Name: dual electrophysiological recordings of synaptically-evoked astroglial and neuronal responses in acute hippocampal slices
Uploaded: 2012-11-26T12:00:00
Duration: 16 min 38 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить Dana Kamalidenova, Morgan Autexier, и Роха Chopier, который сделал видео и анимации, а также Флориан Бек на фотографиях и пост-продакшн видео голос за кадром. Эта работа была организована Олимп и поддержана грантами от HFSPO (Award развития карьеры), ANR (Программа Jeunes chercheurs и программы Blanc нейронаук), FRC (Федерация Pour La Recherche сюр-ле-Cerveau), INSERM и Ла-Питье Сальпетриер больницы (Трансляционные исследования контракт) для NR, по-французски исследований Министерства и Deutsche Forschungsgemeinschaft постдок стипендии, и от докторской школе &quot;Границы в Life Science&quot;, Париж Дидро университета, Бетанкур Шуллер фундамент, и FRM (Fondation Pour La Recherche Médicale) докторские стипендии для JS

<ol>
	<li>Finkel, A., Bookman, R., Crawley, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+6+The+electrophysiology+setup.">Chapter 6 The electrophysiology setup.</a> Current protocols in neuroscience. , (2001).</li><li>Yuan, Y. A., Atchison, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elelctrophysiological+studies+of+neurotoxicants+on+central+synaptic+transmission+in+acutely+isolated+brain+slices.">Elelctrophysiological studies of neurotoxicants on central synaptic transmission in acutely isolated brain slices.</a> Current Protocols in Toxicology. , (2003).</li><li>Bergles, D. E., Jahr, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+activation+of+glutamate+transporters+in+hippocampal+astrocytes.">Synaptic activation of glutamate transporters in hippocampal astrocytes.</a> Neuron. 19, 1297-1308 (1997).</li><li>Diamond, J. S., Bergles, D. E., Jahr, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamate+release+monitored+with+astrocyte+transporter+currents+during+LTP.">Glutamate release monitored with astrocyte transporter currents during LTP.</a> Neuron. 21, 425-433 (1998).</li><li>Luscher, C., Malenka, R. C., Nicoll, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+glutamate+release+during+LTP+with+glial+transporter+currents.">Monitoring glutamate release during LTP with glial transporter currents.</a> Neuron. 21, 435-441 (1998).</li><li>Pannasch, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astroglial+networks+scale+synaptic+activity+and+plasticity.">Astroglial networks scale synaptic activity and plasticity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 8467-8472 (2011).</li><li>Poolos, N. P., Mauk, M. D., Kocsis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-evoked+increases+in+extracellular+potassium+modulate+presynaptic+excitability+in+the+CA1+region+of+the+hippocampus.">Activity-evoked increases in extracellular potassium modulate presynaptic excitability in the CA1 region of the hippocampus.</a> J. Neurophysiol. 58, 404-416 (1987).</li><li>Amzica, F., Massimini, M., Manfridi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+buffering+during+slow+and+paroxysmal+sleep+oscillations+in+cortical+networks+of+glial+cells+in+vivo.">Spatial buffering during slow and paroxysmal sleep oscillations in cortical networks of glial cells in vivo.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 22, 1042-1053 (2002).