Name: performing vaginal lavage, crystal violet staining, and vaginal cytological evaluation for mouse estrous cycle staging identification
Uploaded: 2012-09-15T14:00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification at JoVE.com

Vi vil gjerne takke Marc Leonard fra Carleton Immersive Media Studio for ekspert teknisk bistand i videoproduksjon og redigering og Dr. Martin Bertrand fra Carleton Immersive Media Studio / Neural Regeneration Laboratorium for visuell modell assistanse. Forfatterne takknemlig erkjenne ekspertråd av Dr. Marilyn keaney og alle hennes dedikerte ansatte ved Universitetet i Ottawa Animal Care og veterinærtjenester. Dette arbeidet ble finansiert av Canadian Institute of Health Research (CIHR, MOP 62826) til SALB, den CIHR Institute of Aging og strategisk initiativ i Helse / CIHR Training Program i Nevrodegenerative Lipidomics (TGF 96121) til SALB og SF, Canadian Foundation for innovasjon til SF, Ontario Innovation Trust til SF, og Autodesk Forskning til SF. ACM mottar en CIHR Banting og Best doktor prisen. NV får en post-profesjonell fellesskap fra Institute of Aging og CIHR Training Program i nevrodegenerative Lipidomics.

1. Forbereder Reagenser <ol><li> For steril vaginal lavage, autoklaveres dobbelt destillert vann (DDH 2 O) og oppbevar i en tett lukket beholder ved romtemperatur inntil nødvendig. </li><li> For cytologisk vurdering, tilsett 0,1 g krystallfiolett pulver til 100 ml av DDH 2 O. Bland godt. Krystallfiolett farging (0,1%) kan lagres i en tett lukket beholder ved romtemperatur inntil det er behov. </li></ol> 2. Samle Vaginal Cells (Vaginal lavage) <ol><li> Plasser en latex pære på enden av en steril 200 pl spissen og utarbeide ca 100 mikroliter sterilt DDH 2 O ved hjelp av overganger på spissen som en volum retningslinje. </li><li> Løft musen ut av buret hennes og plassere henne på buret hopper (lokk) med hennes hind / bakenden mot deg. </li><li> Ta godt tak i halen og løfter bakenden. Musen vil nå ha bare hennes forbeina fatte beholderen. På dette punktet musen kan urinere. Hvis så, Vent til vannlating stopper. Skulle det være urin igjen ved inngangen til vaginal kanalen, kan det være lurt å skylle åpningen med overflødig DDH 2 O ved hjelp av en separat tips (dvs. ikke din prøvetaking tips). </li><li> Plasser enden av DDH 2 O-fylt spissen på åpningen av vaginal kanalen ta vare å ikke trenge gjennom åpningen som vaginal (og cervical) stimulering kan indusere pseudopregnancy i rotter 1,2. Nyere rapporter tyder på mus mindre utsatt for denne effekten likevel forsiktighet bør tas for å minimere graden av invasivitet i gjentatte analyser 3. </li><li> Forsiktig trykke lyspæren til å utvise en fjerdedel til halvparten av volumet av vann (~ 25-50 pl) ved åpningen av vaginal kanalen. Væsken vil spontant Aspirer i kanalen uten tips innsetting. Sakte slipper press på pære. Fluidet vil trekke tilbake i spissen. Unngå å slippe press for raskt å forhindre aspirasjon av væskeinn pæren. En filtrert spissen kan være nyttig for dette formål. </li><li> Gjenta forrige trinn 4-5 ganger ved hjelp av den samme spissen, pære, og fluidet for å oppnå et tilstrekkelig antall celler i en enkelt prøve. </li><li> Plasser fluidet på glass lysbilde, og tillate smøre tørke helt ved romtemperatur. Når tørr, kan disse estrous smears være farget umiddelbart eller oppbevares og farget på et senere tidspunkt. </li></ol> 3. Cytologisk Farging med Crystal Violet * 4 <ol><li> Plasser tørre lysbilde i en Coplin krukke (eller annen sammenlignbar farging fartøy) inneholdende krystallfiolett flekken i 1 min. </li><li> Fjern til en andre Coplin jar inneholder DDH 2 O. Vask sliden med DDH 2 O i 1 min. Gjenta. </li><li> Fjerne overflødig DDH 2 O fra kantene av lysbilde med et lys-duty vev vindusvisker, unngå kontakt med farget utstryk. </li><li> Pipetter ca 15 pl glyserol oppå smear og dekseletslip. Alternativt, kan andre histologiske montering reagenser anvendes for å oppnå en mer varig, ikke-diffuserende flekken. </li></ol> * Fargingen metoden beskrevet her er den enkleste prosedyren som kan bli utført i ethvert laboratorium. Andre metoder kan gi ytterligere detaljer. For eksempel bruker Papanicolaou flekker, kan modenhet av kjerneholdige epitelceller skilles med mindre modne celler farget turkis og mer modne celler rosa-eller oransje-farget. Disse forskjellene kan brukes til iscenesette tidlige eller sene proestrus. 