Name: isolation of normal and cancer-associated fibroblasts from fresh tissues by fluorescence activated cell sorting (facs)
Uploaded: 2013-01-14T13:00:00
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我々は、FACSソーティングと彼らの助けのために博士Yitzchak Oschry博士と点の他鷺-アシフに感謝します。この研究は、助成合意nの下欧州連合第7次フレームワーク計画（FP7/2007-2013）から°[276890]、イスラエル癌学会（＃20110078）から、イスラエルがん研究基金（ 研究からNEへの補助金によって支えられてキャリア開発賞 ）。

1。マウスから乳腺や皮膚組織を解剖する<ol><li>マウスから所望の組織を切開する前に、次の消耗品と試薬を準備します。 備品： <ul><li>手術ツール（洗剤で洗浄した後、70％エタノールに浸漬）。 </li><li>発泡スチロールの表面には、解剖時にマウスを休ませる。 </li><li>解剖時にマウスを保持するためにピンや針。 </li><li>磁気攪拌棒（オートクレーブ）を含む消化のために...

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	<li>Kalluri, R., Zeisberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblasts+in+cancer.">Fibroblasts in cancer.</a> Nat. Rev. Cancer. 6, 392-401 (2006).</li><li>Shimoda, M., Mellody, K. T., Orimo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carcinoma-associated+fibroblasts+are+a+rate-limiting+determinant+for+tumour+progression.">Carcinoma-associated fibroblasts are a rate-limiting determinant for tumour progression.</a> Seminars in cell &amp; developmental biology. 21, 19-25 (2010).</li><li>Orimo, A., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+stromal+fibroblasts+in+tumors.">Heterogeneity of stromal fibroblasts in tumors.</a> Cancer Biol. 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G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+complexity+in+breast+cancer+predicts+overall+survival+and+functionally+regulates+response+to+chemotherapy.">Leukocyte complexity in breast cancer predicts overall survival and functionally regulates response to chemotherapy.</a> Cancer Discovery. 1, 54-67 (2011).</li><li>Pahler, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+in+tumor-promoting+inflammation:+impairment+of+macrophage+recruitment+evokes+a+compensatory+neutrophil+response.">Plasticity in tumor-promoting inflammation: impairment of macrophage recruitment evokes a compensatory neutrophil response.</a> Neoplasia. 10, 329-340 (2008).</li><li>Pietras, K., Pahler, J., Bergers, G., Hanahan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functions+of+paracrine+PDGF+signaling+in+the+proangiogenic+tumor+stroma+revealed+by+pharmacological+targeting.">Functions of paracrine PDGF signaling in the proangiogenic tumor stroma revealed by pharmacological targeting.</a> PLoS Med. 5, e19 (2008).</li><li>Quante, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow-derived+myofibroblasts+contribute+to+the+mesenchymal+stem+cell+niche+and+promote+tumor+growth.">Bone marrow-derived myofibroblasts contribute to the mesenchymal stem cell niche and promote tumor growth.</a> Cancer Cell. 19, 257-272 (2011).</li><li>Plante, I., Stewart, M. 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組織培養で行われた実験は、有益であるとin vivoで検証することができる機能的な原則を提案することができますが、それは文化11,12中の細胞の遺伝子発現に大きな変化が起こることが知られている。線維芽細胞における遺伝子発現プロファイルの作成時手順組織培養を避けるために、私たちは新鮮なマウスやヒト組織から通常の分離、ならびに癌関連線維芽細胞を可能にする?...

