Name: analyzing murine schwann cell development along growing axons
Uploaded: 2012-11-21T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analyzing Murine Schwann Cell Development Along Growing Axons at JoVE.com

Мы хотим поблагодарить Урмас Arumae для обмена коллагена протокол и Ютта Фей и Урсула Hinz за отличную техническую помощь. Кроме того, мы хотели бы поблагодарить христианских Ф. Аккерман, Ульрике Энгель и Nikon Imaging центра при университете Гейдельберга, а также Йоахим Кирш за любезно помочь для видео shoting. Работа была частично финансируется за счет Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB 592).

1. Подготовка Коллагеновые гели <ol><li> Подготовить запас среду, содержащую 455 мкл 10х MEM, 112 мкл 7,5% NaHCO 3, 50 мкл глутамина и NaOH. Концентрация и количество NaOH зависит от крысы хвост коллагена подготовки (см. п. 1.2), окончательный объем фонда среде бытия 1.000 мкл. </li><li> Подготовка крысы хвост к?...

<ol>
	<li>Ebendal, T., Rush, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Use of collagen gels to bioassay nerve growth factor activity. IBRO Handh, (1989).</li><li>Heermann, S., Schm&#195;cker, J., Hinz, U., Rickmann, M., Unterbarnscheidt, T., Schwab, M. H., Krieglstein, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuregulin+1+type+III/ErbB+signaling+is+crucial+for+Schwann+cell+colonization+of+sympathetic+axons.">Neuregulin 1 type III/ErbB signaling is crucial for Schwann cell colonization of sympathetic axons.</a> PloS One. 6 (12), e28692 (2011).</li><li>Zuo, Y., Lubischer, J. L., Kang, H., Tian, L., Mikesh, M., Marks, A., Scofield, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+proteins+expressed+in+mouse+transgenic+lines+mark+subsets+of+glia,+neurons,+macrophages,+and+dendritic+cells+for+vital+examination.">Fluorescent proteins expressed in mouse transgenic lines mark subsets of glia, neurons, macrophages, and dendritic cells for vital examination.</a> The Journal of Neuroscience. The Official Journal of the Society for Neuroscience. 24 (49), 10999-11009 (2004).</li><li>Levi-Montalcini, R., Booker, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EXCESSIVE+GROWTH+OF+THE+SYMPATHETIC+GANGLIA+EVOKED+BY+A+PROTEIN+ISOLATED+FROM+MOUSE+SALIVARY+GLANDS.">EXCESSIVE GROWTH OF THE SYMPATHETIC GANGLIA EVOKED BY A PROTEIN ISOLATED FROM MOUSE SALIVARY GLANDS.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 46 (3), 373-384 (1960).</li><li>Meintanis, S., Thomaidou, D., Jessen, K. R., Mirsky, R., Matsas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neuron-glia+signal+beta-neuregulin+promotes+Schwann+cell+motility+via+the+MAPK+pathway.">The neuron-glia signal beta-neuregulin promotes Schwann cell motility via the MAPK pathway.</a> Glia. 34 (1), 39-51 (2001).</li><li>Yamauchi, J., Miyamoto, Y., Chan, J. R., Tanoue, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ErbB2+directly+activates+the+exchange+factor+Dock7+to+promote+Schwann+cell+migration.">ErbB2 directly activates the exchange factor Dock7 to promote Schwann cell migration.</a> The Journal of cell biology. 181 (2), 351-365 (2008).</li><li>Anton, E. S., Weskamp, G., Reichardt, L. F., Matthew, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+growth+factor+and+its+low-affinity+receptor+promote+Schwann+cell+migration.">Nerve growth factor and its low-affinity receptor promote Schwann cell migration.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (7), 2795-2799 (1994).</li><li>Mahanthappa, N. K., Anton, E. S., Matthew, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+growth+factor+2,+a+soluble+neuregulin,+directly+increases+Schwann+cell+motility+and+indirectly+promotes+neurite+outgrowth.">Glial growth factor 2, a soluble neuregulin, directly increases Schwann cell motility and indirectly promotes neurite outgrowth.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 16 (15), 4673-4683 (1996).</li><li>Yamauchi, J., Chan, J. R., Shooter, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotrophins+regulate+Schwann+cell+migration+by+activating+divergent+signaling+pathways+dependent+on+Rho+GTPases.">Neurotrophins regulate Schwann cell migration by activating divergent signaling pathways dependent on Rho GTPases.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (23), 8774-8779 (2004).</li><li>Gumy, L. F., Bampton, E. T. W., Tolkovsky, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperglycaemia+inhibits+Schwann+cell+proliferation+and+migration+and+restricts+regeneration+of+axons+and+Schwann+cells+from+adult+murine+DRG.">Hyperglycaemia inhibits Schwann cell proliferation and migration and restricts regeneration of axons and Schwann cells from adult murine DRG.</a> Molecular and Cellular Neurosciences. 37 (2), 298-311 (2008).</li><li>Sakaue-Sawano, A., Kurokawa, H., Morimura, T., Hanyu, A., Hama, H., Osawa, H., Kashiwagi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+spatiotemporal+dynamics+of+multicellular+cell-cycle+progression.">Visualizing spatiotemporal dynamics of multicellular cell-cycle progression.</a> Cell. 132 (3), 487-498 (2008).</li><li>Park, D., Don, A. S., Massamiri, T., Karwa, A., Warner, B., MacDonald, J., Hemenway, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+imaging+of+cell+death+using+an+Hsp90+ligand.">Noninvasive imaging of cell death using an Hsp90 ligand.</a> Journal of the American Chemical Society. 133 (9), 2832-2835 (2011).</li><li>Shcherbo, D., Souslova, E. A., Goedhart, J., Chepurnykh, T. V., Gaintzeva, A., Shemiakina, I. I., Gadella, T. W. J., Lukyanov, S., Chudakov, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+and+reliable+FRET/FLIM+pair+of+fluorescent+proteins.">Practical and reliable FRET/FLIM pair of fluorescent proteins.</a> BMC Biotechnology. 9, 24 (2009).</li></ol>