4 4. Vaginal Cytologi <ol><li> Undersøke smøre under lett mikroskop for å fastslå celletyper stede. Mikroskopisk undersøkelse bør gjøres umiddelbart etter farging som krystallfiolett sprer fra cellene over tid ved bruk av glyserol for coverslipping. Photomicrographs bør tas på tidspunktet for analyse for å dokumentere cytologi. </li><li> Start med å undersøke entire smear en lavere forstørrelse. Velg en representant område og flytte til et høyere forstørrelse. Du vil se cornified squamous epitelceller, leukocytter, og / eller kjerneholdige epitelceller (representative resultater, Figur 1A-C). Forholdet mellom celler til stede vil tillate deg å bestemme estrous stadium av musen på tidspunktet for prøvetaking (representative resultater, figur 1D-G) og hennes umiddelbare hormonelle status (diskusjon, figur 2). </li></ol> 5. Representant Resultater Cytologi: Tre primære celletyper kan påvises i vaginale smear prøvene: (1) kjerneholdige epitelceller (figur 1A), (2) cornified squamous epitelceller (figur 1B), og (3) leukocytter (figur 1C). Kjerneholdige epitelceller har en lett farget cytoplasma, mørkere farget plasmamembranen, og en oval kjerne ( <strong&gt; Figur 1A). Cornified squamous epitelceller er jevnt farget, mer polygonal i formen enn sine kjerneholdige epiteliale forgjengere, og mangler en kjerne (figur 1B). Polymorfonukleære leukocytter kan skilles fra epitelceller ved deres uregelmessige form, mørkfargede polymorf atomkjerner, og liten størrelse (figur 1C, svarte pilene). Bør urin forurensning være tilstede i smøre, blir urinsyrekrystaller lett oppdages av deres krystallinske strukturer ulikt eventuelle forventede celletyper (figur 3). Skulle dette skje, og obskure påvisning av dominerende celletype, bør smøre kastes og ikke brukes til iscenesettelsen formål. Iscenesettelse: Den relative forholdet mellom celletyper observert i smears kan brukes til å identifisere scenen i brunst av musen på dagen for prøvetaking (Figur 1D-G). Under proestrus, cellene er nesten utelukkendeklynger av runde, velformet kjerneholdige epitelceller (figur 1D, representant celle angitt med hvit pil). Under estrus, er cellene hovedsakelig cornified squamous epitelceller, som finnes i tettpakkede klynger (figur 1E, representant celle angitt med pilspiss). Under metestrus, små mørkfargede leukocytter dominerer (figur 1F, representant celle angitt med svart pil). Cornified squamous epitelceller kan observeres, ofte i fragmenter, (figur 1F, representant celle angitt med svart pilspiss). Under diestrus, kan sjeldne cornified squamous epitelceller fortsatt være til stede (Figur 1G, representant celle angitt med svart pilspiss), men leukocytter fortsatt dominerer (figur 1G, representant celle angitt med svart pil). Metestrus kan skilles fra diestrus av utseendet på kjerneholdige epitelceller i diestrus ( <stron<html> g&gt; Figur 1G, angitt representant celle ved hvit pil). <img src="/files/ftp_upload/4389/4389fig1.jpg" alt="Figur 1" /> Figur 1. Cytologisk vurdering av vaginal utstryk kan brukes til å identifisere estrous stadium Tre viktigste celletyper oppdages i vaginale smear prøvene:. (A) kjerneholdige epitelceller, (b) cornified squamous epitelceller, og (c) leukocytter. Forholdet mellom disse celletypene stede i smøre kan brukes til å identifisere mus i (D) proestrus, (E) estrus, (F) metestrus, eller (G) diestrus som beskrevet i representative resultater. Svarte pilspisser i E, F og G punktet til representative cornified squamous epitelceller. Svarte pilene i C, F og G punktet til representative leykocytes. Hvite piler i D og G høydepunkt representant kjerneholdige epitelceller. . Jpg &quot;alt =&quot; Figur 2 &quot;/&gt; Figur 2. Vaginal smøre cytologi reflekterer underliggende endokrine hendelser. Detaljer er også i diskusjon. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4389/4389fig2large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se større figur</a> . <img src="/files/ftp_upload/4389/4389fig3.jpg" alt="Figur 3" /> Figur 3. Urinsyrekrystaller kan være tilstede etter krystallfiolett farging av urin-kontaminerte prøver. (A) Krystaller er transparente og kan være av ulike størrelser (piler og innrammet region forstørret i (B)). Ingen celler er til stede i dette området. Bør urinsyre krystall forurensninger innenfor felt brukt for cytologisk farging være tilstede, kan det være vanskelig å nøyaktig identifisere celletyper tilstede og smøre bør kasseres. Skala barer = 50 mikrometer.