<table border="1"&gt;<tbody&gt;<tr&gt;<td<strong試薬の&gt;名前</strong</td&gt;<td<strong&gt;会社概要</strong</td&gt;<td<strong&gt;カタログ番号</strong</td&gt;<td<strong&gt;コメント（オプション）</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; DMEM</td&gt;<td&gt;ギブコ</td&gt;<td&gt; 41965</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; PBS</td&gt;<td&gt;生物産業</td&gt;<td&gt; 02-023-1A</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;コラゲナーゼII</td&gt;<td&gt;ワージントン</td&gt;<td&gt; LS4176</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;コラゲナーゼIV</td&gt;<td&gt;ワージントン</td&gt;<td&gt; LS4188</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;デオキシリボヌクレアーゼ</td&gt;<td&gt;ワージントン</td&gt;<td&gt; LS2007</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; PharmLyse</td&gt;<td&gt; BD</td&gt;<td&gt; 555899</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;セルストレーナー70μmの</td&gt;<td&gt; SPL</td&gt;<td&gt; 93070</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;精製された抗マウスCD16/CD32</td&gt;<td&gt; BDファーミンジェン</td&gt;<td&gt; 553142</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;を介してプローブ（7AAD）</td&gt;<td&gt;電子バイオサイエンス</td&gt;<td&gt; 00-6993-50</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;アンチマウスCD140a-PE（PDGFRA）</td&gt;<td&gt;電子バイオサイエンス</td&gt;<td&gt; 12-1401-81</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;アンチマウスF4/80- FITC</td&gt;<td&gt; Cederlane</td&gt;<td&gt; CL8940F</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; DMEM W / Oフェノールレッド</td&gt;<td&gt;ギブコ</td&gt;<td&gt; 31053</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; I型コラーゲン</td&gt;<td&gt; BD Biosciences社</td&gt;<td&gt; 354236</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table

isolation of normal and cancer-associated fibroblasts from fresh tissues by fluorescence activated cell sorting (facs)

癌関連線維芽細胞（CAFS）は、特定の乳癌では、多くの癌の腫瘍間質内で最も顕著な細胞型であり、その卓越した存在は、しばしば予後不良の1,2に関連付けられています。 CAFSは、間質の線維芽細胞の活性化亜集団であり、それらの多くは筋線維芽細胞マーカーのα-SMA 3を発現している 。 CAFSは、地元組織の線維芽細胞からだけでなく、骨髄由来細胞から由来する腫瘍の開発に採用され、腫瘍微小環境4の影響下にCAFの表現型を採用しています。 CAFSは、腫瘍細胞増殖、血管新生、および浸潤5-8を促進し、そのシグナル伝達を介して腫瘍の開始、成長と進行を促進することが示された。我々は、CAFSは早く前腫瘍段階9時から、腫瘍促進炎症を介在することによって腫瘍の成長を高めることが実証された。腫瘍の成長を促進する上で重要な役割をCAFSプレイの増加する証拠にもかかわらず、勉強CAFSは、CAF-特異的なマーカーと腫瘍微小環境10に共存する多くのサブタイプを持つこれらの細胞の広大な異質性の欠如のために継続的な課題となっている。また、in vitroで線維芽細胞を研究し、それらの遺伝子発現プロファイルはしばしば組織培養11,12で変更されているという事実によって妨げられる。この問題に対処するために、新鮮なマウスおよびヒト組織からの線維芽細胞の公平な遺伝子発現プロファイリングを可能にするために、我々は、蛍光活性化細胞ソーティング（FACS）13,14は、前のプロトコルに基づいた方法を開発した。我々のアプローチは新鮮なマウスおよびヒト組織から線維芽細胞を単離するための表面マーカーとしてPDGFRαを利用に依存しています。 PDGFRαは豊富正常線維芽細胞およびCAFS 9,15両方で表される。このメソッドは、正常線維芽細胞およびCAFSの純粋な集団の単離を可能に含むが、α-SMA +活性化筋線維芽細胞に限定されません。隔離された線維芽細胞は、その後することができます特性評価および腫瘍形成時にCAFSで発生し遺伝子発現の進化の比較のために使用される。実際、我々と他の人は16を細胞選別によって単離された線維芽細胞の発現プロファイリングを報告した。このプロトコルは正常皮膚、乳腺、膵臓、肺組織からの線維芽細胞の高度に濃縮された集団を分離し、プロファイリングを行った。また、我々の手法は、機能の実験を行うため、しばしば文化CAFSしようと、大きな障害となっている腫瘍細胞による汚染を避けるために、選別された細胞を培養することができます。

組織の線維芽細胞の高度に濃縮された集団の分離における線維芽細胞の結果のためのマーカーとしてPDGFRαを使用。ポスト·ソート解析（ 図2A）によって定量化と並べ替えの後に純度のレベルは、99％であった。細胞特異的な制御遺伝子の相対的発現（ 図2B）によって、非線維芽細胞を汚染の割合を推定することは、一般的に0.1から0.6パーセントの汚染を示しています?...

