Name: trans-vivo delayed type hypersensitivity assay for antigen specific regulation
Uploaded: 2013-05-02T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Trans-vivo Delayed Type Hypersensitivity Assay for Antigen Specific Regulation at JoVE.com

فإن الكتاب أود أن أنوه مساهمات AM VanBuskirk في تطوير فهمنا للاستجابة DTH التنظيم في متلقى. وأيد هذا العمل منح المعاهد الوطنية للصحة PO1AI084853 وR01AI066219-06، والتي ترعاها الاتحاد الأوروبي دراسة واحدة.

1. إعداد الخلايا اللمفاوية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الدم إلى ACD (حمض سترات الدكستروز) أنابيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل PBMC من الدم المحيطي الإنسان الطازجة باستخدام فصل الخلايا الليمفاوية متوسطة وفقا للأساليب القياسية. </li><li style=";text-align:...

<ol>
	<li>Carrodeguas, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans+vivo+analysis+of+human+delayed-type+hypersensitivity+reactivity.">Trans vivo analysis of human delayed-type hypersensitivity reactivity.</a> Hum. Immunol. 60, 640-651 (1999).</li><li>VanBuskirk, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+allograft+acceptance+is+associated+with+immune+regulation.">Human allograft acceptance is associated with immune regulation.</a> J. Clin. Invest. 106, 145-155 (2000).</li><li>Burlingham, W. J., Jankowska-Gan, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+strain+and+injection+site+are+crucial+for+detecting+linked+suppression+in+transplant+recipients+by+trans-vivo+DTH+assay.">Mouse strain and injection site are crucial for detecting linked suppression in transplant recipients by trans-vivo DTH assay.</a> Am. J. Transplant. 7, 466-470 (2007).</li><li>Burlingham, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+tolerance+to+a+maternal+kidney+transplant+is+selective+for+HLA+class+II:+Evidence+from+trans-vivo+DTH+and+alloantibody+analysis.">Loss of tolerance to a maternal kidney transplant is selective for HLA class II: Evidence from trans-vivo DTH and alloantibody analysis.</a> Human Immunology. 61, 1395-1402 (2000).</li><li>Geissler, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+liver+allograft+acceptance+and+the+'tolerance+assay':+In+vitro+anti-donor+T+cell+assays+show+hyporeactivity+to+donor+cells+but,+unlike+DTH,+fail+to+detect+linked+suppression.">Human liver allograft acceptance and the 'tolerance assay': In vitro anti-donor T cell assays show hyporeactivity to donor cells but, unlike DTH, fail to detect linked suppression.</a> Transplantation. 72, 571-580 (2001).</li><li>Jankowska-Gan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+liver+allograft+acceptance+and+the+'tolerance+assay'.+II.+donor+HLA-A,+-B+but+not+DR+antigens+are+able+to+trigger+regulation+of+DTH.">Human liver allograft acceptance and the 'tolerance assay'. II. donor HLA-A, -B but not DR antigens are able to trigger regulation of DTH.</a> Hum. Immunol. 63, 862 (2002).</li><li>Cai, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minor+H+Antigen+HA-1-specific+Regulator+and+Effector+CD8++T+Cells,+and+HA-1+Microchimerism,+in+Allograft+Tolerance.">Minor H Antigen HA-1-specific Regulator and Effector CD8+ T Cells, and HA-1 Microchimerism, in Allograft Tolerance.</a> J. Exp. Med. 199, 1017-1023 (2004).</li><li>Rodriguez, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+regulation+and+graft+survival+in+kidney+transplant+recipients+are+both+enhanced+by+human+leukocyte+antigen+matching.">Immune regulation and graft survival in kidney transplant recipients are both enhanced by human leukocyte antigen matching.