Name: long-term, high-resolution confocal time lapse imaging of arabidopsis cotyledon epidermis during germination
Uploaded: 2012-12-31T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination Video at JoVE.com

우리는 극지 :: 극지-eGFP 건설에 대한 시간 경과 프로토콜과 린 Pillitteri 개발에 도움을 아만다 Rychel 감사드립니다. 우리는 또한 PM-RB 구조로 제공 ABRC에 감사하고 있습니다. 이 프로토콜은 일본 과학 기술 청에서 프레스토 수상의 지원을 통해 개발되었습니다. 극지에 관한 연구는 워싱턴 왕실 연구 기금 (RRF-4098)와 국립 과학 재단 (National Science Foundation) (MCB-0855659)의 대학에 의해 지원되었다. 키 관리 프로토콜은 NSF 대학원 연구원 (DGE-0718124)이며, KUT는 HHMI - GBMF 수사관입니다.

1. 종자 살균 <ol><li> 33 % 가정용 표백제, 0.1 % 트리톤 X-100 : 종자 살균 솔루션을 준비합니다. </li><li> 원하는 형광 기자 구조 (들)과 유전자형 (들) 1.7 ML 튜브 및 살균 솔루션 1 ML을 적용 들고 장소 종자. 15 분에 nutator에 품다. </li><li> 멸균 후드에 뒤에 종자를두고, 튜브에서 살균 솔루션을 제거 할 pipettor를 사용합니다. 한 ML 멸균 물을 씻어. 네 번 반복합니다. </li><li> 이일 이상 4 ° C에서 알을 품다. </l...

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	<li>Sulston, J. E., Schierenberg, E., White, J. G., Thomson, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Embryonic+Cell+Lineage+of+the+Nematode+Caenorhabditis+elegans.">The Embryonic Cell Lineage of the Nematode Caenorhabditis elegans.</a> Developmental Biology. 100, 64 (1983).</li><li>Foe, V., Odell, G., Edgar, B. A., Bate, M., Martinez Arias, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3+Mitosis+and+Morphogenesis:+Point+and+Counterpoint.">Chapter 3 Mitosis and Morphogenesis: Point and Counterpoint.</a> Development of Drosophila melanogaster. , (1993).</li><li>Vincent, C. A., Carpenter, R., Coen, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Lineage+Patterns+and+Homeotic+Gene+Activity+During+Antirrhinum+Flower+Development.">Cell Lineage Patterns and Homeotic Gene Activity During Antirrhinum Flower Development.</a> Current Biology. 5, 1449 (1995).</li><li>Beemster, G. T. S., De Vusser, K., De Tavernier, E., De Bock, K., Inz&#233;, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Variation in Growth Rate between Arabidopsis Ecotypes Is Correlated with Cell Division and A-Type Cyclin-Dependent Kinase Activity. Plant Physiology. 129 (2), 854 (2002).</li><li>Grandjean, O., Vernoux, T., Laufs, P., Belcram, K., Mizukami, Y., Traas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Analysis+of+Cell+Division,+Cell+Growth,+and+Differentiation+at+the+Shoot+Apical+Meristem+in+Arabidopsis.">In Vivo Analysis of Cell Division, Cell Growth, and Differentiation at the Shoot Apical Meristem in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 16 (1), 74 (2004).</li><li>Pillitteri, L. J., Peterson, K. M., Horst, R. J., Torii, K. 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O. r. t. i. z. -., C, J., Kybic, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consistent+and+Elastic+Registration+of+Histological+Sections+Using+Vector-Spline+Regularization.">Consistent and Elastic Registration of Histological Sections Using Vector-Spline Regularization.</a> Computer Vision Approaches to Medical Image Analysis, ser. Lecture Notes in Computer Science. 4241, 85-95 (2006).</li><li>Peterson, K. M., Rychel, A. L., Torii, K. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Out+of+the+Mouths+of+Plants:+The+Molecular+Basis+of+the+Evolution+and+Diversity+of+Stomatal+Development.">Out of the Mouths of Plants: The Molecular Basis of the Evolution and Diversity of Stomatal Development.</a> Plant Cell. 22 (2), 296 (2010).</li><li>Czymmek, K. J., Fogg, M., Powell, D. H., Sweigard, J., Park, S. -. 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V., Campilho, A., Scheres, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-Lapse+Analysis+of+Stem-cell+Divisions+in+the+Arabidopsis+thaliana+Root+Meristem.">Time-Lapse Analysis of Stem-cell Divisions in the Arabidopsis thaliana Root Meristem.</a> Plant Journal. 48, 619 (2006).</li></ol>

