Name: trans-vivo delayed type hypersensitivity assay for antigen specific regulation
Uploaded: 2013-05-02T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Trans-vivo Delayed Type Hypersensitivity Assay for Antigen Specific Regulation at JoVE.com

저자는 이식 규제 DTH 반응에 대한 우리의 이해의 발전에 AM VanBuskirk의 기여를 인정하고 싶습니다. 이 작품은 NIH 보조금에게 PO1AI084853 및 R01AI066219-06을 지원하고, EU가 후원 한 연구가 있었다.

1. 림프구의 준비 <ol><li> ACD (산성 구연산 포도당) 튜브에 혈액을 수집합니다. </li><li> 표준 방법에 따라 림프구 분리 매체를 사용하여 신선한 인간의 말초 혈액에서 PBMC를 분리합니다. </li><li> 오염 혈소판을 제거하는 PBS로 PBMC 세 번 씻으십시오. 혈소판은 트랜스 생체 DTH 분석을 방해 발견되었다. PBMC 준비의 최대 허용 혈소판 오염 ≤ 1X10 7 / 주입이다. </li><li> 눈에 띄는 적혈구 오염이있는 ...

<ol>
	<li>Carrodeguas, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans+vivo+analysis+of+human+delayed-type+hypersensitivity+reactivity.">Trans vivo analysis of human delayed-type hypersensitivity reactivity.</a> Hum. Immunol. 60, 640-651 (1999).</li><li>VanBuskirk, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+allograft+acceptance+is+associated+with+immune+regulation.">Human allograft acceptance is associated with immune regulation.</a> J. Clin. Invest. 106, 145-155 (2000).</li><li>Burlingham, W. J., Jankowska-Gan, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+strain+and+injection+site+are+crucial+for+detecting+linked+suppression+in+transplant+recipients+by+trans-vivo+DTH+assay.">Mouse strain and injection site are crucial for detecting linked suppression in transplant recipients by trans-vivo DTH assay.</a> Am. J. Transplant. 7, 466-470 (2007).</li><li>Burlingham, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+tolerance+to+a+maternal+kidney+transplant+is+selective+for+HLA+class+II:+Evidence+from+trans-vivo+DTH+and+alloantibody+analysis.">Loss of tolerance to a maternal kidney transplant is selective for HLA class II: Evidence from trans-vivo DTH and alloantibody analysis.</a> Human Immunology. 61, 1395-1402 (2000).</li><li>Geissler, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+liver+allograft+acceptance+and+the+'tolerance+assay':+In+vitro+anti-donor+T+cell+assays+show+hyporeactivity+to+donor+cells+but,+unlike+DTH,+fail+to+detect+linked+suppression.">Human liver allograft acceptance and the 'tolerance assay': In vitro anti-donor T cell assays show hyporeactivity to donor cells but, unlike DTH, fail to detect linked suppression.</a> Transplantation. 72, 571-580 (2001).</li><li>Jankowska-Gan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+liver+allograft+acceptance+and+the+'tolerance+assay'.+II.+donor+HLA-A,+-B+but+not+DR+antigens+are+able+to+trigger+regulation+of+DTH.">Human liver allograft acceptance and the 'tolerance assay'. II. donor HLA-A, -B but not DR antigens are able to trigger regulation of DTH.</a> Hum. Immunol. 63, 862 (2002).</li><li>Cai, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minor+H+Antigen+HA-1-specific+Regulator+and+Effector+CD8++T+Cells,+and+HA-1+Microchimerism,+in+Allograft+Tolerance.">Minor H Antigen HA-1-specific Regulator and Effector CD8+ T Cells, and HA-1 Microchimerism, in Allograft Tolerance.</a> J. Exp. Med. 199, 1017-1023 (2004).</li><li>Rodriguez, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+regulation+and+graft+survival+in+kidney+transplant+recipients+are+both+enhanced+by+human+leukocyte+antigen+matching.">Immune regulation and graft survival in kidney transplant recipients are both enhanced by human leukocyte antigen matching.</a> Am. J. Transplant. 4, 537-543 (2004).