</li><li>Diamond, J. S., Jahr, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transporters+buffer+synaptically+released+glutamate+on+a+submillisecond+time+scale.">Transporters buffer synaptically released glutamate on a submillisecond time scale.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 17, 4672-4687 (1997).</li><li>Oliet, S. H., Piet, R., Poulain, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+glutamate+clearance+and+synaptic+efficacy+by+glial+coverage+of+neurons.">Control of glutamate clearance and synaptic efficacy by glial coverage of neurons.</a> Science. 292, 923-926 (2001).</li><li>Bergles, D. E., Jahr, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+contribution+to+glutamate+uptake+at+Schaffer+collateral-commissural+synapses+in+the+hippocampus.">Glial contribution to glutamate uptake at Schaffer collateral-commissural synapses in the hippocampus.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 18, 7709-7716 (1998).</li><li>Danbolt, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamate+uptake.">Glutamate uptake.</a> Prog. Neurobiol. 65, 1-105 (2001).</li><li>Diamond, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deriving+the+glutamate+clearance+time+course+from+transporter+currents+in+CA1+hippocampal+astrocytes:+transmitter+uptake+gets+faster+during+development.">Deriving the glutamate clearance time course from transporter currents in CA1 hippocampal astrocytes: transmitter uptake gets faster during development.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 25, 2906-2916 (2005).</li><li>Scimemi, A., Tian, H., Diamond, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+transporter+regulate+glutamate+clearance,+NMDA+receptor+activation,+and+synaptic+plasticity+in+the+hippocampus.">Neuronal transporter regulate glutamate clearance, NMDA receptor activation, and synaptic plasticity in the hippocampus.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 18, 14581-14595 (2009).</li><li>Davie, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+patch-clamp+recording.">Dendritic patch-clamp recording.</a> Nature. 1, 1235-1247 (2006).</li><li>Reeves, A. M., Shigetomi, E., Khakh, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bulk+loading+of+calcium+indicator+dyes+to+study+astrocyte+physiology:+key+limitations+and+improvements+using+morphological+maps.">Bulk loading of calcium indicator dyes to study astrocyte physiology: key limitations and improvements using morphological maps.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 31, 9353-9358 (2011).</li><li>Panatier, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+are+endogenous+regulators+of+basal+transmission+at+central+synapses.">Astrocytes are endogenous regulators of basal transmission at central synapses.</a> Cell. 146, 785-798 (2011).</li><li>Castro, M. A. D. i., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+Ca2++detection+and+modulation+of+synaptic+release+by+astrocytes.">Local Ca2+ detection and modulation of synaptic release by astrocytes.</a> Nature. 14, 1276-1284 (2011).</li><li>Shigetomi, E., Kracun, S., Sofroniew, M. V., Khakh, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetically+targeted+optical+sensor+to+monitor+calcium+signals+in+astrocyte+processes.">A genetically targeted optical sensor to monitor calcium signals in astrocyte processes.</a> Nature. 13, 759-766 (2010).</li></ol>