<ol>
	<li>Adler, N. T., Zoloth, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copulatory+behavior+can+inhibit+pregnancy+in+female+rats.">Copulatory behavior can inhibit pregnancy in female rats.</a> Science. 168, 1480-1482 (1970).</li><li>Adler, N. T., Resko, J. A., Goy, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+copulatory+behavior+on+hormonal+change+in+the+female+rat+prior+to+implantation.">The effect of copulatory behavior on hormonal change in the female rat prior to implantation.</a> Physiology. 5, 1003-1007 (1970).</li><li>Yang, J. J., Larsen, C. M., Grattan, D. R., Erskine, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mating-induced+neuroendocrine+responses+during+pseudopregnancy+in+the+female+mouse.">Mating-induced neuroendocrine responses during pseudopregnancy in the female mouse.</a> Journal of. 21, 30-39 (2009).</li><li>Hong, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+mouse+estrus+cycle+in+response+to+BRCA1+inactivation+suggest+a+potential+link+between+risk+factors+for+familial+and+sporadic+ovarian+cancer.">Changes in the mouse estrus cycle in response to BRCA1 inactivation suggest a potential link between risk factors for familial and sporadic ovarian cancer.</a> Cancer research. 70, 221-228 (2010).</li><li>Hawkins, S. M., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+menstrual+cycle:+basic+biology.">The menstrual cycle: basic biology.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1135, 10-18 (2008).</li><li>Walmer, D. K., Wrona, M. A., Hughes, C. L., Nelson, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lactoferrin+expression+in+the+mouse+reproductive+tract+during+the+natural+estrous+cycle:+correlation+with+circulating+estradiol+and+progesterone.">Lactoferrin expression in the mouse reproductive tract during the natural estrous cycle: correlation with circulating estradiol and progesterone.</a> Endocrinology. 131, 1458-1466 (1992).</li><li>Parkening, T. A., Collins, T. J., Smith, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+and+pituitary+concentrations+of+LH,+FSH,+and+prolactin+in+aging+C57BL/6+mice+at+various+times+of+the+estrous+cycle.">Plasma and pituitary concentrations of LH, FSH, and prolactin in aging C57BL/6 mice at various times of the estrous cycle.</a> Neurobiology of aging. 3, 31-35 (1982).</li><li>Sarkar, D. K., Chiappa, S. A., Fink, G., Sherwood, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gonadotropin-releasing+hormone+surge+in+pro-oestrous+rats.">Gonadotropin-releasing hormone surge in pro-oestrous rats.</a> Nature. 264, 461-463 (1976).</li><li>Rajendren, G., Gibson, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+confocal+microscopic+study+of+synaptic+inputs+to+gonadotropin-releasing+hormone+cells+in+mouse+brain:+regional+differences+and+enhancement+by+estrogen.">A confocal microscopic study of synaptic inputs to gonadotropin-releasing hormone cells in mouse brain: regional differences and enhancement by estrogen.</a> Neuroendocrinology. 73, 84-90 (2001).</li><li>Kumar, T. R., Wang, Y., Lu, N., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicle+stimulating+hormone+is+required+for+ovarian+follicle+maturation+but+not+male+fertility.">Follicle stimulating hormone is required for ovarian follicle maturation but not male fertility.</a> Nature. 15, 201-204 (1997).</li><li>Montgomery, V., Loutradis, D., Tulchinsky, D., Kiessling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FSH-induced+ovulation+in+intact+and+hypophysectomized+mice.">FSH-induced ovulation in intact and hypophysectomized mice.</a> Journal of reproduction and fertility. 84, 1-6 (1988).</li><li>Mihm, M., Gangooly, S., Muttukrishna, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+normal+menstrual+cycle+in+women.">The normal menstrual cycle in women.