</a> Am. J. Transplant. 4, 537-543 (2004).</li><li>Xu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+CD4+CD25low+adaptive+T+regulatory+cells+suppress+delayed-type+hypersensitivity+during+transplant+tolerance.">Human CD4+CD25low adaptive T regulatory cells suppress delayed-type hypersensitivity during transplant tolerance.</a> J. Immunol. 178, 3983-3995 (2007).</li><li>Derks, R. A., Jankowska-Gan, E., Xu, Q., Burlingham, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cell+type+determines+the+mechanism+of+bystander+suppression+by+adaptive+T+regulatory+cells+specific+for+the+minor+antigen+HA-1.">Dendritic cell type determines the mechanism of bystander suppression by adaptive T regulatory cells specific for the minor antigen HA-1.</a> J. Immunol. 179, 3443-3451 (2007).</li><li>Jankowska-Gan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+reduction+of+immunosuppression+in+older+renal+transplant+recipients+who+exhibit+donor-specific+regulation.">Successful reduction of immunosuppression in older renal transplant recipients who exhibit donor-specific regulation.</a> Transplantation. 88, 533-541 (2009).</li><li>Jankowska-Gan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pretransplant+immune+regulation+predicts+allograft+outcome:+bidirectional+regulation+correlates+with+excellent+renal+transplant+function+in+living-related+donor-recipient+pairs.">Pretransplant immune regulation predicts allograft outcome: bidirectional regulation correlates with excellent renal transplant function in living-related donor-recipient pairs.</a> Transplantation. 93, 283-290 (2012).</li><li>Knechtle, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+and+limited+use+of+tacrolimus+to+avoid+rejection+in+an+alemtuzumab+and+sirolimus+regimen+for+kidney+transplantation:+clinical+results+and+immune+monitoring.">Early and limited use of tacrolimus to avoid rejection in an alemtuzumab and sirolimus regimen for kidney transplantation: clinical results and immune monitoring.</a> Am. J. Transplant. 9, 1087-1098 (2009).</li><li>Haynes, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor-specific+indirect+pathway+analysis+reveals+a+B-cell-independent+signature+which+reflects+outcomes+in+kidney+transplant+recipients.">Donor-specific indirect pathway analysis reveals a B-cell-independent signature which reflects outcomes in kidney transplant recipients.</a> Am. J. Transplant. 12, 640-648 (2012).</li><li>Burlingham, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-17-dependent+cellular+immunity+to+collagen+type+V+predisposes+to+obliterative+bronchiolitis+in+human+lung+transplants.">IL-17-dependent cellular immunity to collagen type V predisposes to obliterative bronchiolitis in human lung transplants.</a> J. Clin. Invest. 117, 3498-3506 (2007).</li><li>Bobadilla, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TH-17,+Monokines,+Collagen+Type+V,+and+Primary+Graft+Dysfunction+in+Lung+Transplantation.">TH-17, Monokines, Collagen Type V, and Primary Graft Dysfunction in Lung Transplantation.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 177 (6), (2008).</li><li>Olson, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+prostate+tumor+antigen-specific+CD8++regulatory+T+cells+are+inhibited+by+CTLA-4+or+IL-35+blockade.">Human prostate tumor antigen-specific CD8+ regulatory T cells are inhibited by CTLA-4 or IL-35 blockade.</a> J. Immunol. 189, 5590-5601 (2012).</li></ol>

