dogs:+Local+or+systemic.">Early transplantation of human immature dental pulp stem cells from baby teeth to golden retriever muscular dystrophy (GRMD) dogs: Local or systemic.</a> J. Transl. Med. 6, 35 (2008).</li><li>Onyekwelu, O., Seppala, M., Zoupa, M., Cobourne, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tooth+development:+2.+Regenerating+teeth+in+the+laboratory.">Tooth development: 2. Regenerating teeth in the laboratory.</a> Dent. Update. 34, 20-29 (2007).</li><li>Cordeiro, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+tissue+engineering+with+stem+cells+from+exfoliated+deciduous+teeth.">Dental pulp tissue engineering with stem cells from exfoliated deciduous teeth.</a> J. Endod. 34 (08), 962-969 (2008).</li><li>Pierdomenico, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipotent+mesenchymal+stem+cells+with+immunosuppressive+activity+can+be+easily+isolated+from+dental+pulp.">Multipotent mesenchymal stem cells with immunosuppressive activity can be easily isolated from dental pulp.</a> Transplantation. 80, 836-842 (2005).</li><li>de Mendonca Costa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstruction+of+large+cranial+defects+in+nonimmunosuppressed+experimental+design+with+human+dental+pulp+stem+cells.">Reconstruction of large cranial defects in nonimmunosuppressed experimental design with human dental pulp stem cells.</a> J. Craniofac. Surg. 19, 204-210 (2008).</li><li>Tirino, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+the+identification,+characterization+and+banking+of+human+DPSCs:+current+strategies+and+perspectives.">Methods for the identification, characterization and banking of human DPSCs: current strategies and perspectives.</a> Stem Cell Rev. 7, 608-615 (2011).</li><li>Tirino, V., Paino, F., De Rosa, A., Papaccio, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification,+isolation,+characterization,+and+banking+of+human+dental+pulp+stem+cells.">Identification, isolation, characterization, and banking of human dental pulp stem cells.</a> Methods Mol. Biol. 879, 443-463 (2012).</li><li>Eslaminejad, M. B., Vahabi, S., Shariati, M., Nazarian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+Growth+and+Characterization+of+Stem+Cells+from+Human+Dental+Pulp+of+Deciduous+Versus+Permanent+Teeth.">In vitro Growth and Characterization of Stem Cells from Human Dental Pulp of Deciduous Versus Permanent Teeth.</a> J. Dent. (Tehran). 7, 185-195 (2010).</li><li>Wei, X., Ling, J., Wu, L., Liu, L., Xiao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+mineralization+markers+in+dental+pulp+cells.">Expression of mineralization markers in dental pulp cells.</a> J. Endod. 33, 703-708 (2007).</li><li>Nombela-Arrieta, C., Ritz, J., Silberstein, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+elusive+nature+and+function+of+mesenchymal+stem+cells.">The elusive nature and function of mesenchymal stem cells.</a> Nat. Rev. Mol Cell Biol. 12, 126-131 (2011).</li><li>Huang, G. T., Gronthos, S., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+derived+from+dental+tissues+vs.+those+from+other+sources:+their+biology+and+role+in+regenerative+medicine.">Mesenchymal stem cells derived from dental tissues vs. those from other sources: their biology and role in regenerative medicine.</a> J. Dent. Res. 88, 792-806 (2009).</li><li>Graziano, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scaffold's+surface+geometry+significantly+affects+human+stem+cell+bone+tissue+engineering.">Scaffold's surface geometry significantly affects human stem cell bone tissue engineering.</a> J. Cell Physiol. 214, 166-172 (2008).</li><li>d'Aquino, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+dental+pulp+stem+cells:+from+biology+to+clinical+applications.">Human dental pulp stem cells: from biology to clinical applications.</a> J. Exp. Zool. B. Mol. Dev. Evol. 312, 408-415 (2009).</li><li>Mitsiadis, T. A., Feki, A., Papaccio, G., Caton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+stem+cells,+niches,+and+notch+signaling+in+tooth+injury.">Dental pulp stem cells, niches, and notch signaling in tooth injury.