</a> Animal reproduction science. , 124-229 (2011).</li><li>Appelgren, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histochemical+demonstration+of+drug+interference+with+progesterone+synthesis.">Histochemical demonstration of drug interference with progesterone synthesis.</a> Journal of reproduction and. 19, 185-186 (1969).</li><li>Sander, V. A., Facorro, G. B., Piehl, L., de Celis Rubin, E., Motta, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+DHEA+and+metformin+on+corpus+luteum+in+mice.">Effect of DHEA and metformin on corpus luteum in mice.</a> Reproduction. 138, 571-579 (2009).</li><li>Stocco, C., Telleria, C., Gibori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+control+of+corpus+luteum+formation,+function,+and+regression.">The molecular control of corpus luteum formation, function, and regression.</a> Endocrine reviews. 28, 117-149 (2007).</li><li>Rudolph, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+overt+menstruation+in+intact+mice.">Induction of overt menstruation in intact mice.</a> PLoS One. 7, e32922 (2012).</li><li>Yano, J., Lilly, E., Barousse, M., Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell-derived+S100+calcium-binding+proteins+as+key+mediators+in+the+hallmark+acute+neutrophil+response+during+Candida+vaginitis.">Epithelial cell-derived S100 calcium-binding proteins as key mediators in the hallmark acute neutrophil response during Candida vaginitis.</a> Infection and immunity. 78, 5126-5137 (2010).</li><li>Whitten, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occurrence+of+anoestrus+in+mice+caged+in+groups.">Occurrence of anoestrus in mice caged in groups.</a> The Journal of endocrinology. 18, 102-107 (1959).</li><li>Lamond, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+stimulation+derived+from+other+animals+of+the+same+species+on+oestrous+cycles+in+mice.">Effect of stimulation derived from other animals of the same species on oestrous cycles in mice.</a> The Journal of endocrinology. 18, 343-349 (1959).</li><li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL/6J+mice:+I.+Cycle+frequency,+length+and+vaginal+cytology.">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biology of reproduction. 27, 327-339 (1982).</li><li>Felicio, L. S., Nelson, J. F., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+studies+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL/6J+mice:+II.+Cessation+of+cyclicity+and+the+duration+of+persistent+vaginal+cornification.">Longitudinal studies of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: II. Cessation of cyclicity and the duration of persistent vaginal cornification.</a> Biology of reproduction. 31, 446-453 (1984).</li><li>Van Der Lee, S., Boot, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+pseudopregnancy+in+mice.+II.">Spontaneous pseudopregnancy in mice. II.</a> Acta physiologica et pharmacologica Neerlandica. 5, 213-215 (1956).</li><li>Van Der Lee, S., Boot, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+pseudopregnancy+in+mice.">Spontaneous pseudopregnancy in mice.</a> Acta physiologica et pharmacologica Neerlandica. 4, 442-444 (1955).</li><li>Armaiz-Pena, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrous+cycle+modulates+ovarian+carcinoma+growth.">Estrous cycle modulates ovarian carcinoma growth.</a> Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research. 15, 2971-2978 (2009).</li><li>Jemiolo, B., Harvey, S., Novotny, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promotion+of+the+Whitten+effect+in+female+mice+by+synthetic+analogs+of+male+urinary+constituents.">Promotion of the Whitten effect in female mice by synthetic analogs of male urinary constituents.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 83, 4576-4579 (1986).</li></ol>