وDTH مقايسة عبر الجسم الحي هو اختبار تشخيصي الرواية مع التطبيق السريري المحتملة في تقييم الاستجابات الخلية بوساطة في زرع والسرطان ومرضى المناعة الذاتية. ومن المفيد لأنه مفيد ليس فقط في رصد استدعاء استجابات المستجيب T، ولكن أيضا فإنه يمكن الكشف عن استجابات التنظيمية T....

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of the reagent</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue number</td>
			<td>Comments (optional)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACD tube for blood collection</td>
			<td>BD</td>
			<td>02-684-26</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphocyte Separation Medium</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>25-072-CV</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>21-031-CM</td>
			<td>Without calcium &amp; magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysis Buffer</td>
			<td>BioWhittaker</td>
			<td>10-548E</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TT/DT or EBV</td>
			<td>Sanofi Pasteur Inc./ Meridian Life Science, Inc.</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>TT/DT 25 &mu;g/injection EBV 8 &mu;g/injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease inhibitor PMSF</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>78830</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosine for cell count</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E-6003</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alloantigen</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Purified HLA antigens, synthetic allopeptides can be used instead of donor cell-free lysates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml sterile centrifuge tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-443-18</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 ml pipettes and pipettor</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>13-675-20</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 ml safe-lock tubes</td>
			<td>Costar</td>
			<td>3213</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &mu;l, 100 &mu;l , 10 &mu;l pipettes with sterile tips</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>02-671-10</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Full size centrifuge and microfuge</td>
			<td>Beckman Coulter/Eppendorf</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/2cc or 1cc insulin syringes</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>14-826-79</td>
			<td>28 gauge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibracell sonicator</td>
			<td>Divtech Equipment Co. Sonocs&amp; Materials Inc</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>2 mm probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dial thickness gauge</td>
			<td>Mitutoyo, Japan</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCID mice</td>
			<td>Harlan</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal Healthcare</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Inhalant anesthesia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

trans-vivo delayed type hypersensitivity assay for antigen specific regulation

تأخر استجابة من نوع فرط الحساسية (DTH) هو سريع في مظهر الجسم الحي من T الاستجابة المناعية التي تعتمد على خلية لمستضد الأجنبية (AG) أن النظام المناعي المضيف شهدت في الماضي القريب. غالبا ما تنقسم التفاعلات DTH إلى مرحلة التوعية، مشيرا إلى التجربة الأولية مستضد، ومرحلة التحدي، والذي يتبع عادة بعد عدة أيام التوعية. يعتبر كثير من الأحيان لعدم وجود تأخر من نوع فرط الحساسية استجابة إلى حج استدعاء يتبين من اختبار الجلد كدليل على استعطال. وقد تم فحص البيوت التقليدية المستخدمة بشكل فعال في تشخيص العديد من الالتهابات الجرثومية. على الرغم من تقاسم ميزات المناعة مماثلة مثل تسلل لمفاوية، وذمة، ونخر الأنسجة، وDTH المباشرة ليست تقنية التشخيص ممكنا في مرضى زرع بسبب إمكانية الحقن المباشر مما أدى إلى توعية لمستضدات المانحة وفقدان الكسب غير المشروع. لتجنب هذه المشكلة، وهمهمةتم وضع إلى الفأر &quot;عبر الجسم الحي&quot; DTH مقايسة 1،2. هذا الاختبار هو في جوهره نقل DTH الفحص، التي تم حقن الخلايا البشرية في الدم المحيطي وحيدات النوى (PBMCs) ومستضدات محددة تحت الجلد في pinnae أو قاطع الطريق على فأرة الحاسوب السذاجة والبيوت مثل تورم يقاس بعد 18-24 ساعة 3. عرض المستضد بواسطة الخلايا مستضد تقديم الإنسان مثل الضامة أو البلدان النامية إلى خلايا T في الأنسجة الوعائية للغاية الماوس يتسبب في تتالي التهابات وتجذب الخلايا المناعية الماوس مما أدى إلى ردود التورم. الرد هو مستضد محددة ويتطلب توعية مستضد قبل. A إيجابية استجابة DTH المانحة التفاعلي في مقايسة تلفزيون DTH يعكس أن مريض زرع وضعت التصرف المناعة الموالية للالتهابات نحو alloantigens الكسب غير المشروع. الميزة الأكثر أهمية من هذا الاختبار هو أنه يمكن أيضا أن تستخدم لكشف الخلايا التائية التنظيمية، التي تتسبب في قمع المارة. قمع المارة منDTH استجابة نذكر في وجود مستضد المانحة هو سمة من متلقى مع المغايرة المقبولة 2،4-14. قد رصد متلقى للalloreactivity والتنظيم من قبل تلفزيون DTH تحديد مجموعة فرعية من المرضى الذين يمكن أن يستفيدوا من تخفيض المناعة من دون مخاطر مرتفعة من الرفض أو تدهور وظائف الكلى. ثمة مجال واعد هو تطبيق للمقايسة تلفزيون DTH في رصد المناعة الذاتية 15،16 وأيضا في ورم المناعة 17.

