Name: isolation, characterization and comparative differentiation of human dental pulp stem cells derived from permanent teeth by using two different methods
Uploaded: 2012-11-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods at JoV

Vi tackar Dr Leila Shakeri &amp; Dr Aref Dournaei för deras kritiska diskus och Mr Mohammad Reza Khadem Sharif för hans tekniska stöd.

1. Förbered enzymlösning och spridning Medium (PM) <ol><li> Gör Kollagenas typ I Lösning: Väg ​​upp kollagenas typ I (12 mg / ml) och lös upp i 1 ml PBS och filtret med en 0,2-filter xm spruta. Sedan placera det 15 ml rör och hålla den vid -20 ° C tills de behövdes. </li><li> Gör dispas Lösning: Väg ​​upp dispas (16 mg / ml) och lös upp i 1 ml PBS och filtret med en 0,2-filter xm spruta. Sedan placera den 15 ml tub och hålla den vid 4 ° C tills det behövs. </l...

<ol>
	<li>Volponi, A. A., Pang, Y., Sharpe, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-based+biological+tooth+repair+and+regeneration.">Stem cell-based biological tooth repair and regeneration.</a> Trends Cell Biol. 20, 715-722 (2010).</li><li>Nosrat, I. V., Widenfalk, J., Olson, L., Nosrat, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+cells+produce+neurotrophic+factors,+interact+with+trigeminal+neurons+in+vitro,+and+rescue+motoneurons+after+spinal+cord+injury.">Dental pulp cells produce neurotrophic factors, interact with trigeminal neurons in vitro, and rescue motoneurons after spinal cord injury.</a> Dev. Biol. 238, 120-132 (2001).</li><li>Gandia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+dental+pulp+stem+cells+improve+left+ventricular+function,+induce+angiogenesis,+and+reduce+infarct+size+in+rats+with+acute+myocardial+infarction.">Human dental pulp stem cells improve left ventricular function, induce angiogenesis, and reduce infarct size in rats with acute myocardial infarction.</a> Stem Cells. 26, 638-645 (2008).</li><li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+(DPSCs)+in+vitro+and+in+vivo.">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.. 97, 13625-13630 (2000).</li><li>Graziano, A., d'Aquino, R., Laino, G., Papaccio, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+stem+cells:+a+promising+tool+for+bone+regeneration.">Dental pulp stem cells: a promising tool for bone regeneration.</a> Stem Cell Rev. 4, 21-26 (2008).</li><li>Kerkis, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+transplantation+of+human+immature+dental+pulp+stem+cells+from+baby+teeth+to+golden+retriever+muscular+dystrophy+(GRMD)+dogs:+Local+or+systemic.">Early transplantation of human immature dental pulp stem cells from baby teeth to golden retriever muscular dystrophy (GRMD) dogs: Local or systemic.</a> J. Transl. Med. 6, 35 (2008).</li><li>Onyekwelu, O., Seppala, M., Zoupa, M., Cobourne, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tooth+development:+2.+Regenerating+teeth+in+the+laboratory.">Tooth development: 2. Regenerating teeth in the laboratory.</a> Dent. Update. 34, 20-29 (2007).</li><li>Cordeiro, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+tissue+engineering+with+stem+cells+from+exfoliated+deciduous+teeth.">Dental pulp tissue engineering with stem cells from exfoliated deciduous teeth.</a> J. Endod. 34 (08), 962-969 (2008).</li><li>Pierdomenico, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipotent+mesenchymal+stem+cells+with+immunosuppressive+activity+can+be+easily+isolated+from+dental+pulp.">Multipotent mesenchymal stem cells with immunosuppressive activity can be easily isolated from dental pulp.