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Isolation of Normal and Cancer-associated Fibroblasts from Fresh Tissues by Fluorescence Activated Cell Sorting FACS

癌関連線維芽細胞（CAFS）は増殖、血管新生、炎症を促進し、そのシグナル伝達を介して腫瘍の開始、成長と進行を容易にします。ここでは、表面マーカーとしてPDGFRαを使用して、細胞選別により新鮮なマウスおよびヒト組織由来正常線維芽細胞とCAFSの純粋な集団を単離するための方法を説明します。

蛍光活性化細胞選別（FACS）によって新鮮な組織からの正常および癌関連線維芽細胞の分離

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) are the most prominent cell type within the tumor stroma of many cancers, in particular breast carcinoma, and their ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Normal and Cancer-associated Fibroblasts from Fresh Tissues by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS)

Isolation and Purification of Drosophila Peripheral Neurons by Magnetic Bead Sorting

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の単離と精製ショウジョウバエ</em磁気ビーズソート別>末梢ニューロン

The Drosophila peripheral nervous system (PNS) is a powerful model for investigating the complex processes of neuronal development and dendrite ...

Fluorescence Activated Cell Sorting of Plant Protoplasts

植物プロトプラストの蛍光活性化細胞選別

High-resolution, cell type-specific analysis of gene expression greatly enhances understanding of developmental regulation and responses to environmental ...

Lipid Vesicle-mediated Affinity Chromatography using Magnetic Activated Cell Sorting (LIMACS): a Novel Method to Analyze Protein-lipid Interaction

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磁気活性化細胞選別（LIMACS）を使用して、脂質小胞を介したアフィニティクロマトグラフィー：タンパク質脂質相互作用を解析する新手法

The analysis of lipid protein interaction is difficult because lipids are embedded in cell membranes and therefore, inaccessible to most purification ...

Bromodeoxyuridine (BrdU) Labeling and Subsequent Fluorescence Activated Cell Sorting for Culture-independent Identification of Dissolved Organic Carbon-degrading Bacterioplankton

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ブロモデオキシウリジン（BrdU）標識と溶存有機の文化に依存しない識別に対する後続の蛍光活性化細胞選別カーボン分解Bacterioplankton

Microbes are major agents mediating the degradation of numerous dissolved organic carbon (DOC) substrates in aquatic environments. However, identification ...

Isolation of Rat Portal Fibroblasts by In situ Liver Perfusion

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ラットポータル線維芽細胞の分離により、<em&gt;その場</em&gt;肝灌流

Liver fibrosis is defined  by the excessive deposition of extracellular matrix by activated  myofibroblasts. There are multiple precursors of hepatic ...

Cell Specific Analysis of Arabidopsis Leaves Using Fluorescence Activated Cell Sorting

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の細胞特異的な分析<em&gt;シロイヌナズナ</em&gt;蛍光活性化細胞選別を使用した葉

After initiation of the leaf primordium, biomass accumulation is controlled mainly by cell proliferation and expansion in the leaves1. However, the ...

Analysis of Cell Suspensions Isolated from Solid Tissues by Spectral Flow Cytometry

スペクトラルフローサイトメトリーにより固形組織から単離された細胞懸濁液の分析

Flow cytometry has been used for the past 40 years to define and analyze the phenotype of lymphoid and other hematopoietic cells. Initially restricted to ...

Magnetic-Activated Cell Sorting Strategies to Isolate and Purify Synovial Fluid-Derived Mesenchymal Stem Cells from a Rabbit Model

磁気活性化細胞を分離し、滑膜液由来間葉系幹細胞が家兎モデルからの浄化戦略を並べ替え

Mesenchymal stem cells (MSCs) are the main cell source for cell-based therapy. MSCs from articular cavity synovial fluid could potentially be used for ...

Single Cell Micro-aspiration as an Alternative Strategy to Fluorescence-activated Cell Sorting for Giant Virus Mixture Separation

巨大ウイルス混合物分離のための蛍光活性化細胞選別の代替戦略としての単一細胞マイクロ吸引

During the amoeba co-culture process, more than one virus may be isolated in a single well. We previously solved this issue by end point dilution and/or ...

Fluorescence-Activated Cell Sorting for the Isolation of Scleractinian Cell Populations

スクレラクチニアン細胞集団の分離のための蛍光活性化細胞選別

Coral reefs are under threat due to anthropogenic stressors. The biological response of coral to these stressors may occur at a cellular level, but the ...