</a> Adv. Dent. Res. 23, 275-279 (2011).</li><li>Shi, S., Gronthos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+niche+of+postnatal+mesenchymal+stem+cells+in+human+bone+marrow+and+dental+pulp.">Perivascular niche of postnatal mesenchymal stem cells in human bone marrow and dental pulp.</a> J. Bone Miner. Res. 18, 696-704 (2003).</li><li>Tomic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunomodulatory+properties+of+mesenchymal+stem+cells+derived+from+dental+pulp+and+dental+follicle+are+susceptible+to+activation+by+toll-like+receptor+agonists.">Immunomodulatory properties of mesenchymal stem cells derived from dental pulp and dental follicle are susceptible to activation by toll-like receptor agonists.</a> Stem Cells Dev. 20, 695-708 (2011).</li><li>Tsukamoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mineralized+nodule+formation+by+cultures+of+human+dental+pulp-derived+fibroblasts.">Mineralized nodule formation by cultures of human dental pulp-derived fibroblasts.</a> Arch. Oral Biol. 37, 1045-1055 (1992).</li><li>About, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+dentin+production+in+vitro.">Human dentin production in vitro.</a> Exp. Cell Res. 258, 33-41 (2000).</li><li>Couble, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odontoblast+differentiation+of+human+dental+pulp+cells+in+explant+cultures.">Odontoblast differentiation of human dental pulp cells in explant cultures.</a> Calcif. Tissue Int. 66, 129-138 (2000).</li><li>Onishi, T., Kinoshita, S., Shintani, S., Sobue, S., Ooshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulation+of+proliferation+and+differentiation+of+dog+dental+pulp+cells+in+serum-free+culture+medium+by+insulin-like+growth+factor.">Stimulation of proliferation and differentiation of dog dental pulp cells in serum-free culture medium by insulin-like growth factor.</a> Arch. Oral Biol. 44 (99), 361-371 (1999).</li><li>Huang, G. T., Sonoyama, W., Chen, J., Park, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+characterization+of+human+dental+pulp+cells:+various+isolation+methods+and+culturing+environments.">In vitro characterization of human dental pulp cells: various isolation methods and culturing environments.</a> Cell Tissue Res. 324, 225-236 (2006).</li><li>Bakopoulou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+the+impact+of+two+different+isolation+methods+on+the+osteo/odontogenic+differentiation+potential+of+human+dental+stem+cells+derived+from+deciduous+teeth.">Assessment of the impact of two different isolation methods on the osteo/odontogenic differentiation potential of human dental stem cells derived from deciduous teeth.</a> Calcif. Tissue Int. 88, 130-141 (2011).</li><li>Curtis, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EF1alpha+and+RPL13a+represent+normalization+genes+suitable+for+RT-qPCR+analysis+of+bone+marrow+derived+mesenchymal+stem+cells.">EF1alpha and RPL13a represent normalization genes suitable for RT-qPCR analysis of bone marrow derived mesenchymal stem cells.</a> BMC Mol. Biol. 11, 61 (2010).</li><li>Suchanek, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+stem+cells+and+their+characterization.">Dental pulp stem cells and their characterization.</a> Biomed. Pap. Med. Fac. Univ. Palacky Olomouc Czech Repub. 153, 31-35 (2009).</li><li>d'Aquino, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+postnatal+dental+pulp+cells+co-differentiate+into+osteoblasts+and+endotheliocytes:+a+pivotal+synergy+leading+to+adult+bone+tissue+formation.">Human postnatal dental pulp cells co-differentiate into osteoblasts and endotheliocytes: a pivotal synergy leading to adult bone tissue formation.</a> Cell Death Differ. 14, 1162-1171 (2007).</li><li>Atari, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+pluripotent+stem+cells+from+human+third+molar+dental+pulp.">Isolation of pluripotent stem cells from human third molar dental pulp.</a> Histol. Histopathol. 26, 1057-1070 (2011).</li></ol>