Forfatterne erklærer ingen interessekonflikt. Alle eksperimenter på dyr ble utført i henhold til de retningslinjer og regler fastsatt av University of Ottawa Animal Care Committee og den kanadiske Council on Animal Care.

Disse endringene i celle typologi er tegn på underliggende endokrine hendelser. Den proestrus fase av brunst tilsvarer den menneskelige follikkelfase av menstruasjonssyklusen 5 og er definert av en pre-ovulasjon økning i sirkulerende 17-β-østradiolnivåer 6, så vel som en liten bølge i prolaktin 7 (figur 2, proestrus, venstre panel). Økningen i 17-β-østradiol stimulerer indirekte gonadotropinfrigjørende hormon nevroner i hypothalamus og septum som, i sin tur, aktiverer responsive celler i fremre hypofyse å frigi luteiniserende hormon og follikkelstimulerende hormon til sirkulasjonen 8,9 (Figur 2 , proestrus, venstre panel). I vaginal smears tatt fra dyr i proestrus, cellene er nesten utelukkende ovale kjerneholdige epitelceller (figur 1D, Figur 2, proestrus, høyre panel). Toppen i follikkelstimulerende Hormen nivåer signaler eggløsning og oppføring i estrus 10,11. Under estrus, 17-β-østradiol nivåer nedgang og prolaktin nivå topp 6,7 (Figur 2, estrus, venstre panel). Vaginal smears er preget av nesten eksklusive påvisning av uregelmessig-formet cornified squamous epitelceller ofte i klumper (figur 1E, figur 2, estrus, høyre panel). Inntreden i metestrus sammenfaller med en kontinuerlig økning i progesteron hormonnivået 6 og tilsvarer begynnelsen av menneskets lutealfasen 12 (figur 2, Metestrus, venstre panel). Som progesteron nivået begynner å stige, og det er en liten økning i 17-β-østradiolnivåer i respons til corpus luteum aktivering 6,13,14 (Figur 2, Metestrus, venstre panel). Celletyper stede i vaginal smears i denne fasen er fragmenterte, cornified epitelceller og mindre mørkere farget leukocytter (Figure 1F, figur 2, Metestrus, høyre panel). Endelig oppstår inngåelse diestrus hos mus og sirkulerende progesteronnivåer 6 topp, tilsvarende den menneskelige sent lutealfasen 12. Regresjon av corpus luteum fører til en senere kraftig nedgang i progesteron nivå 15,16 (figur 2, Diestrus, venstre panel). Leukocytter dominerer i smears under diestrus. Frekvensen av cornified epitelceller reduseres og kjerneholdige epitelceller begynner å påvises like før overgangen til proestrus (figur 1G, figur 2, Diestrus, høyre panel). Oppsummert kan denne enkle, rutinemessige protokollen brukes til å beregne daglige hormonelle svingninger og etablere estrous stadium i eksperimentelle mus uten å endre reproduktiv status hvis følgende forholdsregler er tatt. Prøvetaking skal utføres ikke mer enn en gang daglig ved hjelp av ikke-invasive protokoll described her i forhold til gjentatte penetrasjon av vaginal kanalen, aspirasjon, og agitasjon. Dette kan forårsake vaginal irritasjon resulterer i en inflammatorisk respons 17 resulterer i leukocytter og andre celletyper å være tilstede i utstryk som kan forvirre cytologisk vurdering. Dessuten, selv i koloni-huset kvinner, er det normalt å se utvidede diestrus og estrus stadier i forskjellige mus også induksjon av anestrous 18 og denne identifikasjonen er nyttig i tolkningen av hormonelle effekt i reproduktiv, kjønn og sykdom studier. Variasjon i sykluslengde er også introdusert med alder og etter boliger forskjeller innenfor kolonier (individ eller gruppe-bolig) av kvinner 7,19-21. Kvinner som lever i kvinnedominerte bare kolonier kan opphøre sykling og skriv en tilstand av langvarig diestrus 18,22,23 selv sykling kan gjenopprettes ved eksponering for bur forbehandlet med mannlig urin for å lokke fram sykling 24,25. Derfor, for å etablere individual sykluslengder for en gitt mus, anbefales det at de ikke-invasive nærmere beskrevet her utføres daglig, med omsorg, inntil to komplette sykluser er observert.

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn </td><td> Selskapet </td><td> Katalog # </td></tr><tr><td> Sterile 200 pl pipettespisser </td><td> Diamed </td><td> E340901 </td></tr><tr><td> Latex pære (1 ml) </td><td> Fisher </td><td> 03-488-21 </td></tr><tr><td> Glass objektglass </td><td> Fisher </td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> Crystal Violet flekk (25 g) </td><td> Fisher </td><td> C581-25 </td></tr><tr><td> Lette Tissue kluter </td><td> VWR </td><td> 82003-820 </td></tr><tr><td> Glyserol </td><td> Fisher </td><td> BP229-1 </td></tr><tr><td> Mikroskop Cover Glass (22x30) </td><td> Fisher </td><td> 12-544A </td></tr></tbody></table>

performing vaginal lavage, crystal violet staining, and vaginal cytological evaluation for mouse estrous cycle staging identification