</a> Transplantation. 80, 836-842 (2005).</li><li>de Mendonca Costa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstruction+of+large+cranial+defects+in+nonimmunosuppressed+experimental+design+with+human+dental+pulp+stem+cells.">Reconstruction of large cranial defects in nonimmunosuppressed experimental design with human dental pulp stem cells.</a> J. Craniofac. Surg. 19, 204-210 (2008).</li><li>Tirino, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+the+identification,+characterization+and+banking+of+human+DPSCs:+current+strategies+and+perspectives.">Methods for the identification, characterization and banking of human DPSCs: current strategies and perspectives.</a> Stem Cell Rev. 7, 608-615 (2011).</li><li>Tirino, V., Paino, F., De Rosa, A., Papaccio, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification,+isolation,+characterization,+and+banking+of+human+dental+pulp+stem+cells.">Identification, isolation, characterization, and banking of human dental pulp stem cells.</a> Methods Mol. Biol. 879, 443-463 (2012).</li><li>Eslaminejad, M. B., Vahabi, S., Shariati, M., Nazarian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+Growth+and+Characterization+of+Stem+Cells+from+Human+Dental+Pulp+of+Deciduous+Versus+Permanent+Teeth.">In vitro Growth and Characterization of Stem Cells from Human Dental Pulp of Deciduous Versus Permanent Teeth.</a> J. Dent. (Tehran). 7, 185-195 (2010).</li><li>Wei, X., Ling, J., Wu, L., Liu, L., Xiao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+mineralization+markers+in+dental+pulp+cells.">Expression of mineralization markers in dental pulp cells.</a> J. Endod. 33, 703-708 (2007).</li><li>Nombela-Arrieta, C., Ritz, J., Silberstein, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+elusive+nature+and+function+of+mesenchymal+stem+cells.">The elusive nature and function of mesenchymal stem cells.</a> Nat. Rev. Mol Cell Biol. 12, 126-131 (2011).</li><li>Huang, G. T., Gronthos, S., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+derived+from+dental+tissues+vs.+those+from+other+sources:+their+biology+and+role+in+regenerative+medicine.">Mesenchymal stem cells derived from dental tissues vs. those from other sources: their biology and role in regenerative medicine.</a> J. Dent. Res. 88, 792-806 (2009).</li><li>Graziano, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scaffold's+surface+geometry+significantly+affects+human+stem+cell+bone+tissue+engineering.">Scaffold's surface geometry significantly affects human stem cell bone tissue engineering.</a> J. Cell Physiol. 214, 166-172 (2008).</li><li>d'Aquino, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+dental+pulp+stem+cells:+from+biology+to+clinical+applications.">Human dental pulp stem cells: from biology to clinical applications.</a> J. Exp. Zool. B. Mol. Dev. Evol. 312, 408-415 (2009).</li><li>Mitsiadis, T. A., Feki, A., Papaccio, G., Caton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+stem+cells,+niches,+and+notch+signaling+in+tooth+injury.">Dental pulp stem cells, niches, and notch signaling in tooth injury.</a> Adv. Dent. Res. 23, 275-279 (2011).</li><li>Shi, S., Gronthos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+niche+of+postnatal+mesenchymal+stem+cells+in+human+bone+marrow+and+dental+pulp.">Perivascular niche of postnatal mesenchymal stem cells in human bone marrow and dental pulp.</a> J. Bone Miner. Res. 18, 696-704 (2003).