Name: long-term, high-resolution confocal time lapse imaging of arabidopsis cotyledon epidermis during germination
Uploaded: 2012-12-31T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination Video at JoVE.com

我々は、POLAR :: POLAR-EGFP構築するための時間経過プロトコルとリンPillitteriの開発を支援するためのアマンダRychelに感謝します。また、PM-rbが構築提供するためABRCに感謝しています。このプロトコルは、日本科学技術振興機構からさきがけ賞の支援により開発されました。 POLARの研究はまた、ワシントンロイヤリティ研究基金（RRF-4098）、国立科学財団（MCB-0855659）の大学によってサポートされていました。 KMPは、NSF大学院リサーチフェロー（DGE-0718124）であり、本学では、ハワードヒューズ-GBMFの研究者でもある。

1。種子消毒<ol><li> 33％の家庭用漂白剤、0.1％トリトンX-100：種子消毒液を準備します。 </li><li>所望の蛍光レポーターコンストラクト（s）と遺伝子型（S）1.7 mlチューブ、滅菌溶液1mlを適用を運ぶ場所の種。 15分間nutatorでインキュベートする。 </li><li>無菌フードでは、背後にある種子を残して、チューブから消毒液を除去するためにピペッターを使用しています。 1ミリリットル滅菌水です?...

<ol>
	<li>Sulston, J. E., Schierenberg, E., White, J. G., Thomson, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Embryonic+Cell+Lineage+of+the+Nematode+Caenorhabditis+elegans.">The Embryonic Cell Lineage of the Nematode Caenorhabditis elegans.</a> Developmental Biology. 100, 64 (1983).</li><li>Foe, V., Odell, G., Edgar, B. A., Bate, M., Martinez Arias, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3+Mitosis+and+Morphogenesis:+Point+and+Counterpoint.">Chapter 3 Mitosis and Morphogenesis: Point and Counterpoint.</a> Development of Drosophila melanogaster. , (1993).</li><li>Vincent, C. A., Carpenter, R., Coen, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Lineage+Patterns+and+Homeotic+Gene+Activity+During+Antirrhinum+Flower+Development.">Cell Lineage Patterns and Homeotic Gene Activity During Antirrhinum Flower Development.</a> Current Biology. 5, 1449 (1995).</li><li>Beemster, G. T. S., De Vusser, K., De Tavernier, E., De Bock, K., Inz&#233;, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Variation in Growth Rate between Arabidopsis Ecotypes Is Correlated with Cell Division and A-Type Cyclin-Dependent Kinase Activity. Plant Physiology. 129 (2), 854 (2002).</li><li>Grandjean, O., Vernoux, T., Laufs, P., Belcram, K., Mizukami, Y., Traas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Analysis+of+Cell+Division,+Cell+Growth,+and+Differentiation+at+the+Shoot+Apical+Meristem+in+Arabidopsis.">In Vivo Analysis of Cell Division, Cell Growth, and Differentiation at the Shoot Apical Meristem in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 16 (1), 74 (2004).</li><li>Pillitteri, L. J., Peterson, K. M., Horst, R. J., Torii, K. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Profiling+of+Stomatal+Meristemoids+Reveals+New+Component+of+Asymmetric+Cell+Division+and+Commonalities+among+Stem+Cell+Populations+in+Arabidopsis.">Molecular Profiling of Stomatal Meristemoids Reveals New Component of Asymmetric Cell Division and Commonalities among Stem Cell Populations in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 23 (9), 3260 (2011).</li><li>Abramoff, M. D., Magalhaes, P. J., Ram, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image+Processing+with+ImageJ.">Image Processing with ImageJ.</a> Biophotonics International. 11 (7), 36 (2004).</li><li>Arganda-Carreras, I., Sorzano, S. &. #. 2. 2. 5. ;. n. c. h. e. z., Marabini, C. O., Carazo, R., de Solorzano, J. M. O. r. t. i. z. -., C, J., Kybic, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consistent+and+Elastic+Registration+of+Histological+Sections+Using+Vector-Spline+Regularization.">Consistent and Elastic Registration of Histological Sections Using Vector-Spline Regularization.</a> Computer Vision Approaches to Medical Image Analysis, ser. Lecture Notes in Computer Science. 4241, 85-95 (2006).</li><li>Peterson, K. M., Rychel, A. L., Torii, K. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Out+of+the+Mouths+of+Plants:+The+Molecular+Basis+of+the+Evolution+and+Diversity+of+Stomatal+Development.">Out of the Mouths of Plants: The Molecular Basis of the Evolution and Diversity of Stomatal Development.</a> Plant Cell. 22 (2), 296 (2010).</li><li>Czymmek, K. J., Fogg, M., Powell, D. H., Sweigard, J., Park, S. -. Y., Kang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Time-lapse+Documentation+Using+Confocal+and+Multi-Photon+Microscopy+Reveals+the+Mechanisms+of+Invasion+into+the+Arabidopsis+Root+Vascular+System+by+Fusarium+oxysporum.">In vivo Time-lapse Documentation Using Confocal and Multi-Photon Microscopy Reveals the Mechanisms of Invasion into the Arabidopsis Root Vascular System by Fusarium oxysporum.</a> Fungal Genetics and Biology. 44 (10), 1011 (2007).</li><li>Campilho, A., Garcia, B., Toorn, H. V., Wijk, H. V., Campilho, A., Scheres, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-Lapse+Analysis+of+Stem-cell+Divisions+in+the+Arabidopsis+thaliana+Root+Meristem.">Time-Lapse Analysis of Stem-cell Divisions in the Arabidopsis thaliana Root Meristem.</a> Plant Journal. 48, 619 (2006).</li></ol>

