Name: endothelin-1 induced middle cerebral artery occlusion model for ischemic stroke with laser doppler flowmetry guidance in rat
Uploaded: 2013-02-16T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat at JoVE.com

Ce travail a été soutenu par des subventions du Cœur d&#39;affiliation Association américaine du Grand Sud-Est (09GRNT2060421), l&#39;American Medical Association et de l&#39;Université de Floride, clinique et translationnelle Institut des sciences. Adam La Mecque est un garçon NRSA NIH / NINDS, prédoctoral (F30 NS-060335). Robert Regenhardt reçu le soutien bourse pré-doctorale de l&#39;Université de Floride du programme de formation multidisciplinaire sur l&#39;hypertension (T32 HL-083810).

Ce protocole a été approuvé par le soin des animaux et du Comité institutionnel d&#39;utilisation (IACUC) à l&#39;Université de Floride et est en conformité avec le «Guide pour les soins et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire&quot; (huitième édition, National Academy of Sciences, 2011). Matériels <ol><li> Animaux: Huit semaines d&#39;âge, de sexe masculin, Sprague Dawley (Charles River Farms, Wilmington, MA, USA) pesant 250-300 g au moment de la chirurgie. </li><li> Ane...

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	<li>Stroke--1989. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+on+stroke+prevention,+diagnosis,+and+therapy.+Report+of+the+WHO+Task+Force+on+Stroke+and+other+Cerebrovascular+Disorders.">Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders.</a> Stroke. 20, 1407-1431 (1989).</li><li>Lloyd-Jones, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics--2009+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee.">Heart disease and stroke statistics--2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 119, 480-486 (2009).</li><li>Mohr, J. P., Gautier, J. C., Hier, D., Stein, R. W., Barnett, H. J. M., Stein, B. M., Mohr, J. P., Yatsu, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Stroke: pathophysiology, diagnosis, and management. , 377-450 (1986).</li><li>Robinson, M. J., Macrae, I. M., Todd, M., Reid, J. L., McCulloch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+local+cerebral+blood+flow+to+pathological+levels+by+endothelin-1+applied+to+the+middle+cerebral+artery+in+the+rat.">Reduction of local cerebral blood flow to pathological levels by endothelin-1 applied to the middle cerebral artery in the rat.</a> Neurosci. Lett. 118, 269-272 (1990).</li><li>Sharkey, J., Ritchie, I. M., Kelly, P. 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J., Sumners, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candesartan+pretreatment+is+cerebroprotective+in+a+rat+model+of+endothelin-1-induced+middle+cerebral+artery+occlusion.">Candesartan pretreatment is cerebroprotective in a rat model of endothelin-1-induced middle cerebral artery occlusion.</a> Exp. Physiol. 94, 937-946 (2009).</li><li>Braeuninger, S., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+cerebral+ischemia:+procedural+pitfalls+and+translational+problems.">Rodent models of focal cerebral ischemia: procedural pitfalls and translational problems.</a> Exp. Transl. Stroke Med. 1, 8 (2009).</li><li>Tomsick, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+thrombolysis+for+acute+ischemic+stroke.">Intravenous thrombolysis for acute ischemic stroke.</a> J. Vasc. Interv. Radiol. 15, 67-76 (2004).</li><li>Olsen, T. S., Lassen, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dynamic+concept+of+middle+cerebral+artery+occlusion+and+cerebral+infarction+in+the+acute+state+based+on+interpreting+severe+hyperemia+as+a+sign+of+embolic+migration.">A dynamic concept of middle cerebral artery occlusion and cerebral infarction in the acute state based on interpreting severe hyperemia as a sign of embolic migration.</a> Stroke. 15, 458-468 (1984).</li><li>Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. 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J., Afzal, A., Mocco, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+(MCAO)+model+for+ischemic+stroke+with+laser+doppler+flowmetry+guidance+in+mice.">Intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke with laser doppler flowmetry guidance in mice.</a> J. Vis. Exp. (51), e2879 (2011).</li><li>Sharkey, J., Butcher, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+an+experimental+model+of+stroke+produced+by+intracerebral+microinjection+of+endothelin-1+adjacent+to+the+rat+middle+cerebral+artery.">Characterisation of an experimental model of stroke produced by intracerebral microinjection of endothelin-1 adjacent to the rat middle cerebral artery.</a> J. Neurosci. Methods. 60, 125-131 (1995).</li><li>Macrae, I. M., Robinson, M. J., Graham, D. I., Reid, J. L., McCulloch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelin-1-induced+reductions+in+cerebral+blood+flow:+dose+dependency,+time+course,+and+neuropathological+consequences.">Endothelin-1-induced reductions in cerebral blood flow: dose dependency, time course, and neuropathological consequences.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 13, 276-284 (1993).</li><li>Mecca, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebroprotection+by+angiotensin-(1-7)+in+endothelin-1-induced+ischaemic+stroke.">Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke.</a> Exp. Physiol. 96 (1-7), 1084-1096 (2011).</li><li>Fisher, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+of+the+stroke+therapy+academic+industry+roundtable+preclinical+recommendations.">Update of the stroke therapy academic industry roundtable preclinical recommendations.</a> Stroke. 40, 2244-2250 (2009).</li></ol>