Нет конфликта интересов объявлены.

Двойная запись синаптически-индуцированной нейронов и глиальных ответов является полезным методом для изучения онлайн изменениях в пре-и постсинаптических деятельности, связанные с изменениями в астроглиального свойства. Синаптически-вызванных глиальных деполяризация мембраны является прямой мерой внеклеточного калия рост 8, отчасти из-за пресинаптических стрельбы потенциал действия, но в основном постсинаптической деполяризации 7. Поэтому записи глиальных динамику мембранного потенциала может быть использован для исследования изменений в пресинаптических возбудимость, постсинаптической активности, объема внеклеточной пространстве и калия возможности буферизации 6, 8. Астроглиального текущего транспортера глутамата является чувствительной мерой пресинаптического высвобождения глутамата, в состоянии контролировать краткосрочных изменений в релизе вероятностью 3, 5, 9. Он может быть дополнительно использованы для характеристики функционального синапс-глии взаимодействий на разных синапсов или в разное развития Санкт-возраст от 10. Следует подчеркнуть, что GLTs очень чувствительны к температуре 11 и приводятся в действие электрохимической градиента Na +, K + и H +12. Таким образом, амплитуды и кинетики GLT текущего сильно зависит от выбранных условий эксперимента. Кроме того, реальный ход времени астроглиальных оформления глутамата, полученные из записанных текущего GLT, как известно, частично скрыт. Это связано с фильтрацией GLT токи такие факторы, как электротонические свойствам астроциты или асинхронного выпуска передатчик, который искажает их кинетики 13. Методы извлечения временных особенностей механизмов фильтрации были разработаны и могут быть использованы для получения фактических глутамата время очистки курс в физиологических или патологических ситуациях, как recenly выполнены 6,13,14. Кроме того, одновременная запись астроглиального деполяризации мембраны, в токовые клещи, может обеспечить незначительныHTS возможные изменения внеклеточного калия переходных процессов. Одноместный астроциты обратиться до 100.000 синапсов ~ 100 различных нейронах, и не потому интеграции и модулируют активность местных нейронных сетей. При использовании техники, представленные здесь, т. е. записи электрофизиологических все-клеточного ответа из астроцитов, чтобы получить представление базального синаптической активности, следует иметь в виду, что астроциты, патч-зажим записи на уровне сомы позволяют обнаруживать токи основном происходящие из клеток сомы или проксимальных процессов. Действительно, токи обнаружены на сомы лишь частично происходят от мелких дистальных процессов, когда сильная активация рецепторов и каналов, происходящих в несколько тонких процессов может генерировать токи, распространяющиеся в клетку сомы. Таким образом, базальная рецептор и канал активности в отдельных небольших астроглиального синаптических процессов, охватывающих отсеков трудно обнаружить. Это связано отчасти с ограниченной плюнулриала и временной контроль мембранных токов и напряжений на целых клеток патч-зажим записи из астроцитов на месте. Тем не менее, следует отметить, что поверхность обильным крошечные астроцитов процессов значительно превышает площадь мембраны из сома и основные процессы. Кроме того, эти perisynaptic астроглиального микродоменов содержаться функционально соответствующих рецепторов и каналов, которые, вероятно, играют важную роль в нейроглии связи и синаптических регулирования. Техника мы представили здесь, поэтому наиболее полезна для изучения астроцитов интеграция синхронной активности нейронных ансамблей, происходящих в частности, во время afference стимуляции. Она не должна быть использована для изучения диалога между отдельными синапсов и прилегающих штрафа астроцитов процессов, происходящих при базально спонтанной активности. Альтернативный метод для изучения местных астроглиального ответов, индуцированная базальную синаптическую деятельность будет выполнять патч-зажим записи из тонких процессов, а годин в дендритах 15. Несмотря на исправление этих прекрасных астроглиального процессы, скорее всего, сталкивается с проблемами из-за их небольшого размера, это, вероятно, проспект проводить, чтобы распутать более интимной диалог между астроглиального микродоменов и индивидуальных синапсов. Тем не менее, вероятно, небольшое электрофизиологических астроглиального ответов в результате отдельных тонких астроглиального процессов может быть ниже порога обнаружения, так как электрический шум достигает в среднем 3-5 годовых в патч-зажим записи. Другой метод изучения астроглиального ответы на синаптической активности кальция изображений, так как активация астроцитов мембранных рецепторов или перевозчиков веществами нейроактивные может вызвать внутриклеточного кальция переходные. Тем не менее, массовая загрузка астроцитов с кальцием показатели могут также отражают в основном соматическими деятельности 16. Сочетание изображений электрофизиологии и кальция также позволяет обнаружения слабых сигналов кальция из тонкой астроглиального процессы, происходящие либо спонтанно, либо срабатывает бУ минимальная стимуляция синаптической 17, 18. Тем не менее, следует иметь в виду, что высокое сродство показатели кальция может действовать как кальций буфера, препятствуя важным кальцием сигнальных путей, в то время как низкоаффинных показатели могут работать ниже уровня обнаружения. Наконец, элегантный и неинвазивный метод для изучения событий кальция в тонкой астроцитов процессы, которые также обходит вымывания внутриклеточных сигнальных молекул, в течение целых клеток патч-зажим, состоит в использовании мембраны целевых кальция датчик, который может быть выражен в астроциты на местах, а также в естественных условиях 19. Тем не менее, кальция изображений может предоставить только информацию об одной сигнальной молекулой, которая участвует во многих, но не всех сотовых деятельности, в то время как целых клеток патч-зажим обеспечивает количественную информацию обо всех различных ионные токи вызвали на канал и активации рецептора. Поэтому одновременное электрофизиологических записей из нейронов и астроцитовпредставляют собой уникальный и мощный метод, чтобы разгадать онлайн динамики нейроглии ионной сигнализации и ее роль мозга обработки информации.