En rask metode for å bedømme reproduktiv status hos gnagere er nyttig ikke bare i studiet av reproduktive dysfunksjon, men er også nødvendig for produksjon av nye musemodeller av sykdom og undersøkelser i hormonell regulering av vev degenerasjon (eller regenerering) etter patologisk utfordring. Murine reproduktive (eller estrous) syklus er delt inn i 4 stadier: proestrus, estrus, metestrus og diestrus. Definerte svingninger i sirkulerende nivåer av ovarian steroider 17-β-østradiol og progesteron, de gonadotropiner luteiniserende og follikkelstimulerende hormoner, og luteotropic hormonet prolaktin signal overgang gjennom disse reproduktive stadier. Endringer i celle typologi innenfor murine vaginal kanalen gjenspeiler disse underliggende endokrine hendelser. Daglig vurdering av den relative andel av kjerneholdige epitelceller, cornified squamous epitelceller, og leukocytter stede i vaginale utstryk kan brukes til å identifisere murine estrousstadier. Graden av invasivitet imidlertid ansatt i å samle inn disse prøvene kan endre reproduktiv status og lokke fram en betennelsesreaksjon som kan forvirre cytologisk vurdering av utstryk. Her beskriver vi en enkel, ikke-invasiv protokoll som kan brukes til å bestemme fasen av brunst av en kvinnelig mus uten å endre sin reproduktive syklus. Vi detalj hvordan å skille mellom de fire stadier av brunst ved innsamling og analyse av dominerende celle typologi i vaginal smears og vi viser hvordan disse endringene kan tolkes i forhold til endokrine status.

Watch this Scientific Journal Video about Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification at JoVE.com

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

Her beskriver vi hvordan du kan identifisere stadium av murine reproduktive (proestrus, estrus, metestrus eller diestrus) med enkle, ikke-invasiv innsamling og cytologisk vurdering av vaginal smear prøver. Vi videre beskrive hvordan vaginal cytologi reflekterer sirkulerende hormonelle nivåer underliggende overgang gjennom murine reproduktive syklus.

Utføre Vaginal lavage, Crystal Violet Staining, og vaginal cytologisk Taksering Mouse brunst Staging Identifikasjon

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Reversible, Non-invasive Method for Airway Resistance Measurements and Bronchoalveolar Lavage Fluid Sampling in Mice

Airway hyperreactivity (AHR) measurements and bronchoalveolar lavage (BAL) fluid sampling are essential to experimental asthma models, but repeated ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models

The human mammary gland is composed of 15-20 lobes that secrete milk into a branching duct system opening at the nipple. Those lobes are themselves ...

Live Cell Cycle Analysis of Drosophila Tissues using the Attune Acoustic Focusing Cytometer and Vybrant DyeCycle Violet DNA Stain

Live Cell Cycle Analysis of Drosophila Tissues using the Attune Acoustic Focusing Cytometer and Vybrant DyeCycle Violet DNA Stain

Live-Cell Cycle Analysis of<em&gt; Drosophila</em&gt; Vev bruker Attune Acoustic Fokusering cytometer og Vybrant DyeCycle Violet DNA Stain

Flow cytometry has  been widely used to obtain information about DNA content in a population of  cells, to infer relative percentages in different cell ...

Pyrosequencing for Microbial Identification and Characterization

Pyrosequencing for Identifisering av mikrober og karakterisering

Pyrosequencing is a versatile technique that facilitates microbial genome sequencing that can be used to identify bacterial species, discriminate ...

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Cytologisk Analyse spermatogenese: Skarp og Faste Preparater av<em&gt; Drosophila</em&gt; Testikler

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both ...

Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera

Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera

Metoder for Staging Pupal perioder og måling av vingen pigmentering i Drosophila guttifera

Diversified species of Drosophila (fruit fly) provide opportunities to study mechanisms of development and genetic changes responsible for evolutionary ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Trans-indre cellen masse injeksjon av embryonale stamceller fører til høyere Chimerism priser

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Kvantifisering av Lipid overflod og evaluering av Lipid distribusjon i Caenorhabditis elegans av Nilen rød og olje Red O flekker

Caenorhabditis elegans is an exceptional model organism in which to study lipid metabolism and energy homeostasis. Many of its lipid genes are conserved ...

Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots

Identifisering og Disseksjon av diverse mus fettlagre

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, ...