</li><li>Xu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+CD4+CD25low+adaptive+T+regulatory+cells+suppress+delayed-type+hypersensitivity+during+transplant+tolerance.">Human CD4+CD25low adaptive T regulatory cells suppress delayed-type hypersensitivity during transplant tolerance.</a> J. Immunol. 178, 3983-3995 (2007).</li><li>Derks, R. A., Jankowska-Gan, E., Xu, Q., Burlingham, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cell+type+determines+the+mechanism+of+bystander+suppression+by+adaptive+T+regulatory+cells+specific+for+the+minor+antigen+HA-1.">Dendritic cell type determines the mechanism of bystander suppression by adaptive T regulatory cells specific for the minor antigen HA-1.</a> J. Immunol. 179, 3443-3451 (2007).</li><li>Jankowska-Gan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+reduction+of+immunosuppression+in+older+renal+transplant+recipients+who+exhibit+donor-specific+regulation.">Successful reduction of immunosuppression in older renal transplant recipients who exhibit donor-specific regulation.</a> Transplantation. 88, 533-541 (2009).</li><li>Jankowska-Gan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pretransplant+immune+regulation+predicts+allograft+outcome:+bidirectional+regulation+correlates+with+excellent+renal+transplant+function+in+living-related+donor-recipient+pairs.">Pretransplant immune regulation predicts allograft outcome: bidirectional regulation correlates with excellent renal transplant function in living-related donor-recipient pairs.</a> Transplantation. 93, 283-290 (2012).</li><li>Knechtle, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+and+limited+use+of+tacrolimus+to+avoid+rejection+in+an+alemtuzumab+and+sirolimus+regimen+for+kidney+transplantation:+clinical+results+and+immune+monitoring.">Early and limited use of tacrolimus to avoid rejection in an alemtuzumab and sirolimus regimen for kidney transplantation: clinical results and immune monitoring.</a> Am. J. Transplant. 9, 1087-1098 (2009).</li><li>Haynes, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor-specific+indirect+pathway+analysis+reveals+a+B-cell-independent+signature+which+reflects+outcomes+in+kidney+transplant+recipients.">Donor-specific indirect pathway analysis reveals a B-cell-independent signature which reflects outcomes in kidney transplant recipients.</a> Am. J. Transplant. 12, 640-648 (2012).</li><li>Burlingham, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-17-dependent+cellular+immunity+to+collagen+type+V+predisposes+to+obliterative+bronchiolitis+in+human+lung+transplants.">IL-17-dependent cellular immunity to collagen type V predisposes to obliterative bronchiolitis in human lung transplants.</a> J. Clin. Invest. 117, 3498-3506 (2007).</li><li>Bobadilla, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TH-17,+Monokines,+Collagen+Type+V,+and+Primary+Graft+Dysfunction+in+Lung+Transplantation.">TH-17, Monokines, Collagen Type V, and Primary Graft Dysfunction in Lung Transplantation.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 177 (6), (2008).</li><li>Olson, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+prostate+tumor+antigen-specific+CD8++regulatory+T+cells+are+inhibited+by+CTLA-4+or+IL-35+blockade.">Human prostate tumor antigen-specific CD8+ regulatory T cells are inhibited by CTLA-4 or IL-35 blockade.</a> J. Immunol. 189, 5590-5601 (2012).</li></ol>

트랜스 생체 DTH 분석은 이식, 암,자가 면역 질환 환자에서 세포 매개 반응을 평가하는 잠재적 인 임상 응용 프로그램과 새로운 진단 테스트입니다. 이 리콜 T 이펙터 반응을 모니터링하는 데 유용뿐만 아니라 때문에 가치가있다,뿐만 아니라 그것은 T 규제 응답을 검색 할 수 있습니다. 인간의 DTH 규제를 감지하는 신뢰할 수있는 방법은 단독 요법 또는 내성 시험에 대한 후보자 환자에서 면역 억제 ?...