Questo protocollo descrive il processo di isolamento e caratterizzazione di hDPSCs da polpa dentale utilizzando due metodi, dissociazione enzimatica e la conseguenza diretta di cellule staminali da espianti di tessuto pulpare. Inoltre, in vitro differenziazione di queste cellule in odontoblasti, è stata valutata mediante dosaggio quantitativo Rosso alizarina S &amp; QPCR. Protocolli esistenti per isolare dal tessuto pulpare dente umano era stato utilizzato diversi strumenti quali p...

Le cellule staminali sono cellule clonogeniche che possiedono due caratteristiche notevoli, conosciuti come multi-potenza e di auto-rinnovamento 15. Tra tutte le cellule staminali con diverse potenze replicative, le cellule staminali dentali come le cellule staminali post-natali hanno attirato l&#39;attenzione negli ultimi anni, a causa della loro accessibilità, plasticità, e ad alta capacità proliferativa rispetto ad altre cellule staminali adulte 16. Caratteristicamente, simili alle cellule staminali mesenchimali, cellule staminali polpa dentale sono aderenti cellule clonogeniche aventi capacità multipla differenziazione in mesenchima e / o non-mesenchima lignaggi, sia in vitro che in vivo. 1-8,17,18 DPSCs sono identificati da la loro espressione negativa di antigeni ematopoietiche (ad esempio, CD45, CD34, CD14), e l&#39;espressione di CD90 positivo, CD29, CD73, CD105, CD44 e STRO-1. 19,20 Facile potenziale ottenuto con un minimo sforzo e la morbilità rendere DPSCs umani come un validosorgente in grado di MSC rispetto alle fonti ordinarie, come le cellule staminali mesenchimali del midollo 21. In generale, DPSCs sono stati isolati da una escrescenza metodo, cioè, la migrazione di cellule staminali da espianti di tessuto pulpare (DPSC-OG) 22-24, e / o mediante digestione enzimatica (DPSC-ED) 4,6,25. Studi precedenti hanno dimostrato che il metodo di isolamento e condizioni di coltura possono indurre differenti popolazioni o casate sotto passaggi in vitro 26,27. Nel caso di denti permanenti (pDPSCs), Huang et al rivelato che enzimatiche pDPSCs digeriti hanno potenziale proliferativo superiore rispetto ai DPSCs cresciuti. 26 Inoltre, nel caso di denti decidui (dDPSCs), è stato dimostrato che STRO-1 e CD34 marcatori espressi più dDPSC-DE rispetto a dDPSC-OG. Inoltre, dDPSC-ED visualizzato elevato tasso di mineralizzazione in definito osteo / odonto media. 27 Pertanto, a causa del potenziale eccezionale di DPSCs in rmedicina egenerative, ulteriori studi saranno necessari per una migliore comprensione delle possibili varie popolazioni che sono derivati ​​da diversi metodi di isolamento. Qui, era tentativo di introdurre modo semplice di estrazione polpa, utilizzando uno step-disco diamantato dentale per facilitare il processo di estrazione polpa. Inoltre, dopo l&#39;isolamento di polpa umani cellule staminali derivate mediante l&#39;applicazione di metodi di ED o OG, proprietà generali e capacità di differenziazione tra i due gruppi sono stati studiati.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Catalogo o Lotto. numero </td><td> Commenti (opzionale) </td></tr><tr><td> α-MEM </td><td> GIBCO </td><td> 11900-073 </td><td></td></tr><tr><td> Collagenasi tipo I </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C0130-100MG </td><td></td></tr><tr><td> Dispasi </td><td> GIBCO </td><td> 17105-041 </td><td></td></tr><tr><td> Penicillina / streptomicina </td><td> GIBCO </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> Amfotericina B </td><td> GIBCO </td><td> 15290-018 </td><td></td></tr><tr><td> Siero fetale bovino definito (FBS) </td><td> HyClone </td><td> SH30070.03 </td><td></td></tr><tr><td> L-ascorbico 2-fosfato </td><td> Sigma </td><td> A8960-5G </td><td></td></tr><tr><td> L-glutammina </td><td> GIBCO </td><td> 25030-024 </td><td></td></tr><tr><td> Desametasone </td><td> Sigma </td><td> D4902 </td><td></td></tr><tr><td> β-Glicerolo sale idrato fosfato disodico, BioUltra </td><td> Sigma </td><td> G9422-100G </td><td></td></tr><tr><td> Potassio fosfato monobasico </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P5655 </td><td></td></tr><tr><td> Osteogenesi Assay Kit </td><td> Millipore </td><td> PS01802031 </td><td></td></tr><tr><td> Mouse IgG2b-PE isotipo di controllo </td><td> BD Pharmingen </td><td> 50808088029 </td><td></td></tr><tr><td> FITC del mouse IgG2b isotipo di controllo </td><td> BD Pharmingen </td><td> 559532 </td><td></td></tr><tr><td> Del mouse FITC IgG1 isotipo κ </td><td> BD Pharmingen </td><td> 11471471 </td><td></td></tr><tr><td> FITC / PE topo anti-umano CD34/CD45 </td><td> BD Pharmingen </td><td>341071 </td><td></td></tr><tr><td> PE anti-CD146 umano </td><td> BD Pharmingen </td><td> 550315 </td><td></td></tr><tr><td> Monoclonale murino anti-umano CD90/FITC </td><td> Daka </td><td> 00034418 </td><td></td></tr><tr><td> PE di topo anti-CD73 umano </td><td> BD Pharmingen </td><td> 550257 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-h CD105/Endoglin PE </td><td> BD Pharmingen </td><td> FAB10971P </td><td></td></tr><tr><td> PE topo anti-umana CD11b/Mac1 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 5553888 </td><td></td></tr><tr><td> CD44 PE topo anti umano </td><td> BD Pharmingen </td><td> 555479 </td><td></td></tr><tr><td> Soluzione tampone fosfato (PBS) </td><td> GIBCO </td><td> 003000 </td><td></td></tr><tr><td> 70-micron cella filtro </td><td> Falco </td><td> 352360 </td><td></td></tr><tr><td&gt; 0,2 micron filtro a siringa </td><td> Millex-GV </td><td> SLGV033RB </td><td></td></tr><tr><td> 25 cm 2 cultura pallone </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> Z707481 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> ATTREZZATURE </td></tr><tr><td> BD FACSCalibur </td><td> BD </td><td> 342975 </td><td></td></tr><tr><td> Multiskan spettrofotometro per micropiastre </td><td> Thermo Scientific </td><td> 51119200 </td><td></td></tr><tr><td> Fleurcense Microscopio </td><td> Olimpo </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Flowing Versione software 2.3.1 </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