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td><td> Комментарии (по желанию) </td></tr><tr><td> Пикротоксина </td><td> Сигма </td><td> P1675 </td><td> растворяется в ДМСО </td></tr><tr><td> Кинуреновой кислоты </td><td> Tocris </td><td> 0223 </td><td> растворяется при 34 ° C перемешивание или ультразвуком </td></tr><tr><td> DL-TBOA </td><td> Tocris </td><td> 1223 </td><td> DCG IV Tocris 0975 </td></tr></tbody></table>

dual electrophysiological recordings of synaptically-evoked astroglial and neuronal responses in acute hippocampal slices

Астроциты образуют вместе с нейронами трехсторонней синапсы, где они интегрируются и модулируют активность нейронов. Действительно, астроциты чувствую нейронные входы через активацию их ионных каналов и рецепторов нейромедиаторов и обработки информации в части деятельности по-зависимых выпуска gliotransmitters. Кроме того, астроциты являются основной системой поглощения для глутамата, способствует калий пространственных буферизации, а также ГАМК оформления. Эти клетки таким образом постоянно контролировать синаптической активности, и тем самым чувствительным показателям изменений в синаптически выпустила глутамата, ГАМК и внеклеточного калия уровнях. Кроме того, изменения в астроглиального деятельности поглощение или буферная емкость может иметь серьезные последствия для нейронных функций, и может быть упускать из виду при характеристике патофизиологической ситуации или нокаут мышей. Двойная запись нейронов и астроглиального деятельности является важным методом изучения изменений всинаптической силы, связанные с сопутствующими изменениями в астроглиального поглощения и буферизации мощностей. Здесь мы расскажем, как подготовить срезов гиппокампа, как определить слой radiatum астроцитов, и как записать одновременно нейронов и астроглиального электрофизиологические реакции. Кроме того, мы расскажем, как изолировать фармакологически синаптически-вызванных астроглиального токов.

