Name: passaging hues human embryonic stem cell-lines with trypsin.
Uploaded: 2006-10-12T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin. at JoVE.com

Général Nous vous recommandons de dégel pas plus d&#39;un échantillon à un moment donné pour assurer une manipulation facile. Le gestionnaire doit prendre soin de ne pas laisser des cultures à la température ambiante et de faibles émissions de CO2 pendant de longues périodes de temps. Tous centrifugation des cellules vivantes se fait à 500-600 g pendant 5 min à température ambiante. FAE (cellules de souris embryonnaires Feeder) <ol><li> Préchauffer ...

<ol>
	<li>Edmond, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nosocomial+bloodstream+infections+in+United+States+hospitals:+a+three-year+analysis.">Nosocomial bloodstream infections in United States hospitals: a three-year analysis.</a> Clin. Infect. Dis. 29, 239-244 (1999).</li><li>Ramage, G., Bachmann, S., Patterson, T. F., Wickes, B. L., Lopez-Ribot, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+multidrug+efflux+pumps+in+relation+to+fluconazole+resistance+in+Candida+albicans+biofilms.">Investigation of multidrug efflux pumps in relation to fluconazole resistance in Candida albicans biofilms.</a> J. Antimicrob. Chemother. 49, 973-980 (2002).</li><li>Srinivasan, A., Uppuluri, P., Lopez-Ribot, J., Ramasubramanian, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+High-Throughput+Candida+albicans+Biofilm+Chip.">Development of a High-Throughput Candida albicans Biofilm Chip.</a> PLoS ONE. 6, 19036-19036 (2011).</li><li>Ramage, G., Vandewalle, K., Wickes, B. L., Lopez-Ribot, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+biofilm+formation+by+Candida+albicans.">Characteristics of biofilm formation by Candida albicans.</a> Rev. Iberoam. Micol. 18, 163-170 (2001).</li><li>Pierce, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+reproducible+96-well+plate-based+method+for+the+formation+of+fungal+biofilms+and+its+application+to+antifungal+susceptibility+testing.">A simple and reproducible 96-well plate-based method for the formation of fungal biofilms and its application to antifungal susceptibility testing.</a> Nat. Protoc. 3, 1494-1500 (2008).</li><li>Lee, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+cellular+microarray+for+high-throughput+toxicology+assays.">Three-dimensional cellular microarray for high-throughput toxicology assays.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 59-63 (2008).</li><li>Meyerhofer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+resist+films+produced+by+spinning.">Characteristics of resist films produced by spinning.</a> Journal of Applied Physics. 49, (1978).</li><li>Ramage, G., Vande Walle, K., Wickes, B. L., Lopez-Ribot, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardized+method+for+in+vitro+antifungal+susceptibility+testing+of+Candida+albicans+biofilms.">Standardized method for in vitro antifungal susceptibility testing of Candida albicans biofilms.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 45, 2475-2479 (2001).</li><li>Chandra, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilm+formation+by+the+fungal+pathogen+Candida+albicans:+Development,+architecture,+and+drug+resistance.">Biofilm formation by the fungal pathogen Candida albicans: Development, architecture, and drug resistance.</a> Journal of Bacteriology. 183, 5385-5394 (2001).</li><li>Jabra-Rizk, M. A., Falkler, W. A., Meiller, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fungal+biofilms+and+drug+resistance.">Fungal biofilms and drug resistance.</a> Emerg. Infect. Dis. 10, 14-19 (2004).</li><li>Tobudic, S., Lassnigg, A., Kratzer, C., Graninger, W., Presterl, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+activity+of+amphotericin+B,+caspofungin+and+posaconazole+on+Candida+albicans+biofilms+in+intermediate+and+mature+development+phases.">Antifungal activity of amphotericin B, caspofungin and posaconazole on Candida albicans biofilms in intermediate and mature development phases.</a> Mycoses. 53, 208-214 (2010).</li></ol>

Dans cette vidéo, nous avons démontré comment nous HUES passage couramment lignées de cellules souches dans notre laboratoire. Fractionnement efficace et régulière et repiquage est essentiel pour maintenir une bonne santé humaine ligne de cellules souches embryonnaires. Passage de la médiation trypsine est un avantage significatif de teintes des lignées de cellules, cependant, il est important de ne pas trop trypsiniser cultures ou d&#39;avoir une grande proportion de cellules individuelles pendant le re-Platting.

HUES média 651,5 ml KO-500 ml de DMEM Penstrep 6,5 ml 6,5 ml GlutaMAXTM NEAA 6,5 ml de 2-mercaptoéthanol 0.5ul KO Sérum Remplacement 65 ml à 65 ml Plasmanate bFGF2 (10 ng / ml final) 0,65 ml

passaging hues human embryonic stem cell-lines with trypsin.

Dans cette vidéo, nous montrons comment notre laboratoire passages couramment HUES humaine lignées cellulaires embryonnaires souches à la trypsine. Cellules souches embryonnaires humaines sont des artefacts de la culture cellulaire, et ont tendance à acquérir anomalies chromosomiques avec doublements de population élevée. Repiquage correcte est essentielle pour maintenir une bonne santé, indifférenciée, des teintes caryotype humain normal de la culture de cellules souches embryonnaires. Tout d&#39;abord, une culture de l&#39;expansion est lavé dans du PBS pour éliminer les médias résiduelles et les débris cellulaires, puis les cellules sont recouvertes avec un volume minimal de 0,05% au chaud trypsine-EDTA. La trypsine est à gauche sur les cellules pour un maximum de cinq minutes, puis les cellules sont doucement délogés avec une pipette de 2 mL sérologique. La suspension cellulaire est recueilli et mélangé avec un volume important de médias teintes, puis les cellules sont collectées par centrifugation douce. La trypsine inactivé média mélange est éliminé et les cellules remises en suspension dans les médias HUES préchauffé. Un rapport de division appropriée est calculé (généralement 1:10-1:20), et les cellules re-plaqué sur une plaque 1-2 jours anciens contenant une monocouche de cellules embryonnaires de souris irradiées alimentation fibroblastes. La plaque de culture nouvellement ensemencé HUES n&#39;est laissé au repos pendant 48 heures, puis les médias est changé tous les jours par la suite. Il est important de ne pas trpsinize jusqu&#39;à une suspension cellulaire unique, car cela augmente le risque d&#39;introduction d&#39;anomalies chromosomiques.

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Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin.

Dans cette vidéo, nous montrons comment notre laboratoire passages couramment HUES humaine lignées cellulaires embryonnaires souches à la trypsine.

HUES repiquage souches embryonnaires humaines lignées cellulaires à la trypsine

In this video we demonstrate how our lab routinely passages HuES human embryonic stem cell lines with trypsin.  Human embryonic stem cells are artifacts ...

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JoVE Journal

Biology

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