Name: passaging hues human embryonic stem cell-lines with trypsin.
Uploaded: 2006-10-12T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin. at JoVE.com

一般我々は、容易な取り扱いを確保するために与えられた一度に1つ以上のサンプルを解凍することをお勧めします。ハンドラは、長時間室温と低CO2で培養を残さないよう注意する必要があります。生細胞の全ての遠心は室温で5分間、500〜600 × gで行われます。 MEFを（マウス胚性フィーダー細胞） <ol><li> 37〜プレ暖かいMEFのメディア℃の-80から直ち?...

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	<li>Edmond, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nosocomial+bloodstream+infections+in+United+States+hospitals:+a+three-year+analysis.">Nosocomial bloodstream infections in United States hospitals: a three-year analysis.</a> Clin. Infect. Dis. 29, 239-244 (1999).</li><li>Ramage, G., Bachmann, S., Patterson, T. F., Wickes, B. L., Lopez-Ribot, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+multidrug+efflux+pumps+in+relation+to+fluconazole+resistance+in+Candida+albicans+biofilms.">Investigation of multidrug efflux pumps in relation to fluconazole resistance in Candida albicans biofilms.</a> J. Antimicrob. Chemother. 49, 973-980 (2002).</li><li>Srinivasan, A., Uppuluri, P., Lopez-Ribot, J., Ramasubramanian, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+High-Throughput+Candida+albicans+Biofilm+Chip.">Development of a High-Throughput Candida albicans Biofilm Chip.</a> PLoS ONE. 6, 19036-19036 (2011).</li><li>Ramage, G., Vandewalle, K., Wickes, B. L., Lopez-Ribot, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+biofilm+formation+by+Candida+albicans.">Characteristics of biofilm formation by Candida albicans.</a> Rev. Iberoam. Micol. 18, 163-170 (2001).</li><li>Pierce, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+reproducible+96-well+plate-based+method+for+the+formation+of+fungal+biofilms+and+its+application+to+antifungal+susceptibility+testing.">A simple and reproducible 96-well plate-based method for the formation of fungal biofilms and its application to antifungal susceptibility testing.</a> Nat. Protoc. 3, 1494-1500 (2008).</li><li>Lee, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+cellular+microarray+for+high-throughput+toxicology+assays.">Three-dimensional cellular microarray for high-throughput toxicology assays.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 59-63 (2008).</li><li>Meyerhofer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+resist+films+produced+by+spinning.">Characteristics of resist films produced by spinning.</a> Journal of Applied Physics. 49, (1978).</li><li>Ramage, G., Vande Walle, K., Wickes, B. L., Lopez-Ribot, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardized+method+for+in+vitro+antifungal+susceptibility+testing+of+Candida+albicans+biofilms.">Standardized method for in vitro antifungal susceptibility testing of Candida albicans biofilms.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 45, 2475-2479 (2001).</li><li>Chandra, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilm+formation+by+the+fungal+pathogen+Candida+albicans:+Development,+architecture,+and+drug+resistance.">Biofilm formation by the fungal pathogen Candida albicans: Development, architecture, and drug resistance.</a> Journal of Bacteriology. 183, 5385-5394 (2001).</li><li>Jabra-Rizk, M. A., Falkler, W. A., Meiller, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fungal+biofilms+and+drug+resistance.">Fungal biofilms and drug resistance.</a> Emerg. Infect. Dis. 10, 14-19 (2004).</li><li>Tobudic, S., Lassnigg, A., Kratzer, C., Graninger, W., Presterl, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+activity+of+amphotericin+B,+caspofungin+and+posaconazole+on+Candida+albicans+biofilms+in+intermediate+and+mature+development+phases.">Antifungal activity of amphotericin B, caspofungin and posaconazole on Candida albicans biofilms in intermediate and mature development phases.</a> Mycoses. 53, 208-214 (2010).</li></ol>

このビデオでは、我々の研究室でどのように日常的に通過の色合いヒト胚性幹細胞株を示した。効率的かつ定期的に分割し、継代は、健康なヒト胚性幹細胞株を維持するために必須です。トリプシンを介した通路は、色相の細胞株の大きな利点である、しかし、それは上の文化をトリプシンしたり、再platting中の単一細胞の大部分を持たないことが重要です。

色合いメディア651.5ミリリットルKO - DMEM 500ミリリットルPenStrep 6.5ミリリットルGlutaMAXTM 6.5ミリリットルNEAA 6.5ミリリットル2 - メルカプトエタノール0.5ul KO血清の交換65ミリリットルPlasmanate 65ミリリットルbFGF2（10 ng / mLの最終的な）0.65ミリリットル

passaging hues human embryonic stem cell-lines with trypsin.

このビデオでは、我々の研究室は、日常的にトリプシンとの色合いのヒト胚性幹細胞株を通路方法を示します。ヒト胚性幹細胞は、細胞培養の成果物であり、高い人口倍加した核型異常を取得する傾向がある。適切な継代は、健康、未分化、karyotypically正常な色合いのヒト胚性幹細胞培養を維持するために必須です。最初に、拡大培養は残留メディアや細胞破片を除去するためにPBSで洗浄し、次いで細胞は温かい0.05％トリプシン- EDTAの最小限のボリュームでオーバーレイされます。トリプシンは、最大5分間までのセルに残って、その後、細胞を穏やかに2mLの血清学的ピペットで外れています。細胞懸濁液は、その後、細胞を穏やかな遠心分離によって収集され、色相のメディアの大容量で採取し、混合される。不活化トリプシンメディアの混合物を除去し、細胞は、予め温めておいた色合いのメディアに再懸濁されている。適切なスプリット比は、（一般的には1:10〜1:20）に計算されます、そして放射線照射マウス胎児線維芽細胞のフィーダー細胞の単層を含む1から2日目のプレートに再播種した細胞。新たに接種した色合いの培養プレートを48時間静置され、その後メディアはその後、毎日変更されます。これは核型異常を導入するリスクを増加させるとそれは、単一の細胞懸濁液にダウンtrpsinizeことが重要です。

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Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin.

このビデオでは、我々の研究室は、日常的にトリプシンとの色合いのヒト胚性幹細胞株を通路方法を示します。

トリプシンで継代色合いヒト胚性幹細胞、線

In this video we demonstrate how our lab routinely passages HuES human embryonic stem cell lines with trypsin.  Human embryonic stem cells are artifacts ...

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