Представитель одновременной записи синаптически-вызванных астроглиального и нейронных ответов (fEPSPs) в CA1 области гиппокампа показано на рисунке 2 AB. Вызвали астроглиального ток двухфазный, то есть он состоит из переходных наружу текущих и медленно затухающей внутрь тока (&gt; 10 сек) (рис. 2В). Внешнее отражает текущее вызвало fEPSP, и блокируется после торможения ионотропных глутаматных рецепторов на кинуреновой кислоты (темно-серый след, рис. 2В) 3. Большинство медленного входящего тока отражает калия вступления в астроциты следующие постсинаптической деполяризации, так как он также отменил кинуреновой кислоту, которая подавляет постсинаптических ионотропных глутаматных рецепторов деятельности (рис. 2В и 2С Рисунок 1) 3-6, известный представляют собой основной источник (80%) калия выпуска 7. Остальные быстро растетг распадающейся внутрь текущего подавляется GLT антагониста DL-TBOA (светло-серый след, рисунок 2B и 2C Рисунок 2). После специальной вычитания оставшихся медленный ток в TBOA (светло-серый след) от тока в кинуреновой кислоты (темно-серый след) позволяет изолировать чисто астроглиального транспортера глутамата тока (черная линия), как показано на рисунке 2C 2. Стойких медленно убывающих тока в кинуреновой кислоты и TBOA (светло-серый след, рисунок 2B и 2C рисунок 2) может быть заблокирован TTX (данные не представлены), и отражает, скорее всего, накопление внеклеточного К + выпущен в пресинаптических афферентных стрельбы 3. Умеренный одного стимуляции Шаффер залогов вызывает относительно большое синаптически-вызванных астроглиального тока по сравнению с небольшим вызвали деполяризации записали в той же ячейке (рис. 2D). Это связано снизкое сопротивление мембраны астроцитов. Запись вызвала синаптически-астроглиального динамику мембранного потенциала, как показано на рисунке 2D, является прямой мерой местного уровня внеклеточного калия 8. Нормализация вызвали астроглиального ответы на основные активности нейронов позволяет прямое сравнение различных экспериментов, как недавно показано 6. Астроглиального токи кроме того, может контролировать очень надежно изменений в возбуждающих передач, а общая синаптически-вызванных астроглиального текущего следующим линейно увеличение fEPSP (рис. 2E). Астроглиального токи также отражают краткосрочную синаптическую пластичность, так как они показывают, как нейроны, в паре импульс упрощению (рис. 2F). Парные цельноклеточной записи CA1 пирамидальных клеток и астроцитов показывают очень разные электрофизиологические поведения в обоих типах клеток, так как дисплей нейронов потенциалы действия в ответ на деполяризующего импульса,в то время как соседние астроциты молчит (рис. 3А-B). Тем не менее, умеренное раздражение Шаффер залога может вызвать одновременно быстро возбуждающие posynaptic потенциала в CA1 пирамидальных клеток и быстро наружу и медленно внутрь токов в соседних астроцитов (рис. 3В 2). Двойная запись синаптически-вызванных нейронов и астроглиального ответ также может быть записан в СА3 области гиппокампа, как показано на рисунке 3C. В самом деле, одна стимуляция CA3 мшистых волокон вызывает в базальных условиях очень малой нейронных реакций, регистрируются как местные fEPSPs, связанные с небольшим быстрых и медленных наружу внутренние токи в астроциты (рис. 3D-1). В отличие от 1 Гц стимуляции CA3 мшистых волокон на несколько секунд сильно усиливает fEPSP, пока это только умеренно увеличивает астроглиального ответа (Рисунок 3D-2). Рисунок 1. Hippocampus изоляции для подготовки поперечных срезов. Чтобы препарировать мозг, разрезать череп вдоль средней линии (а). Сделать корональной разрез на уровне обонятельной луковице (б), а затем на уровне мозжечка (с). Осторожно снимите черепа с помощью щипцов (D), разделить два полушария с лезвием (е), и передавать их на небольшую ложку в холодной кислородом ACSF (F). После ~ 5 мин равновесия, поместить одного полушария на сухой ткани с медиальной поверхности вверх (г). С помощью двух ложек удалить промежуточного мозга (HJ). Гиппокамп теперь видна, как показано пунктирными линиями (к). Проанализируйте гиппокамп с ложкой в ​​аренду, начиная с бахромкой, видны как белые структуры (лм). Передача гиппокампа обратно в холодную ACSF. Подготовьте небольшую агарозном блока, позиция двух гиппокамп с Alveus стороной вверх и брюшной гиппокампанам, стоящих перед краем агар блок, и помочь тщательно все жидкие далеко, чтобы позволить хороший привязанность к агар (п). Клей гиппокампа прикреплены к агар блок на вентральной части (о). <img