Name: a molecular readout of long-term olfactory adaptation in c. elegans
Uploaded: 2012-12-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans at JoVE.com

Biz bu yazıda dikkatli okumak için Scott Hamilton ve O&#39;Halloran laboratuar üyeleri teşekkür etmek istiyorum. Biz de mükemmel öneriler ve anlayışlı yorum için anonim yorumcusu ederim.

1. GFP İnşaat EGL-4 İfade Hayvanlar Etiketli <ol><li> ODR-3 gen (doğrudan yukan başlama kodonunun kullanımı 2678 bp) promotörü altında translasyonel füzyon GFP :: EGL-4 klonlama: (p) ODR-3 :: GFP :: EGL-4. ODR-3 promotör sürücüler amphid nöron çiftleri ifade: AWA; AWB, AWC ve zayıf AKY. </li><li> (P) ofm-1: plazmid (p) ODR-3 :: GFP :: 50 yabani-tip (N2) hayvanların içine EGL-4 standart germ-line transformasyon teknikleri 8 kullanılarak ko-enj...

<ol>
	<li>Colbert, H. A., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant-specific+adaptation+pathways+generate+olfactory+plasticity+in+C.+elegans.">Odorant-specific adaptation pathways generate olfactory plasticity in C. elegans.</a> Neuron. 14 (4), 803 (1995).</li><li>Colbert, H. A., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+signals+modulate+olfactory+acuity,+discrimination,+and+memory+in+Caenorhabditis+elegans.">Environmental signals modulate olfactory acuity, discrimination, and memory in Caenorhabditis elegans.</a> Learning and Memory. 4 (2), 179 (1997).</li><li>Bargmann, C. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant-selective+genes+and+neurons+mediate+olfaction+in+C.+elegans.">Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans.</a> Neuron. 74 (3), 515 (1993).</li><li>L'Etoile, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cyclic+GMP-dependent+protein+kinase+EGL-4+regulates+olfactory+adaptation+in+C.+elegans.">The cyclic GMP-dependent protein kinase EGL-4 regulates olfactory adaptation in C. elegans.</a> Neuron. 36, 1079-10 (2002).</li><li>Lee, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+entry+of+a+cGMP-dependent+kinase+converts+transient+into+long-lasting+olfactory+adaptation.">Nuclear entry of a cGMP-dependent kinase converts transient into long-lasting olfactory adaptation.</a> PNAS. 107 (13), 6016 (2010).</li><li>O'Halloran, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulators+of+AWC-mediated+olfactory+plasticity+in+Caenorhabditis+elegans.">Regulators of AWC-mediated olfactory plasticity in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS Genetics. 5 (12), e1000761 (2009).</li><li>O'Halloran, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+cGMP+levels+affect+the+localization+of+EGL-4+in+AWC+in+Caenorhabditis+elegans.">Changes in cGMP levels affect the localization of EGL-4 in AWC in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS ONE. 7 (2), e31614 (2012).</li><li>Mello, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+in+C.elegans:+extrachromosomal+maintenance+and+integration+of+transforming+sequences.">Efficient gene transfer in C.elegans: extrachromosomal maintenance and integration of transforming sequences.</a> EMBO Journal. 10, 3959-39 (1991).</li><li>Miyabayashi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+and+function+of+members+of+a+divergent+nuclear+receptor+family+in+Caenorhabditis+elegans.">Expression and function of members of a divergent nuclear receptor family in Caenorhabditis elegans.</a> Dev. Biol. 215, 314 (1999).</li><li>L'Etoile, N. D., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfaction+and+odor+discrimination+are+mediated+by+the+C.+elegans+guanylyl+cyclase+ODR-1.">Olfaction and odor discrimination are mediated by the C. elegans guanylyl cyclase ODR-1.</a> Neuron. 25 (3), 575 (2000).</li><li>Mello, C., Fire, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+transformation.">DNA transformation.</a> Methods Cell Biol. 48, 451 (1995).</li><li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+C.+elegans.">Maintenance of C. elegans.</a> Wormbook. , (2006).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77 (1), 71 (1974).</li><li>Kauffman, A., Parsons, L., Stein, G., Wills, A., Kaletsky, R., Murphy, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+Positive+Butanone+Learning,+Short-term,+and+Long-term+Associative+Memory+Assays.">C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays.</a> J. Vis. Exp. (49), e2490 (2011).</li><li>Berkowitz, L. A., Hamamichi, S., Knight, A. L., Harrington, A. J., Caldwell, G. A., Caldwell, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+a+C.+elegans+Dopamine+Neuron+Degeneration+Assay+for+the+Validation+of+Potential+Parkinson's+Disease+Genes.">Application of a C. elegans Dopamine Neuron Degeneration Assay for the Validation of Potential Parkinson's Disease Genes.</a> J. Vis. Exp. (17), e835 (2008).</li><li>Pittenger, C., Kandel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+search+of+general+mechanisms+for+long-lasting+plasticity:+Aplysia+and+the+hippocampus.">In search of general mechanisms for long-lasting plasticity: Aplysia and the hippocampus.</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 358 (1432), 757 (2003).</li></ol>