1. تقييم متلقي زرع الكلى للاستجابة المانحين مستضد محددة باستخدام مقايسة تلفزيون DTH لاختبار المانحة التفاعلي المناعة الخلوية في متلقي زرع الكلى نحن حقن PBMC من هؤلاء المرضى مع مستضدات المانحة وحدها أو مع إستدعاء مستضد التيتانوس (TT). ك?...

Watch this Scientific Journal Video about Trans-vivo Delayed Type Hypersensitivity Assay for Antigen Specific Regulation at JoVE.com

Trans-vivo Delayed Type Hypersensitivity Assay for Antigen Specific Regulation

نحن تصف مقايسة التشخيص القيمة التي يمكن استخدامها لاتخاذ قرار الانسحاب من كبت المناعة بعد زرع من دون مخاطر مرتفعة من رفض الكسب غير المشروع. يستخدم فحص مبادئ تأخر نوع فرط الحساسية ويوفر تقييم دقيق لكلا المانحة محددة المستجيب والتنظيمية الاستجابات المناعية التي شنت من قبل المستفيدين.

عبر الجسم الحي فرط الحساسية النوع المتأخر الفحص ل Antigen تنظيم محدد

Delayed-type hypersensitivity response (DTH) is a rapid in vivo manifestation of T cell-dependent immune response to a foreign antigen (Ag) that the host ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells

Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells

مستضد محددة في فيفو الفحص باستخدام خلايا القتل المستهدف CFSE إعتبر

Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) can be used to easily and quickly label a cell population of interest for in vivo investigation.  ...

Development of Cell-type specific anti-HIV gp120 aptamers for siRNA delivery

تطوير خلية من نوع معين الأبتامرات gp120 المضادة لفيروس الإيدز لتسليم سيرنا

The global epidemic of infection by HIV has created an urgent need for new classes of antiretroviral agents. The potent ability of small interfering ...

Basophil Activation Test for Investigation of IgE-Mediated Mechanisms in Drug Hypersensitivity

قعدة اختبار لتنشيط التحقيق في إيج بوساطة آليات في فرط الحساسية للمخدرات

Hypersensitivity reactions against non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) like propyphenazone (PP) and diclofenac (DF) can manifest as Type I-like ...

Flow Cytometric Isolation of Primary Murine Type II Alveolar Epithelial Cells for Functional and Molecular Studies

عزل تدفق Cytometric من نوع خلايا الفئران الابتدائية السنخية II طلائي للدراسات الوظيفية والجزيئية

Throughout  the last years, the contribution of alveolar type II epithelial cells (AECII)  to various aspects of immune regulation in the lung has been ...

Killer Artificial Antigen Presenting Cells (KaAPC) for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

Killer Artificial Antigen Presenting Cells KaAPC for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

القاتل مستضد تقديم الخلايا الاصطناعي (KaAPC) للكفاءة<em&gt; في المختبر</em&gt; استنفاد خلايا T الإنسان مستضد محددة

Current treatment of T cell mediated autoimmune diseases relies mostly on strategies of global immunosuppression, which, in the long term, is accompanied ...

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

التصوير كله والحيوان وتدفق Cytometric تقنيات CD8 + T الردود خلية التحليل من Antigen محددة بعد الجسيمات النانوية التطعيم

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

Development of Stem Cell-derived Antigen-specific Regulatory T Cells Against Autoimmunity

تطوير المستمدة الخلية الجذعية خلايا T التنظيمية مستضد محددة ضد المناعة الذاتية

Autoimmune diseases arise due to the loss of immunological self-tolerance. Regulatory T cells (Tregs) are important mediators of immunologic ...

Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

كشف وإثراء نادر محددة مستضد الخلايا B لتحليل النمط الظاهري وظيفة

B cells reactive with a specific antigen usually occur at a frequency of &lt;0.05% of lymphocytes. For decades researchers have sought methods to isolate ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

في فيفو الفحص للكشف عن وظيفة محددة مستضد تي خلية عن استخدام نموذج التطعيم

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

جيل من التمييزية مونوكلونل البشرية من خلايا نادرة محددة مستضد ب المتداولة في الدم

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...