L&#39;ET-1 induite par MCAO est un modèle établi d&#39;accident ischémique cérébral expérimental qui est régulièrement utilisé dans plusieurs souches de rats. De nombreuses variables, comme souche de rats, de l&#39;âge des animaux, la température du corps, la méthode de l&#39;anesthésie et de l&#39;expertise opérateur peut conduire à une plus grande variabilité des volumes d&#39;infarctus en utilisant ce modèle 5, 14. Toutefois, plusieurs chercheurs ont montré que les avantages de ce modèl...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td><ol><li> Animaux: Huit semaines d&#39;âge, de sexe masculin, Sprague Dawley (Charles River Farms, Wilmington, MA, USA) pesant 250-300 g au moment de la chirurgie. </li><li> Anesthésie <ol class="lalpha"><li> Système d&#39;anesthésie par inhalation (VetEquip Inc, Pleasanton, CA, USA) </li><li> L&#39;isoflurane anesthésie (Pharmacie Baxter, Deerfield, IL, USA) </li></ol></li><li> Stéréotaxique système (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA) <ol class="lalpha"><li> Petit système stéréotaxique animaux </li><li> Non-rupture des barres d&#39;oreilles pour les rats </li><li> Support de la tête anesthésie gazeuse pour les rats </li></ol></li><li> Régulation de la température <ol class="lalpha"><li> BAT-12 Thermomètre microsonde (World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, Etats-Unis) </li><li> T / PUMP, TP600 couverture thermique (Gaymar Industries, Inc, Orchard Park, État de New York, Etats-Unis) </li></ol></li><li> Les instruments chirurgicaux <ol class="lalpha"><li> Manche de bistouri n ° 11 et la lame, pince à iris, Graefe pince, pince bulldog écarteurs, tournevis, une seringue de 10 ul avec 26 aiguille de la jauge biseautée (World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, Etats-Unis) </li><li> Micromoteur foret et porte stéréotaxique, Quintessential stéréotaxique injecteur (Stoelting, Wood Dale, IL, USA) </li><li> 1,0 mm fraise foret rond, 1,0 mm inversé foret conique fraise (Roboz chirurgical Instrument Co., Inc, Gaithersburg, MD, USA) </li></ol></li><li> Fournitures chirurgicales <ol class="lalpha"><li> Les vis de fixation 0-80 X 3/32 avec 2,4 mm longueur de l&#39;arbre, de calibre 21 guide de canule [4mm de long sous le pylône] et factice canule (Plastics One, Roanoke, Virginie, États-Unis) </li><li> Acrylique prothèse Jet et liquides (Lang Dental Manufacturing Co., Inc, Chicago, IL, USA) </li><li> 3,0 nylon suture (Oasis, Mettawa, IL, USA) </li><li> Des cotons-tiges, pommade ophtalmique Puralube (Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA) </li><li> Tondeuses à cheveux électriques (Oster, Providence, RI, USA) </li></ol></li><li> Produits chimiques <ol class="lalpha"><li> L&#39;endothéline-1 (American Peptide, Sunnyvale, CA, USA) </li><li> Chlorhexidine à 2% (Agrilabs, St. Joseph, MO, USA) </li><li> La buprénorphine HCl (Hospira Inc, Lake Forest, IL, USA) </li></ol></li><li> Équipements de visualisation <ol class="lalpha"><li> Microscope chirurgical (Seiler Instrument et fabrication; St. Louis, MO, USA) </li><li> Fibre optique d&#39;éclairage (Techniquip Corp, Livermore, CA, USA) </li></ol></li><li> Laser Doppler système (ADInstruments, Inc, Colorado Springs, CO, USA) <ol class="lalpha"><li> Sonde standard Crayon </li><li> Porte-sonde </li><li> Débitmètre sanguin </li><li> Powerlab 4/30 avec LabChart 7 </li></ol></li><li> Mesure du volume de l&#39;infarctus <ol class="lalpha"><li> Cerveau de ratmatrice (Zivic-Miller Lab., Inc, Allison Park, Pennsylvanie, Etats-Unis) </li><li> 2,3,5-triphényltétrazolium (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) dilué à 0,05% dans du PBS </li><li> Scanner à plat (Epson Perfection V30, Epson America, Inc, Long Beach, CA, USA) </li><li> Image J logiciels (ImageJ 1.42q logiciel, US National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA) </li></ol></li></ol></td></tr></tbody></table>