</li><li>Tomic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunomodulatory+properties+of+mesenchymal+stem+cells+derived+from+dental+pulp+and+dental+follicle+are+susceptible+to+activation+by+toll-like+receptor+agonists.">Immunomodulatory properties of mesenchymal stem cells derived from dental pulp and dental follicle are susceptible to activation by toll-like receptor agonists.</a> Stem Cells Dev. 20, 695-708 (2011).</li><li>Tsukamoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mineralized+nodule+formation+by+cultures+of+human+dental+pulp-derived+fibroblasts.">Mineralized nodule formation by cultures of human dental pulp-derived fibroblasts.</a> Arch. Oral Biol. 37, 1045-1055 (1992).</li><li>About, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+dentin+production+in+vitro.">Human dentin production in vitro.</a> Exp. Cell Res. 258, 33-41 (2000).</li><li>Couble, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odontoblast+differentiation+of+human+dental+pulp+cells+in+explant+cultures.">Odontoblast differentiation of human dental pulp cells in explant cultures.</a> Calcif. Tissue Int. 66, 129-138 (2000).</li><li>Onishi, T., Kinoshita, S., Shintani, S., Sobue, S., Ooshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulation+of+proliferation+and+differentiation+of+dog+dental+pulp+cells+in+serum-free+culture+medium+by+insulin-like+growth+factor.">Stimulation of proliferation and differentiation of dog dental pulp cells in serum-free culture medium by insulin-like growth factor.</a> Arch. Oral Biol. 44 (99), 361-371 (1999).</li><li>Huang, G. T., Sonoyama, W., Chen, J., Park, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+characterization+of+human+dental+pulp+cells:+various+isolation+methods+and+culturing+environments.">In vitro characterization of human dental pulp cells: various isolation methods and culturing environments.</a> Cell Tissue Res. 324, 225-236 (2006).</li><li>Bakopoulou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+the+impact+of+two+different+isolation+methods+on+the+osteo/odontogenic+differentiation+potential+of+human+dental+stem+cells+derived+from+deciduous+teeth.">Assessment of the impact of two different isolation methods on the osteo/odontogenic differentiation potential of human dental stem cells derived from deciduous teeth.</a> Calcif. Tissue Int. 88, 130-141 (2011).</li><li>Curtis, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EF1alpha+and+RPL13a+represent+normalization+genes+suitable+for+RT-qPCR+analysis+of+bone+marrow+derived+mesenchymal+stem+cells.">EF1alpha and RPL13a represent normalization genes suitable for RT-qPCR analysis of bone marrow derived mesenchymal stem cells.</a> BMC Mol. Biol. 11, 61 (2010).</li><li>Suchanek, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+stem+cells+and+their+characterization.">Dental pulp stem cells and their characterization.</a> Biomed. Pap. Med. Fac. Univ. Palacky Olomouc Czech Repub. 153, 31-35 (2009).</li><li>d'Aquino, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+postnatal+dental+pulp+cells+co-differentiate+into+osteoblasts+and+endotheliocytes:+a+pivotal+synergy+leading+to+adult+bone+tissue+formation.">Human postnatal dental pulp cells co-differentiate into osteoblasts and endotheliocytes: a pivotal synergy leading to adult bone tissue formation.</a> Cell Death Differ. 14, 1162-1171 (2007).</li><li>Atari, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+pluripotent+stem+cells+from+human+third+molar+dental+pulp.">Isolation of pluripotent stem cells from human third molar dental pulp.</a> Histol. Histopathol. 26, 1057-1070 (2011).</li></ol>