src="/files/ftp_upload/4418/4418fig2.jpg" alt="Рисунок 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/4418/4418fig2highres.jpg"/> Рисунок 2. Одновременное нейронов и астроглиального ответы вызывали-синаптически в CA1 области гиппокампа. А) схема гиппокампа ломтик иллюстрирующие расположение стимулирующий электрод, чтобы активировать Шаффер залогов (SC), электрод патч пипетки, чтобы записать астроцитов токов и внеклеточных электродов, чтобы записать fEPSP, вызванных стимуляцией SC в гиппокампе CA1 области. Б) представитель следы одновременной записи fEPSPs (верхняя панель) и астроцитов тока (нижняя панель) вызвала синаптически по-SC стимуляции в presencе фармакологических препаратов. Ответы сначала записываются в присутствии ГАМК-рецепторов блокатор (пикротоксина, 100 мкм, черные следы), чтобы изолировать возбуждающие ответы. Последующее применение рецептора глутамата ионотропных блокаторы (кинуреновой кислоты, 5 мм, темно-серые следы), тормозит fEPSP и большая часть длительный астроглиального тока, разоблачая маленькие и быстрые переходные компоненты астроцитов текущий ответ, который чувствительны к глутамат блокатор транспортер (TBOA, 200 мкм, светло-серые следы). Шкала бар, fEPSP 0,1 мВ, астроцитов ток 15 мкА, 10 мс. C 1). Пример след астроглиального калия текущей (1-2), который может быть изолирован от вызвала отклик, показанный на B (нижняя панель, черный след), путем вычитания текущего компонента, оставшихся в кинуреновой кислоты (2) от общего тока ( 1). Шкала бар, 20 Па, 1 сек. C 2) Пример след транспортера глутамата текущей (2-3), получаемой путем вычитания TBOA яnsensitive медленного компонента (3) от тока в кинуреновой кислоты (2). Шкала бар, 2,5 мкА, 25 мсек. D) Пример следы входящего тока, записанные в напряжении зажим (нижняя панель) и соответствующие деполяризации мембраны, записанных в текущем зажим (верхняя панель), индуцированный в астроцитов путем стимуляции SC. Шкала бар, ток зажима 1,5 мВ, напряжение, зажим 5 Па, 1 сек. E) ввода-вывода кривые, иллюстрирующие связь между пресинаптического волокна залпов (вход) и общее астроглиального ток (выход) записываются одновременно в ответ на стимуляцию SC (n = 6). Астроглиального ток увеличивается линейно с увеличением залпы волокна, как нейронные fEPSP. F) Пример следы нейронные реакции (fEPSP) и астроцитов текущего показаны для парных импульсов стимуляции на 40 мс интервал паузы. Синаптически-вызванных астроглиального текущего экспонаты, такие как нейроны, парных импульсов процедур. Шкала бар, 0,1 мВ, 5 Па, 20 мс. <p class="jove_content" fo:keep-together.within-страница = &quot;Всегда&quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/4418/4418fig3.jpg" alt="Рисунок 3" fo:content-width="3.75in" fo:src="/files/ftp_upload/4418/4418fig3highres.jpg"/> Рисунок 3. Двойной записи синаптически вызванных нейронов и астроглиального ответы в CA1 и CA3 областей гиппокампа. A) Реконструкция CA1 пирамидальные клетки вводили сульфородамина-B (красный, 0,1%) и астроцитов заполнены флуоресцеина декстрана (зеленый, 0,1%), использование целых клеток патч-зажим техники. Шкала бар, 10 мкм. B 1) представитель следы одновременного цельноклеточной записи мембранных потенциалов, записанных в текущем зажим от CA1 пирамидальных клеток и соседних астроцитов. Нейронов потенциал действия (черный след), вызванного введением 20 пА деполяризующего импульса тока, вызывает никакой реакции в соседних астроцитов (серая линия). Шкала бар, 20 мВ, 10 мкА, 100 мс. B 2) Пример следы двойного цельноклеточной записи CA1 пирамидальные клетки в текущем моллюска-р и соседних астроцитов в напряжении зажим SC после стимуляции в присутствии пикротоксина (100 мкМ). SC стимуляция вызывает возбуждающих постсинаптических потенциалов (ВПСП, черный след), связанных с малым и длительный астроцитов тока (серая линия). Шкала бар, 5 мВ, 10 мкА, 100 мс. C) Схема гиппокампа ломтик изображающие в зубчатой ​​извилине (DG) и СА3 области расположения стимулирующих электродов, чтобы активировать мшистых волокон, электродов патч пипетки (серый), для записи астроцитов токов и внеклеточных электродов, чтобы запись fEPSP, вызванных CA3 мшистых стимуляции волокон. D, E) представитель следы парных записей CA3 fEPSPs (верхней панели, черные следы в D 1 и D 2) и астроцитов все-клеточного ответа (нижние панели, серые следы в D 1 и D 2) в одном стимуляции CA3 мшистых волокон на 0,02 Гц (увеличение на вставке) (D 1) или с частотой 1 Гц частоты стимуляции (D 2). Шкала бар D <sub&gt; 1 и D 2, 0,2 мВ, 15 мкА, время: D 1 1 сек; D 2 100 мсек. Врезка шкалы, 0,1 мВ, 100 мс.