endothelin-1 induced middle cerebral artery occlusion model for ischemic stroke with laser doppler flowmetry guidance in rat

L&#39;AVC est la première cause de handicap et la troisième cause de décès dans le monde, ce qui coûte une somme estimée à 70 milliards de dollars aux États-Unis en 2009 1, 2. Plusieurs modèles d&#39;ischémie cérébrale ont été développés pour simuler la condition humaine d&#39;accident vasculaire cérébral. Il a été suggéré que jusqu&#39;à 80% de tous les accidents vasculaires cérébraux résultat de lésions ischémiques dans l&#39;artère cérébrale moyenne (ACM) la zone 3. Dans les années 1990, l&#39;endothéline-1 (ET-1) 4 a été utilisé pour induire une ischémie en l&#39;appliquant directement adjacente à la surface de la MCA après la craniotomie. Plus tard, ce modèle a été modifié 5 en utilisant une injection stéréotaxique de l&#39;ET-1 à côté du MCA pour produire une ischémie cérébrale focale. Les principaux avantages de ce modèle incluent la possibilité d&#39;effectuer la procédure rapidement, la capacité de contrôler la constriction artérielle en modifiant la dose d&#39;ET-1 livré, pas besoin de manipuler les vaisseaux extra-crâniennes fournissant le sang au cerveau ainsi que progressive reperfusile taux aussi proche que possible de la reperfusion chez l&#39;homme 5-7. D&#39;autre part, le modèle de l&#39;ET-1 présente des inconvénients qui comprennent la nécessité d&#39;une craniotomie, ainsi que plus grande variabilité du volume d&#39;éjection 8. Cette variabilité peut être réduite par l&#39;utilisation du laser Doppler (LDF) afin de vérifier l&#39;ischémie cérébrale au cours de l&#39;ET-1 perfusion. Facteurs qui influent sur ​​la variabilité AVC comprennent la précision de la perfusion et le lot de l&#39;ET-1 utilisé 6. Une autre considération importante est que, bien que la reperfusion est un phénomène fréquent dans la course humaine, la durée de l&#39;occlusion de l&#39;ET-1 induite par MCAO peut pas imiter au mieux que d&#39;accident vasculaire cérébral humain où de nombreux patients ont reperfusion partiel sur une période de quelques heures à quelques jours après l&#39;occlusion 9, 10. Ce protocole décrit en détail l&#39;ET-1 induite par MCAO modèle d&#39;AVC ischémique chez le rat. Il sera également attirer l&#39;attention sur les considérations spéciales et les inconvénients potentiels tout au long de la procédure.

1. Post-Op évaluation neurologique Après que l&#39;animal ne reprenne conscience, une grande variété de tests peuvent être utilisés pour évaluer les déficits neurologiques, y compris l&#39;équilibre, la force de préhension, mise patte, asymétrie posturale et l&#39;escalier d&#39;escalade. La tâche de graines de tournesol est une évaluation brute des fonctions motrices et sensorielles qui présente une corrélation significative avec volume de l&#39;infarctus 7, 12. Au co...

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Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Plusieurs modèles animaux d&#39;ischémie cérébrale ont été développés pour simuler la condition humaine d&#39;accident vasculaire cérébral. Ce protocole décrit l&#39;endothéline-1 (ET-1) induit par une occlusion de l&#39;artère cérébrale moyenne (MCAO) modèle d&#39;AVC ischémique chez le rat. En outre, des considérations importantes, les avantages et les inconvénients de ce modèle sont discutées.

L&#39;endothéline-1 induite Moyen Modèle occlusion de l&#39;artère cérébrale pour AVC ischémique avec guidage laser Doppler chez le rat

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