isolation, characterization and comparative differentiation of human dental pulp stem cells derived from permanent teeth by using two different methods

<p class="jove_content"&gt; Denti del giudizio in via di sviluppo sono facilmente accessibile fonte di cellule staminali durante l&#39;età adulta che potrebbe essere ottenuta con trattamenti ortodontici di routine. Umani polpa cellule staminali derivate (hDPSCs) in possesso di un elevato potenziale di proliferazione con il multi-lignaggio capacità di differenziazione confrontare alla fonte ordinaria di cellule staminali adulte<sup&gt; 1-8</sup&gt;, Quindi, hDPSCs potrebbero essere i candidati ideali per il trapianto autologo in ingegneria dei tessuti e medicina rigenerativa. Oltre a questi benefici, in possesso delle cellule staminali mesenchimali (MSC) offre, come effetti immunolodulatory, hDPSCs rendere più prezioso, anche nel caso di trapianto allogenico<sup&gt; 6,9,10</sup&gt;. Pertanto, il passaggio principale per utilizzare questa fonte di cellule staminali è quello di selezionare il miglior protocollo per isolare hDPSCs dal tessuto pulpare. Al fine di raggiungere questo obiettivo, è fondamentale per studiare l&#39;effetto delle condizioni di isolamento diverse su differenti comportamenti cellulari, come i loro marcatori di superficie comuni e anche la loro capacità di differenziazione.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; In questo modo, qui si separano tessuti umani colpiti dalla polpa terzi denti molari, e poi usato entrambi i protocolli esistenti basati sulla letteratura, per hDPSCs isolamento,<sup&gt; 11-13</sup&gt;<em&gt; Per esempio</em&gt; Dissociazione enzimatica del tessuto pulpare (DPSC-DE) o escrescenza da espianti di tessuto (DPSC-OG). A questo proposito, abbiamo cercato di facilitare i metodi di isolamento mediante disco diamantato dentale. Quindi, queste cellule caratterizzato in termini di stromale associati marcatori (CD73, CD90, CD105 e CD44), pennarelli emopoietiche / endoteliale (CD34, CD45 e CD11b), marcatori perivascolare, come CD146 e anche STRO-1. Successivamente, questi due protocolli sono stati confrontati in base alla potenza differenziazione in odontoblasti sia quantitativa reazione a catena della polimerasi (QPCR) e Alizarin colorazione rossa. QPCR sono stati utilizzati per valutare l&#39;espressione dei geni correlati mineralizzazione (fosfatasi alcalina; ALP, phosphoglycoprotein matrice extracellulare; MEPE &amp; dentina sialophosphoprotein; DSPP).<sup&gt; 14</sup</p