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of the reagent</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue number</td>
			<td>Comments (optional)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACD tube for blood collection</td>
			<td>BD</td>
			<td>02-684-26</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphocyte Separation Medium</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>25-072-CV</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>21-031-CM</td>
			<td>Without calcium &amp; magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysis Buffer</td>
			<td>BioWhittaker</td>
			<td>10-548E</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TT/DT or EBV</td>
			<td>Sanofi Pasteur Inc./ Meridian Life Science, Inc.</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>TT/DT 25 &mu;g/injection EBV 8 &mu;g/injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease inhibitor PMSF</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>78830</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosine for cell count</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E-6003</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alloantigen</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Purified HLA antigens, synthetic allopeptides can be used instead of donor cell-free lysates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml sterile centrifuge tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-443-18</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 ml pipettes and pipettor</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>13-675-20</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 ml safe-lock tubes</td>
			<td>Costar</td>
			<td>3213</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &mu;l, 100 &mu;l , 10 &mu;l pipettes with sterile tips</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>02-671-10</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Full size centrifuge and microfuge</td>
			<td>Beckman Coulter/Eppendorf</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/2cc or 1cc insulin syringes</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>14-826-79</td>
			<td>28 gauge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibracell sonicator</td>
			<td>Divtech Equipment Co. Sonocs&amp; Materials Inc</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>2 mm probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dial thickness gauge</td>
			<td>Mitutoyo, Japan</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCID mice</td>
			<td>Harlan</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal Healthcare</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Inhalant anesthesia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

trans-vivo delayed type hypersensitivity assay for antigen specific regulation

지연 형 과민 반응 (DTH)은 숙주 면역 시스템은 최근 과거에 경험있는 외국 항원 (자세)에 대한 T 세포 의존 면역 반응의 생체 징후의 급격한입니다. DTH 반응은 종종 일반적으로 감작 후 몇 일 뒤에 초기 항원 경험과 도전 단계를 참조 감작 단계로 구분됩니다. 피부 테스트에 의해 입증 리콜 AG의 지연 형 과민 반응의 부족은 종종 anergy의 증거로 간주됩니다. 기존의 DTH 분석을 효과적으로 많은 미생물 감염을 진단하는 데 사용되었습니다. 이러한 림프구 침윤, 부종 및 조직 괴사와 유사한 면역 기능을 공유에도 불구하고, 직접 D​​TH 때문에 기증자의 항원 및 이식 손실 감작의 결과로 직접 분사의 가능성 이식 환자에서 가능한 진단 기술이 아니다. 이 문제를 방지하려면, 험투 마우스 &quot;트랜스 생체&quot;DTH 분석은 1,2 개발되었다. 이 테스트는 인간의 말초 혈액 단핵 세포 (말초 혈액) 및 특정 항원 pinnae에 피하 주사 또는 순진 마우스와 DTH와 같은 부종의 노상 18-24 시간 후 3 측정 된에 기본적으로 전송 DTH 분석이다. 식세포 나 높은 혈관 마우스 조직에서 T 세포 수지상 인간 항원 제시 세포에 의해 항원 프레 젠 테이션 염증 폭포를 트리거하고 붓기 반응의 결과로 마우스 면역 세포를 끈다. 반응은 항원 특이하고 사전 항원 감작이 필요합니다. TV-DTH 분석에 긍정적 인 기증자 반응 DTH 반응은 이식 환자는 이식 alloantigens 향해 염증성 면역 처리를 개발했다고 반영합니다. 이 분석의 가장 중요한 기능은 또한 방관자 억제를 일으키는 원인이 규제 T 세포를 감지하는 데 사용할 수 있다는 것입니다. 의 방관자 억제기증자의 항원의 존재 DTH 리콜 응답 허용 이식 2,4-14와 이식의 특징입니다. TV-DTH에 의해 alloreactivity 및 규제에 대한 이식의 모니터링은 거부 또는 악화 신장 기능의 높은 위험없이 면역 억제제의 감소 혜택을 누릴 수있는 환자의 하위 집합을 식별 할 수 있습니다. 유망한 지역은자가 면역 15,16의 모니터링 또한 종양 면역학 17 TV-DTH 분석의 응용 프로그램입니다.