このタイムラプス共焦点技術は極性および他の動的に変化するタンパク質の場合には、それらの機能を適切に理解するために重要であるシロイヌナズナの子葉の表皮の個々の細胞の蛍光標識タンパク質の発現と局在の縦断的研究を可能にします。以前は、持続時間タイムラプスイメージングはシロイヌナズナの根真菌感染症11、分裂組織の成長5,12を調べるために...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 注釈 </td></tr><tr><td>バクト寒天</td><td> BD </td><td> 214010 </td><td></td></tr><tr><td>ワンチャンバースライド</td><td>ヌンク（サーモサイエンティフィック） </td><td> 15536​​0 </td><td>または二室（155379） </td></tr><tr><td>レーザースキャニング共焦点顕微鏡</td><td>ツァイス</td><td> LSM700 </td><td>禅2009ソフトウェア</td></tr><tr><td> 20倍の対物レンズ</td><td>ツァイス</td><td> 420650-9901 </td><td> NAが0.8、プラン·アポクロマート</td></tr><tr><td>解剖顕微鏡</td><td>ベンツ（ナショナル） </td><td> 431TBL </td><td>下から照らす</td></tr><tr><td> ＃5鉗子、生物学の先端</td><td> Roboz手術器具</td><td> RS-4978 </td><td>非常に細かいヒント重要である</td></tr></tbody></table>

long-term, high-resolution confocal time lapse imaging of arabidopsis cotyledon epidermis during germination

発達シーケンス全体細胞挙動の in vivo動態のイメージングは組織パターン形成のメカニズムを理解するための強力なテクニックです。動物の発生時には、鍵の細胞増殖とパターニングのイベントは非常に迅速に行われます。例えば、幼虫の体の計画に必要な線虫（Caenorhabditis elegans）のすべての細胞分裂が7分裂サイクル1で、受精後6時間以内に完了され、 ショウジョウバエの胚発生の16以上の有糸分裂は、24時間2未満で発生します。これとは対照的に、植物の開発時に細胞分裂は、通常、3,4,5日のオーダーで、遅いです。これはユニークな挑戦と植物器官形成時の細胞分裂と分化のイベントの動的挙動を文書化するための長期的ライブイメージングの必要性を課している。 シロイヌナズナ表皮が植物にシグナリング、細胞の運命、そして開発を調査するための優れたモデル系である。子葉では、この組織は、空気と均等に分散気孔が点在して耐水性舗装細胞、開いたり閉じたり、ガス交換と水の損失を制御することをバルブで構成されています。これらの気孔の適切な間隔は、それらの機能に重要であり、その開発は、非対称分裂と組織表皮（ 図1）を生成する細胞分化段階の順序に従います。 このプロトコルは、開発の数日間にわたって表皮内の細胞やタンパク質の観察を可能にします。この時間枠は、幹細​​胞の分裂と気孔と表皮舗装細胞を含む表皮細胞の分化の正確なドキュメンテーションを可能にします。蛍光タンパク質は細胞分裂と分化の過程で、そのダイナミクスを評価するために、目的のタンパク質に融合させることができる。この手法は、番目の気孔系統細胞の増殖段階で、私たちは新規タンパク質、POLAR 6の局在を理解することができますそれが細胞内で発現されている電子シロイヌナズナ子葉表皮は、除算が発生する直前に細胞表層の特性領域に非対称分裂のイベントや動きを先行。画像が登録され、合理化されたビデオは簡単に彼らが時間の経過とともに変化するような動的なタンパク質の局在および細胞型を可視化するために、パブリックドメインソフトウェアを用いて製造することができる。

<html>このメソッドを使用して収集された有益な時間ポイントのセットは、 図3に示します。 30分の時間スケールでの細胞膜はRFP（PM-RB）で標識され、GFPは、その天然のプロモーター下POLARタンパク質に融合されている（POLAR :: POLAR-GFP）6、我々は、タンパク質の局在の変化とともに細胞分裂を参照してください。を前に付けます。気孔の系譜フォーム幹細胞様さらに?...