<ol><li> DPSCs che sono stati ottenuti dalla dissociazione enzimatica (DPSC-ED) sono mostrati qui a 10 giorni, 15,18 (Figura 1). Le colonie avviato per formare su quasi 3 a 5 giorni dopo l&#39;isolamento. </li><li> DPSCs superato (DPSC-OG) sono mostrati nella Figura 2, il giorno 5, 10, 13 e 18. Fibroblasto-simili cellule hanno cominciato a migrare dal tessuto pulpare nel pallone da parallelo ordinazione quasi 5 giorni dopo la semina. </li><li> DPSCs al passaggio 3 utilizzando entrambi i metodi sono illu...

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Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Il metodo descritto l&#39;isolamento e la caratterizzazione di cellule staminali dentali umane Pulp (hDPSCs) utilizzando<strong&gt; Dissociazione enzimatica della polpa (DPSC-DE)</strong&gt; O<strong&gt; Conseguenza diretta di cellule staminali da espianti di tessuto pulpare (DPSC-OG). Seguito da</strong&gt;<em&gt; In vitro</em&gt; Differenziazione comparativa di entrambi i tipi di hDPSCs in odontoblasti.

Differenziazione Isolamento, caratterizzazione e comparata delle cellule umane Dental Pulp staminali derivate da denti permanenti mediante due diversi metodi

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

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Isolation and Cellular Phenotyping of Mesenchymal Stem Cells Derived from Synovial Fluid and Bone Marrow of Minipigs

Isolamento e Cellular Fenotipizzazione di cellule staminali mesenchimali derivate dal liquido sinoviale e del midollo osseo di mini-pig

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been established after isolation from various tissue sources, including bone marrow and synovial fluid. Recently, ...

Characterization of Immune Cells in Human Adipose Tissue by Using Flow Cytometry

Caratterizzazione di cellule immunitarie nel tessuto adiposo umano mediante citometria a flusso

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the ...

Oral Biofilm Formation on Different Materials for Dental Implants

Formazione di Biofilm orali su differenti materiali per impianti dentali

Dental implants and their prosthetic components are prone to bacterial colonization and biofilm formation. The use of materials that provides low ...

An Enzyme-free Method for Isolation and Expansion of Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells

Un metodo privo di enzimi per l'isolamento e l'espansione delle cellule staminali mesenchimale derivate dall'Adipo

Mesenchymal stem cells (MSCs) are a population of multipotent cells that can be isolated from various adult and fetal tissues, including adipose tissue. ...

Ex Vivo Expansion of Hematopoietic Stem Cells from Human Umbilical Cord Blood-derived CD34+ Cells Using Valproic Acid

Ex Vivo Expansion of Hematopoietic Stem Cells from Human Umbilical Cord Blood-derived CD34+ Cells Using Valproic Acid

Ex Vivo espansione di cellule staminali da cordone ombelicale umano derivate dal sangue CD34+ cellule utilizzando acido valproico

Umbilical cord blood (UCB) units provide an alternative source of human hematopoietic stem cells (HSCs) for patients who require allogeneic bone marrow ...