1. TV-DTH 분석을 사용하여 기증자의 항원에 특정한 응답 신장 이식의 평가 신장 이식 기증자 반응 세포 성 면역을 테스트하기 위해 우리는 기증자의 항원 단독으로 또는 리콜 항원 파상풍 톡소이드 (TT)를 가진 환자의 PBMC를 주입했다. 양성 대조군 세포는 TT 형과 주입으로. 우리는 이식 지연 형 과민 반응의 세 가지 패턴 (그림 1)을 관찰합니다. 모든 환자는 자세 (TT)를...

Watch this Scientific Journal Video about Trans-vivo Delayed Type Hypersensitivity Assay for Antigen Specific Regulation at JoVE.com

Trans-vivo Delayed Type Hypersensitivity Assay for Antigen Specific Regulation

우리는 잠재적으로 이식 거부의 높은 위험없이 이식 후 면역 억제제의 철수를 결정하는 데 사용할 수있는 유용한 진단 분석을 설명합니다. 분석은 지연 형 과민 반응의 원리를 사용하여받는 사람이 탑재 된 두 기증자 특정 이펙터 및 규제 면역 반응의 정확한 평가를 제공합니다.

항원 특정 규제 트랜스 생체 지연 형 과민 분석

Delayed-type hypersensitivity response (DTH) is a rapid in vivo manifestation of T cell-dependent immune response to a foreign antigen (Ag) that the host ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells

Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells

항원 특정 VIVO에서</emCFSE 라벨 대상 세포를 사용하여> 죽이는 분석

Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) can be used to easily and quickly label a cell population of interest for in vivo investigation.  ...

연구

면역학 및 감염병학

Development of Cell-type specific anti-HIV gp120 aptamers for siRNA delivery

siRNA 전달을위한 셀 타입의 특정 안티 HIV gp120 aptamers의 개발

The global epidemic of infection by HIV has created an urgent need for new classes of antiretroviral agents. The potent ability of small interfering ...

Basophil Activation Test for Investigation of IgE-Mediated Mechanisms in Drug Hypersensitivity

약물 과민성의 IGE - 중재 메커니즘을 조사 Basophil 인증 시험

Hypersensitivity reactions against non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) like propyphenazone (PP) and diclofenac (DF) can manifest as Type I-like ...

Flow Cytometric Isolation of Primary Murine Type II Alveolar Epithelial Cells for Functional and Molecular Studies

기능 및 분자 연구 기본 손쥐 유형 II 폐포 상피 세포의 흐름 Cytometric 절연

Throughout  the last years, the contribution of alveolar type II epithelial cells (AECII)  to various aspects of immune regulation in the lung has been ...

Killer Artificial Antigen Presenting Cells (KaAPC) for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

Killer Artificial Antigen Presenting Cells KaAPC for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

효율적인위한 킬러 인공 항원 제시 세포 (KaAPC)<em&gt; 체외</em&gt; 인간의 항원 특이 T 세포의 고갈

Current treatment of T cell mediated autoimmune diseases relies mostly on strategies of global immunosuppression, which, in the long term, is accompanied ...

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

나노 입자 백신 접종 후 분석 항원 특이 CD8 + T 세포 반응에 대한 전체 동물 이미징 및 유세포 기술

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

Development of Stem Cell-derived Antigen-specific Regulatory T Cells Against Autoimmunity

자가 면역 대해 줄기 세포 유래의 항원 특이 적 조절 T 세포의 발달

Autoimmune diseases arise due to the loss of immunological self-tolerance. Regulatory T cells (Tregs) are important mediators of immunologic ...

Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

표현형 및 기능 분석에 대한 검색 및 희귀의 농축 항원 특이 적 B 세포

B cells reactive with a specific antigen usually occur at a frequency of &lt;0.05% of lymphocytes. For decades researchers have sought methods to isolate ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

Vivo에서 예방 접종 모델을 사용 하는 항 원 특정 T-셀 Cytolytic 함수의 검색에 대 한 분석 결과

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

희귀 한 항 원 특정 B 세포 혈액 순환에서 구별 인간 단일 클론 항 체의 생성

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...