Detta protokoll beskriver processen för isolering och karakterisering av hDPSCs från tandpulpan använda två metoder, enzymatisk dissociation och direkt utväxt av stamceller från explantat massa vävnad. Dessutom, in vitro-differentiering av dessa celler till odontoblaster, bedömdes genom kvantitativ alizarin red S analys och QPCR. Befintliga protokoll för att isolera massa vävnad från människa tand hade använts olika instrument såsom tänger (ben pincett) 9, extirpation...

Stamceller är klonogena celler som besitter två fantastiska funktioner, så kallade multi-styrka och självförnyelse 15. Bland alla stamceller med olika replikativa potenser, har dentala stamceller som de postnatala stamceller uppmärksammat på senare år på grund av deras tillgänglighet, plasticitet och hög proliferativ förmåga i jämförelse med andra adulta stamceller 16. Karakteristiskt, liknande de mesenkymala stamcellerna, tandpulpan stamceller är vidhäftande klonogena celler som har multipla differentiering kapacitet i mesenkym och / eller icke-mesenkymceller linjer, både in vitro och in vivo. 1-8,17,18 DPSC identifieras genom deras negativa uttryck av hematopoetiska antigener (t.ex. CD45, CD34, CD14), och positivt uttryck för CD90, CD29, CD73, CD105, CD44 och STRO-1. 19,20 Lätt erhållits potential med minimal smärta och morbiditet göra mänskliga DPSC som en värdefullkunna källa MSC jämfört med vanliga källor, såsom mesenkymala benmärgsstamceller 21. I allmänhet har DPSC isolerats antingen utväxt metod, dvs migrering av stamceller från explantat massa vävnad (DPSC-OG) 22-24, och / eller genom enzymatisk spjälkning (DPSC-DE) 4,6,25. Tidigare studier har visat att isoleringen metoden och odlingsbetingelser kan inducera olika populationer eller härstamningar under in vitro passager 26,27. I fallet med permanenta tänder (pDPSCs) avslöjade Huang et al att enzymatiska smälta pDPSCs har högre tillväxt potential jämfört med urvuxna DPSC. 26 Då det gäller mjölktänder (dDPSCs), visades att STRO-1 &amp; CD34 markörer uttryckta mer i dDPSC-ED i jämförelse med dDPSC-OG. Dessutom visade dDPSC-ED högre mineraliseringshastighet i definierade osteo / odonto medium. 27 Därför, på grund av den enastående potential DPSC i regenerative medicin, kommer fler studier krävs för bättre förståelse av eventuella olika populationer som härrör från olika isoleringsmetoder. Här var det försök att införa enkelt sätt av massa utvinning, genom att använda en steg tandvård diamant skiva för att underlätta processen av massa extraktion. Dessutom, efter isolering av humana massa-härledda stamceller genom att tillämpa ED eller OG metoder har allmänna egenskaper och differentiering kapacitet mellan två grupper också undersökts.

<table border="1"><tbody><tr><td> Namnet av reagenset </td><td> Företag </td><td> Katalog eller partiet. nummer </td><td> Kommentarer (tillval) </td></tr><tr><td> α-MEM </td><td> GIBCO </td><td> 11900-073 </td><td></td></tr><tr><td> Kollagenas typ I </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C0130-100mg </td><td></td></tr><tr><td> Dispas </td><td> GIBCO </td><td> 17105-041 </td><td></td></tr><tr><td> Penicillin / streptomycin </td><td> GIBCO </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> Amfotericin B </td><td> GIBCO </td><td> 15290-018 </td><td></td></tr><tr><td> Fetalt bovint serum definierat (FBS) </td><td> HyClone </td><td> SH30070.03 </td><td></td></tr><tr><td> L-askorbinsyra 2-fosfat </td><td> Sigma </td><td> A8960-5G </td><td></td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> GIBCO </td><td> 25030-024 </td><td></td></tr><tr><td> Dexametason </td><td> Sigma </td><td> D4902 </td><td></td></tr><tr><td> β-Glycerol fosfatdinatriumsalt hydrat, BioUltra </td><td> Sigma </td><td> G9422-100G </td><td></td></tr><tr><td> Monobasiskt kaliumfosfat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P5655 </td><td></td></tr><tr><td> Osteogenesis analyssats </td><td> Millipore </td><td> PS01802031 </td><td></td></tr><tr><td> Mus IgG2b-PE isotypkontroll </td><td> BD Pharmingen </td><td> 50808088029 </td><td></td></tr><tr><td> FITC mus IgG2b isotyp kontroll </td><td> BD Pharmingen </td><td> 559.532 </td><td></td></tr><tr><td> FITC mus lgG1 κ isotyp </td><td> BD Pharmingen </td><td> 11471471 </td><td></td></tr><tr><td> FITC / PE mus-anti-humant CD34/CD45 </td><td> BD Pharmingen </td><td>341.071 </td><td></td></tr><tr><td> PE-anti-humant CD146 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 550.315 </td><td></td></tr><tr><td> Monoklonal mus-anti-human-CD90/FITC </td><td> Daka </td><td> 00034418 </td><td></td></tr><tr><td> PE mus-anti-humant CD73 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 550.257 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-h CD105/Endoglin PE </td><td> BD Pharmingen </td><td> FAB10971P </td><td></td></tr><tr><td> PE mus-anti-humant CD11b/Mac1 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 5553888 </td><td></td></tr><tr><td> CD44 PE mus anti-humant </td><td> BD Pharmingen </td><td> 555.479 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfatbuffertlösning (PBS) </td><td> GIBCO </td><td> 003.000 </td><td></td></tr><tr><td> 70-im cellfilter </td><td> Falcon </td><td> 352.360 </td><td></td></tr><tr><td&gt; 0,2 pm sprutfilter </td><td> Millex-GV </td><td> SLGV033RB </td><td></td></tr><tr><td> 25 cm 2 odlingskolv </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> Z707481 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> UTRUSTNING </td></tr><tr><td> BD FACSCalibur </td><td> BD </td><td> 342.975 </td><td></td></tr><tr><td> Multiskan mikroplattor spektrofotometer </td><td> Thermo Scientific </td><td> 51119200 </td><td></td></tr><tr><td> Fleurcense mikroskop </td><td> Olympus </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Flödande Programvaruversion 2.3.1 </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