Bir GFP etiketli EGL-4 molekülünün koku indüklenen nükleer girdisinin burada açıklanan C. olfaktör uyum sağlam bir moleküler okunmasını sağlar elegans. Koku indüklenen nükleer translokasyon testleri basittir ve hazırlık süresi sadece birkaç gün gerektirir. Bu deneyleri için yapılmış olduğu pyIs500 hayvan, AWC nöron hem de GFP-etiketli EGL-4 proteini ifade aydınlatan bir işaretleyici ifade eder. Böylece, nöron bu sınıf ile çalışan hiçbir deneyimi az olan bir ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Bacto Agar </td><td> Difco </td><td> DF0140-07-4 </td><td> NGM plakalar </td></tr><tr><td> Sodyum klorür </td><td> Fisher Kimyasal </td><td> S671-10 </td><td> NGM plakalar </td></tr><tr><td> Bacto Peptonlu </td><td> Difco </td><td> DF0118-07-2 </td><td> NGM plakalar </td></tr><tr><td> Potasyum fosfat dibazik </td><td> Fisher Kimyasal </td><td> S375-500 </td><td> S-Bazal tampon ve NGM plakalar </td></tr><tr><td> Potasyum Fosfat mono </td><td> Fisher Kimyasal </td><td> P285-500 </td><td> S-Bazal tampon ve NGM plakalar </td></tr><tr><td> Kimwipes - Küçük </td><td> Kimberly-Clark </td><td> LS2770 </td><td></td></tr><tr><td> Etanol% 100 </td><td> Altın Kalkan KimyasalA.Ş. </td><td> 43196-115 </td><td> kemotaksisi deneyleri için sulandırma kokuları </td></tr><tr><td> Kalsiyum Klorür </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C8106-500G </td><td> NGM plakalar </td></tr><tr><td> Magnezyum Sülfat </td><td> MP Biomedicals </td><td> 150136-500G </td><td> NGM plakalar </td></tr><tr><td> Sodyum Azid 99% </td><td> Fisher Scientific </td><td> ICN10289180 </td><td> Anestetik </td></tr><tr><td> Agaroz - ultrapure </td><td> Invitrogen </td><td> 16500-500 </td><td> Agaroz pedleri </td></tr><tr><td> Benzaldehit </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> B1334-100G </td><td> AWC koku </td></tr><tr><td> Bütanon, ACS Sınıf </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 360473-500ML </td><td> AWC koku </td></tr><tr><td> Mikrosantrifuj Tüpler - 1.5 ml Renkli </td><td> Denville </td><td> LS8147 </td><td></td></tr><tr><td> Pasteur Pipet Tek Cam 5-3/4 &quot; </td><td> Fisher Scientific </td&gt; <td> 13-678-20B </td><td></td></tr><tr><td> Stratalinker </td><td> Stratagene </td><td> Stratalinker 2400 </td><td> UV entegrasyon </td></tr><tr><td> Filtre vakum şişesi - 500 ml </td><td> Nalgene </td><td> 09-740-25B </td><td></td></tr></tbody></table>