Watch this Scientific Journal Video about Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination Video at JoVE.com

Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination Video (Video) | JoVE

我々は、気孔の分化を文書化、開発の数日間にわたって表皮の共焦点イメージングのための植物の子葉を固定化するためにチャンバースライドやメディアを使用してプロトコルを記述します。フルオロフォアタグ付きタンパク質は、細胞分裂や細胞型分化の過程でそれらの可能な役割の理解を深め、表現と細胞内局在によって動的に追跡することができます。

の長期、高分解能共焦点タイムラプスイメージング<em&gt;シロイヌナズナ子葉</em発芽過程&gt;表皮

Imaging in vivo dynamics of cellular behavior throughout a developmental sequence can be a powerful technique for understanding the mechanics of tissue ...

Research

JoVE Journal

Biology

Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy Video (Video) | JoVE

広視野顕微鏡を用いて長期的なイメージング哺乳類細胞

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos Video (Video) | JoVE

ライブゼブラフィッシュの胚における二光子軸索切断とタイムラプス共焦点イメージング

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection Video (Video) | JoVE

siRNAトランスフェクション後の有糸分裂のタイムラプスイメージング

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Visualization of Craniofacial Development in the sox10: kaede Transgenic Zebrafish Line Using Time-lapse Confocal Microscopy

Visualization of Craniofacial Development in the sox10: kaede Transgenic Zebrafish Line Using Time-lapse Confocal Microscopy Video (Video) | JoVE

SOX10中の顔面の開発の可視化：楓トランスジェニックゼブラフィッシュラインタイムラプス共焦点顕微鏡を用いて

Vertebrate palatogenesis is a highly choreographed and complex developmental process, which involves migration of cranial neural crest (CNC) cells, ...

Using Flatbed Scanners to Collect High-resolution Time-lapsed Images of the Arabidopsis Root Gravitropic Response

Using Flatbed Scanners to Collect High-resolution Time-lapsed Images of the Arabidopsis Root Gravitropic Response Video (Video) | JoVE

シロイヌナズナ根重力屈性反応の高分解能時間経過画像を収集するためにフラットベッドスキャナを使用して

Research efforts in biology increasingly require use of methodologies that enable high-volume collection of high-resolution data. A challenge laboratories ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells Video (Video) | JoVE

リビングヒト臍帯静脈内皮細胞における高解像度タイムラプスイメージングと微小管ダイナミクスの自動解析

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

Real-time In Vivo Recording of Arabidopsis Calcium Signals During Insect Feeding Using a Fluorescent Biosensor

Real-time In Vivo Recording of Arabidopsis Calcium Signals During Insect Feeding Using a Fluorescent Biosensor Video (Video) | JoVE

リアルタイム体内シロイヌナズナカルシウム信号の間に記録して蛍光バイオ センサーを用いた昆虫の餌

Calcium ions are predicted to be key signaling entities during biotic interactions, with calcium signaling forming an established part of the plant ...

Combining Mitotic Cell Synchronization and High Resolution Confocal Microscopy to Study the Role of Multifunctional Cell Cycle Proteins During Mitosis

Combining Mitotic Cell Synchronization and High Resolution Confocal Microscopy to Study the Role of Multifunctional Cell Cycle Proteins During Mitosis Video (Video) | JoVE

有糸分裂の多機能の細胞周期蛋白質の役割を研究する有糸分裂細胞同期と高分解能共焦点顕微鏡を組み合わせた

Study of the various regulatory events of the cell cycle in a phase-dependent manner provides a clear understanding about cell growth and division. The ...

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging Video (Video) | JoVE

シロイヌナズナの取付汎用性の高い方法は、生体のタイムラプス イメージングの葉します。

The plant immune response associated with a genome-wide transcriptional reprogramming is initiated at the site of infection. Thus, the immune response is ...

Specific Labeling of Mitochondrial Nucleoids for Time-lapse Structured Illumination Microscopy

Specific Labeling of Mitochondrial Nucleoids for Time-lapse Structured Illumination Microscopy Video (Video) | JoVE

タイムラプス構造照明顕微鏡のためのミトコンドリアヌクレオイドの特異的標識

Mitochondrial nucleoids are compact particles formed by mitochondrial DNA molecules coated with proteins. Mitochondrial DNA encodes tRNAs, rRNAs, and ...