isolation, characterization and comparative differentiation of human dental pulp stem cells derived from permanent teeth by using two different methods

<p class="jove_content"&gt; Utveckla visdomständer är lätt-tillgänglig källa för stamceller under vuxenlivet som kunde erhållas genom rutinmässiga tandregleringsbehandlingarna. Human massa-härledda stamceller (hDPSCs) har hög tillväxt potential med flera härstamning differentiering kapacitet jämfört med den vanliga källan av adulta stamceller<sup&gt; 1-8</sup&gt;, Därför kunde hDPSCs vara bra kandidater för autolog transplantation i vävnadsteknik och regenerativ medicin. Tillsammans med dessa fördelar, som har de mesenkymala stamceller (MSC) funktioner, såsom immunolodulatory effekt, göra hDPSCs mer värdefullt, även när det gäller av transplantatavstötning transplantation<sup&gt; 6,9,10</sup&gt;. Därför är det första steget för att använda denna källa till stamceller för att välja den bästa protokollet för isolering hDPSCs från massa vävnad. För att uppnå detta mål är det viktigt att undersöka effekten av olika isolering villkor för olika cellulära beteenden, såsom deras gemensamma ytmarkörer &amp; även deras differentiering kapacitet.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; Därför, här vi skiljer människor massa vävnad från påverkade tredje molar tänder, och sedan används både befintliga protokollen baserade på litteratur, för isolera hDPSCs,<sup&gt; 11-13</sup&gt;<em&gt; Dvs</em&gt; Enzymatisk dissociation av pappersmassa vävnad (DPSC-ED) eller utväxt från vävnadsexplantat (DPSC-OG). I denna fråga, försökte vi underlätta isoleringsmetoder med tandvård diamant skiva. Därefter dessa celler kännetecknas i termer av stromal-associerade markörer (CD73, CD90, CD105 och CD44), hematopoetiska / endoteliala Markers (CD34, CD45 och CD11b), perivaskulär markör, såsom CD146 och även STRO-1. Efteråt, var dessa två protokoll jämfördes baserat på differentiering potens i odontoblaster av både kvantitativ polymeraskedjereaktion (QPCR) &amp; Alizarin röd färgning. QPCR användes för bedömning av uttrycket av mineralisering-relaterade gener (alkaliskt fosfatas, ALP, matris extracellulär phosphoglycoprotein, MEPE &amp; dentin sialophosphoprotein, DSPP).<sup&gt; 14</sup</p