a molecular readout of long-term olfactory adaptation in c. elegans

Sürekli stimülasyon sırasında çoğu duyusal nöronlar sinyal onların hassasiyetini azaltarak tepki adapte olacaktır. Adaptasyon yanıtı şekli dikkatini yardımcı olur ve aynı zamanda aşırı uyarılması hücreleri korur. C. koku devre içerisinde İntibak elegans ilk Colbert ve Bargmann 1,2 tarafından tanımlanmıştır. Burada, yazarlar Amphid Kanat hücreleri tip C (AWC) duyusal nöronlar tarafından algılanan uçucu kokuları uyum yeteneklerini mutantlar kusurlu yalıtmak için genetik bir ekran tasarımı için kullanılan koku adaptasyon paradigma, parametreleri tanımlanır. Zaman yabani-tip C. elegans hayvanlar da koku onların yanıt uyum 30 dakika için çekici bir AWC-algılanan koku 3 maruz kalır ve daha sonra ~ 1 saat boyunca bir kemotaksis davranış tahlilinde adapte koku göz ardı eder. Zaman yabani-tip C. elegans hayvanlar daha sonra ac adapte koku yok sayacaktır ~ 1 saat için cazip bir AWC-algılanan koku maruz~ 3 saat hemotaxis davranış testi. C. koku adaptasyon Bu iki faz elegans kısa vadeli olfaktör adaptasyon (30 dak koku maruz kaldıktan sonra tetiklenen), ve uzun vadeli olfaktör adaptasyon (60 dk koku maruziyet sonrası uyarılan) olarak tanımlanmıştır. Daha sonra L&#39;Etoile ark. Çalışmak, 4 AWC nöronlarda kısa vadeli ve uzun vadeli olfaktör adaptasyon hem de gereklidir EGL-4 denilen bir protein kinaz G (PKG) ortaya çıkardı. EGL-4 protein uzun süreli koku uyum yanıtı ancak AWC 4 kısa vadeli olfaktör uyum yanıtı için vazgeçilebilir için gerekli olan bir nükleer lokalizasyon dizisi içerir. Yeşil floresan protein ile etiketleme EGL-4 olarak, bu uzun süreli koku pozlama sırasında AWC yılında EGL-4 lokalizasyonu görselleştirmek için mümkün oldu. Bu tamamen işlevsel kullanarak biz AWC 5 uzun süreli koku adaptasyon moleküler okuma geliştirmek mümkün olmuştur EGL-4 (GFP :: EGL-4) molekülü GFP etiketli. Bu m Kullanmaolfaktör adaptasyon olecular okuması biz AWC 6,7 olarak GFP kusurlu hücre içi lokalizasyonu desenleri :: EGL-4 sergilerler mutant hayvanlar tanımlamak için hem ileri ve geri genetik ekranlar gerçekleştirmek mümkün olmuştur. Burada tarif: GFP 1) İnşaat :: EGL-4 eksprese hayvanlar; 2) uzun süreli koku indüklenen nükleer translokasyon deneyleri için hayvan yetiştiriciliği için protokol ve uzun vadeli koku indüklenen 3) puanlama Nükleer translokasyon olay ve nükleer GFP :: EGL-4 devlet kurtarma (re-sensitizasyon).

AWC önce ve uzun süreli koku maruz kaldıktan sonra GFP :: EGL-4 inç lokalizasyonu model bir örneği, Şekil 2&#39;de gösterilmiştir. Uzun süreli koku pozlama, GFP :: EGL-4 öncesinde AWC (Şekil 2B) sitoplazmada lokalize edilir ve 80 dakika koku maruz GFP sonra :: EGL-4 AWC (Şekil 2B) çekirdeğinde lokalize edilmektedir. Davranışsal düzeyde, sitozolik GFP :: EGL-4 AWC içinde olan hayvanların koku nokta kaynak (- kemotaksis endeksi 3 1&#39;e yak...

Watch this Scientific Journal Video about A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans at JoVE.com

A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans

Burada uzun süreli koku adaptasyon moleküler okuma tarif<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt;. Protein Kinaz G, EGL-4, AWC denilen bir çift primer duyusal sinir hücresi içinde kararlı uyum yanıtı için gereklidir. Sitoplazmada gelen AWC çekirdeği uzun süreli koku maruz EGL-4 translocates sırasında.