이 시간 경과 공 촛점 기술은 휘황 태그 단백질 표현과 극 및 기타 동적으로 변화하는 단백질의 경우 자신의 기능의 올바른 이해에 매우 중요합니다 Arabidopsis 떡잎의 표피의 개별 셀의 국산화의 길이 방향 연구를 할 수 있습니다. 이전 지속 시간 경과 영상은 Arabidopsis 루트 곰팡이 감염 11 분열 조직의 성장 5,12을 검사하는 데 사용하지만, 자엽의 표피를 추가하면이 기?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 </td></tr><tr><td> Bacto 한천 </td><td> BD </td><td> 214010 </td><td></td></tr><tr><td> 한 챔버 슬라이드 </td><td> Nunc (열 과학) </td><td> 15536​​0 </td><td> 또는 두 챔버 (155379) </td></tr><tr><td> 레이저 스캐닝 공 촛점 현미경 </td><td> Zeiss </td><td> LSM700 </td><td> 선 (禅) 2009 소프트웨어 </td></tr><tr><td> 20x 목적 렌즈 </td><td> Zeiss </td><td> 420650-9901 </td><td> NA 0.8 계획 - 고차 색지움 </td></tr><tr><td> 현미경을 해부 </td><td> 벤츠 (국가) </td><td> 431TBL </td><td> 아래에서 켜집니다 </td></tr><tr><td> # 5 포셉, 생물학 팁 </td><td> Roboz 외과 악기 </td><td> RS-4978 </td><td> 매우 좋은 팁중요합니다 </td></tr></tbody></table>

long-term, high-resolution confocal time lapse imaging of arabidopsis cotyledon epidermis during germination

발달 순서를 통해 세포 행동의 생체 역학의 이미징은 조직 패턴의 메커니즘을 이해하기위한 강력한 기술이 될 수 있습니다. 동물의 개발 과정, 주요 세포 증식 및 패터닝 이벤트는 매우 빠르게 발생합니다. 예를 들어, Caenorhabditis의 elegans에서 애벌레의 몸 계획에 필요한 모든 세포 분열은 7 mitotic주기 1, 수정을 한 후 6 시간 이내에 완료되며, Drosophila의 embryogenesis의 16 살 이상 mitoses 미만이 24 시간 2에 발생합니다. 반면, 공장 개발하는 동안 세포 분열은 일반적으로 하루 3,4,5의 순서에 속도가 느린 있습니다. 이 독특한 도전과 세포 분열 및 식물 organogenesis 동안 차별화 이벤트의 동적 동작을 문서화 장기 라이브 영상에 대한 필요성을 부과. Arabidopsis 표피는 조사 신호, 세포의 운명, 그리고 식물의 개발을위한 훌륭한 모델 시스템입니다. 떡잎에서이 조직이 구성되어 공기와 균일하게 분포 stomata 사이 사이 방수 포장 세포, 밸브을 열고 가스 교환 및 물 손실을 제어 할 가깝습니다. 이 stomata의 적절한 간격은 기능에 중요합니다, 그들의 개발은 비대칭 부서 및 조직 표피 (그림 1) 생산하는 세포 분화 단계의 순서를 따릅니다. 이 프로토콜은 개발 며칠 동안 세포와 표피의 단백질의 관찰을 할 수 있습니다. 이 시간 프레임은 줄기 세포 부서 및 stomata와 표피 포장 세포 등의 표피 세포의 분화의 정확한 문서를 수 있습니다. 형광 단백질은 세포 분열과 분화 과정 중에 역학을 평가하기 위해 관심 단백질에 융합 할 수 있습니다. 이 기술은 일에 stomatal - 계보 (Lineage) 세포의 확산 단계에서, 우리는 소설 단백질, 극지 6 현지화를 이해 할 수 있습니다이 비대칭 분열 이벤트 및 부서가 발생 직전 세포 피질의 특성 영역에 움직임을 이전 셀에 표시됩니다 전자 Arabidopsis의 떡잎의 표피. 이미지 등록 및 능률적 인 동영상은 쉽게 시간이 지남에 따라 변경으로 동적 단백질 지역화와 세포 유형을 시각화하는 공개 도메인 소프트웨어를 사용하여 생성 할 수 있습니다.