Watch this Scientific Journal Video about Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices at JoVE.com

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

Подготовка острых кусочков мозга от изолированного гиппокампа, а также одновременное электрофизиологических записей астроцитов и нейронов в<em&gt; Слой radiatum</em&gt; При раздражении Шаффер залогов описано. Фармакологические изоляции астроглиального калия и глутамат токи транспортера показано.

Двойной Электрофизиологические Записи синаптически-вызванных астроглиального и нейрональных ответов, при остром срезов гиппокампа

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dual Somatic Recordings from Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) Neurons Identified by Green Fluorescent Protein (GFP) in Hypothalamic Slices

Dual Somatic Recordings from Gonadotropin-Releasing Hormone GnRH Neurons Identified by Green Fluorescent Protein GFP in Hypothalamic Slices

Двойной Записи Соматические от гонадотропин-рилизинг гормона (ГнРГ) Нейроны, идентифицируемый зеленый флуоресцентный белок (GFP) в гипоталамус Ломтики

Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) is a small neuropeptide that regulates pituitary release of luteinizing hormone (LH) and follicle-stimulating ...

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

Подготовка острого срезах гиппокампа крыс и трансгенных мышей для изучения Synaptic Изменения в процессе старения и амилоида патологии

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

Paired Whole Cell Recordings in Organotypic Hippocampal Slices

Парные Целые Записи Сотовые в Органотипической срезов гиппокампа

Pair recordings involve simultaneous whole cell patch clamp recordings from two synaptically connected neurons, enabling not only direct ...

Electrophysiological and Morphological Characterization of Neuronal Microcircuits in Acute Brain Slices Using Paired Patch-Clamp Recordings

Электрофизиологических и морфологических характеристик нейронов микросхем при остром мозга срезов при использовании парных патч-зажим Recordings

The combination of patch clamp recordings from two (or more) synaptically coupled neurons (paired recordings) in acute brain slice preparations with ...

Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents

Исследование Synaptic Tagging / Захват и кросс-захвата с помощью острой срезах гиппокампа от грызунов

Synaptic tagging and capture (STC) and cross-tagging are two important mechanisms at cellular level that explain how synapse-specificity and associativity ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Запись синаптической пластичности в острой гиппокампа ломтики в малообъемной рециркуляции-, перфузии и погружения типа камерная система

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Acute In Vivo Electrophysiological Recordings of Local Field Potentials and Multi-unit Activity from the Hyperdirect Pathway in Anesthetized Rats

Acute In Vivo Electrophysiological Recordings of Local Field Potentials and Multi-unit Activity from the Hyperdirect Pathway in Anesthetized Rats

острый<em&gt; В Виво</em&gt; Электрофизиологические записи локальных полевых потенциалов и многоуровневой активности по пути гиперперспекции у анестезированных крыс

Converging evidence shows that many neuropsychiatric diseases should be understood as disorders of large-scale neuronal networks. To better understand the ...

Evaluation of Synapse Density in Hippocampal Rodent Brain Slices

Оценка плотности синапсов в срезах гиппокампа грызунов мозга

In the brain, synapses are specialized junctions between neurons, determining the strength and spread of neuronal signaling. The number of synapses is ...

Optogenetic Entrainment of Hippocampal Theta Oscillations in Behaving Mice

Optogenetic ГРЭС гиппокампа тета колебаний в себя мышей

Extensive data on relationships of neural network oscillations to behavior and organization of neuronal discharge across brain regions call for new tools ...

Preparation of Acute Human Hippocampal Slices for Electrophysiological Recordings

Подготовка острых человеческих гиппокампа для электрофизиологических записей

Epilepsy affects about 1% of the world population and leads to a severe decrease in quality of life due to ongoing seizures as well as high risk for ...