<ol><li> DPSC som erhölls genom enzymatisk dissociation (DPSC-DE) visas här på dag 10, 15,18 (figur 1). Kolonierna initierade bildas på nästan 3 till 5 dagar efter isoleringen. </li><li> Urvuxna DPSC (DPSC-OG) visas i figur 2 på dag 5, 10, 13 och 18. Fibroblastliknande celler började migrera från pappersmassa vävnad i kolven genom parallella beställa med nästan 5 dagar efter sådd. </li><li> DPSC vid passage 3 med båda metoderna visas i figur 3. Båda typerna av DPSC var nästan i s...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods at JoV

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Den beskrivna metoden isolering och karakterisering av humana celler Dental Pulp Stem (hDPSCs) med hjälp av antingen<strong&gt; Enzymatisk dissociation av massa (DPSC-DE)</strong&gt; Eller<strong&gt; Direkt utväxt av stamceller från explantat massa vävnad (DPSC-OG). Sedan följt av</strong&gt;<em&gt; In vitro</em&gt; Jämförande differentiering av båda typerna av hDPSCs till odontoblaster.

Isolering, karakterisering och jämförande differentiering av mänskliga Dental celler Pulp Stem Härstammar från permanenta tänder med hjälp av två olika metoder

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture och isolering av CD133<sup&gt; +</sup&gt; Förmodade Cancer stamceller från melanom

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

Isolation and Functional Characterization of Human Ventricular Cardiomyocytes from Fresh Surgical Samples

Isolering och funktionell karakterisering av Human Ventrikulär Cardiomyocytes från Fresh Kirurgiska prover

Cardiomyocytes from diseased hearts are subjected to complex remodeling processes involving changes in cell structure, excitation contraction coupling and ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

Isolering av cancer stamceller från mänskliga Prostate Cancer Prov

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Two Methods for Establishing Primary Human Endometrial Stromal Cells from Hysterectomy Specimens

Två metoder för att fastställa Primära Human Endometrial stromaceller från Hysterectomy Prover

Many efforts have been devoted to establish in vitro cell culture systems. These systems are designed to model a vast number of in vivo processes. Cell ...

Enrichment for Chemoresistant Ovarian Cancer Stem Cells from Human Cell Lines

Anrikning för kemoterapiresistent Ovarian cancerstamceller från humana cellinjer

Cancer stem cells (CSCs) are defined as a subset of slow cycling and undifferentiated cells that divide asymmetrically to generate highly proliferative, ...

Isolation and Cellular Phenotyping of Mesenchymal Stem Cells Derived from Synovial Fluid and Bone Marrow of Minipigs

Isolering och Cellular fenotypning av mesenkymala stamceller från ledvätska och benmärgen hos minigrisar

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been established after isolation from various tissue sources, including bone marrow and synovial fluid. Recently, ...

Characterization of Immune Cells in Human Adipose Tissue by Using Flow Cytometry

Karakterisering av immunceller i mänsklig fettvävnad med hjälp av flödescytometri

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the ...

Oral Biofilm Formation on Different Materials for Dental Implants

Oral Biofilm bildning på olika material för tandimplantat

Dental implants and their prosthetic components are prone to bacterial colonization and biofilm formation. The use of materials that provides low ...

An Enzyme-free Method for Isolation and Expansion of Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells

En enzym fri metod för isolering och expansion av humana adipose-härledda mesenkymala stamceller

Mesenchymal stem cells (MSCs) are a population of multipotent cells that can be isolated from various adult and fetal tissues, including adipose tissue. ...

Ex Vivo Expansion of Hematopoietic Stem Cells from Human Umbilical Cord Blood-derived CD34+ Cells Using Valproic Acid

Ex Vivo Expansion of Hematopoietic Stem Cells from Human Umbilical Cord Blood-derived CD34+ Cells Using Valproic Acid

Ex Vivo Expansion av hematopoetiska stamceller från mänskliga navelsträngen blod-derived CD34+ celler med valproinsyra

Umbilical cord blood (UCB) units provide an alternative source of human hematopoietic stem cells (HSCs) for patients who require allogeneic bone marrow ...