<html> 이 방법으로 수집 된 정보를 시간 점의 집합은 그림 3에 표시됩니다. 셀 멤브레인은 RFP (PM-RB)와 GFP는 30 분 시간 척도에서 (극 :: 극지-GFP)을 기본 발기인에 따라 극 단백질에 6을 융합하고 있습니다으로 분류됩니다, 우리는 단백질 현지화의 변화와 함께 세포 분열을 참조하십시오 을 이전. 비대칭 셀 stomatal 계보 (Lineage) 형태의 부서 줄기 세포과 같은 추가 비대칭 분?...

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Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination Video (Video) | JoVE

우리는 stomatal 차별화를 문서화, 개발 며칠 동안 표피의 공 촛점 이미징을위한 식물 cotyledons를 고정하기 위해 챔버 슬라이드 및 미디어를 사용하여 프로토콜을 설명합니다. 형광 태그 단백질은 세포 분열과 세포 형 차별화 중에 가능한 역할의 이해를 증가 표현과 subcellular 지방화에 의해 동적으로 추적 할 수 있습니다.

의 장기, 고해상도 공 촛점 시간 경과 영상<em&gt; Arabidopsis 떡잎</em발아시&gt; 표피

Imaging in vivo dynamics of cellular behavior throughout a developmental sequence can be a powerful technique for understanding the mechanics of tissue ...

Research

JoVE Journal

Biology

Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy Video (Video) | JoVE

와이드 필드 현미경을 사용하여 장기 이미징 포유 동물 세포

연구

생물학

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos Video (Video) | JoVE

라이브 zebrafish의 배아에서 두 광자의 axotomy하고 시간이 경과 공촛점 영상

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

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siRNA Transfection 후의 유사 분열의 시간 저속 영상

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Visualization of Craniofacial Development in the sox10: kaede Transgenic Zebrafish Line Using Time-lapse Confocal Microscopy

Visualization of Craniofacial Development in the sox10: kaede Transgenic Zebrafish Line Using Time-lapse Confocal Microscopy Video (Video) | JoVE

sox10의 두개 안면 개발의 시각화 : 단풍 나무 형질 전환 제브라 피쉬의 선은 시간 경과 공 초점 현미경을 사용하여

Vertebrate palatogenesis is a highly choreographed and complex developmental process, which involves migration of cranial neural crest (CNC) cells, ...

Using Flatbed Scanners to Collect High-resolution Time-lapsed Images of the Arabidopsis Root Gravitropic Response

Using Flatbed Scanners to Collect High-resolution Time-lapsed Images of the Arabidopsis Root Gravitropic Response Video (Video) | JoVE

애기 장대 루트 Gravitropic 응답의 고해상도 시간 경과 이미지를 수집하는 평판 스캐너를 사용하여

Research efforts in biology increasingly require use of methodologies that enable high-volume collection of high-resolution data. A challenge laboratories ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells Video (Video) | JoVE

고해상도 시간 경과 이미징 및 생활 인간 제대 정맥 내피 세포의 미세 소관 역학의 자동 분석

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

Real-time In Vivo Recording of Arabidopsis Calcium Signals During Insect Feeding Using a Fluorescent Biosensor

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실시간 Vivo에서 녹음 애기 칼슘 신호의 곤충 먹이 형광 바이오 센서를 사용 하 여 중

Calcium ions are predicted to be key signaling entities during biotic interactions, with calcium signaling forming an established part of the plant ...

Combining Mitotic Cell Synchronization and High Resolution Confocal Microscopy to Study the Role of Multifunctional Cell Cycle Proteins During Mitosis

Combining Mitotic Cell Synchronization and High Resolution Confocal Microscopy to Study the Role of Multifunctional Cell Cycle Proteins During Mitosis Video (Video) | JoVE

유사 분열 동안 다기능 세포 주기 단백질의 역할을 연구 하기 Mitotic 세포 동기화와 고해상도 Confocal 현미경 검사 법

Study of the various regulatory events of the cell cycle in a phase-dependent manner provides a clear understanding about cell growth and division. The ...

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging Video (Video) | JoVE

Intravital 시간 경과 영상에 대 한 애기 를 장착 하는 다양 한 방법을 나뭇잎합니다

The plant immune response associated with a genome-wide transcriptional reprogramming is initiated at the site of infection. Thus, the immune response is ...

Specific Labeling of Mitochondrial Nucleoids for Time-lapse Structured Illumination Microscopy

Specific Labeling of Mitochondrial Nucleoids for Time-lapse Structured Illumination Microscopy Video (Video) | JoVE

시간 경과 구조화 조명 현미경 검사법에 대한 미토콘드리아 핵의 특정 라벨링

Mitochondrial nucleoids are compact particles formed by mitochondrial DNA molecules coated with proteins. Mitochondrial DNA encodes tRNAs, rRNAs, and ...