Uzun vadeli Olfaktör İntibak A Moleküler Saati<em&gt; C. elegans</em

During sustained stimulation most sensory neurons will adapt their response by decreasing their sensitivity to the signal. The adaptation response helps ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans

C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays

C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays

C. elegans Pozitif bütanon Öğrenme, Kısa vadeli ve uzun vadeli ilişkilendirilebilir Bellek Tahliller

The memory of experiences and learned information is critical for organisms to make choices that aid their survival. C. elegans navigates its environment ...

In vivo Laser Axotomy in C. elegans

In vivo Laser Axotomy in C. elegans

C in vivo Lazer Axotomy elegans

Neurons communicate with other cells via axons and dendrites, slender membrane extensions that contain pre- or post-synaptic specializations. If a neuron ...

Automated Quantification of Synaptic Fluorescence in C. elegans

Automated Quantification of Synaptic Fluorescence in C. elegans

Içinde Synaptic florasan Otomatik Sayısallaştırma<em&gt; C. elegans</em

Synapse strength refers to the amplitude of postsynaptic responses to presynaptic neurotransmitter release events, and has a major impact on overall ...

In vivo Neuronal Calcium Imaging in C. elegans

In vivo Neuronal Calcium Imaging in C. elegans

C. vivo Nöronal Kalsiyum Imaging&#39;de elegans

The nematode worm C. elegans is an ideal model organism  for relatively simple, low cost neuronal imaging in vivo. Its small transparent body and simple, ...

Long-term Behavioral Tracking of Freely Swimming Weakly Electric Fish

Serbestçe Yüzme Zayıf Elektrik Balık Uzun vadeli Davranış Takip

Long-term behavioral tracking can capture and quantify natural animal behaviors, including those occurring infrequently. Behaviors such as exploration and ...

Long-term Time Lapse Imaging of Mouse Cochlear Explants

Fare Koklear Eksplantlarından uzun vadeli Time Lapse Görüntüleme

Here we present a method for long-term time-lapse imaging of live embryonic mouse cochlear explants. The developmental program responsible for building ...

Agarose Microchambers for Long-term Calcium Imaging of Caenorhabditis elegans

Agarose Microchambers for Long-term Calcium Imaging of Caenorhabditis elegans

Uzun süreli Kalsiyum Görüntüleme için Agaroz microchambers<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Behavior is controlled by the nervous system. Calcium imaging is a straightforward method in the transparent nematode Caenorhabditis elegans to measure ...

Automated Analysis of C. elegans Swim Behavior Using CeleST Software

Automated Analysis of C. elegans Swim Behavior Using CeleST Software

ve Otomatik Analizi<em&gt; C. elegans</emCelest Yazılım Kullanma&gt; Deniz Davranışı

Dissecting the neuronal and neuromuscular circuits that regulate behavior remains a major challenge in biology. The nematode Caenorhabditis elegans has ...

Quadruple Immunostaining of the Olfactory Bulb for Visualization of Olfactory Sensory Axon Molecular Identity Codes

Koku Meşfatının Olfaktör Duyusal Akson Moleküler Kimlik Kodlarının Görselleştirilmesi İçin Dörtlü İmmün Sulanması

The mouse olfactory system is often used to study mechanisms of neural circuit formation&#12288;because of its simple anatomical structure. An Olfactory ...

Using an Adapted Microfluidic Olfactory Chip for the Imaging of Neuronal Activity in Response to Pheromones in Male C. Elegans Head Neurons

Using an Adapted Microfluidic Olfactory Chip for the Imaging of Neuronal Activity in Response to Pheromones in Male C. Elegans Head Neurons

Yanıt olarak erkek C. Elegans baş nöronlar Feromonlar nöronal aktivite görüntüleme için adapte mikrosıvısal koku kozu kullanımı

The use of calcium indicators has greatly enhanced our understanding of neural dynamics and regulation. The nematode Caenorhabditis elegans, with its ...