Развитие периферической нервной системы является захватывающим процессом. При развитии завершен, аксоны ensheathed по SCs по всей длине, которая может, у людей, часто более 100 см. Для этого нужное количество необходимых SCs должно быть установлено в процессе разработки и SCs также должны двигать...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название Реагенты / Материал </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> 10x MEM </td><td> Gibco </td><td> 21430 </td><td></td></tr><tr><td> Бикарбонат натрия (7,5%) </td><td> Gibco </td><td> 25080 </td><td></td></tr><tr><td> Глутамин </td><td> Gibco </td><td> 25030 </td><td></td></tr><tr><td> NaOH </td><td> Merck </td><td> 109137 </td><td></td></tr><tr><td> NGF </td><td> Roche </td><td> 1058231 </td><td> R &amp; D # 556-NG-100 </td></tr><tr><td> Средний Neurobasal </td><td> Gibco </td><td> 21103 </td><td></td></tr><tr><td> B27 дополнения </td><td> Gibco </td><td> 17504 </td><td></td></tr><tr><td> антибиотики </td><td> Gibco </td><td> 15640 </td><td></td></tr><tr><td> D-PBS </td><td> Gibco </td><td> 14040 </td><td></td></tr><tr><td> насекомое иглы </td><td> FST </td><td> 26002-20 </td><td></td></tr><tr><td> иглу шприца </td><td> Braun </td><td></td><td> BD # 300013 </td></tr><tr><td> 8 хорошо слайд камеры </td><td> Лаборатория тек </td><td> 177402 </td><td></td></tr></tbody></table>

analyzing murine schwann cell development along growing axons

Развитие периферических нервов, интригующий процесс. Нейроны посылают аксоны иннервируют конкретные цели, которых у людей часто являются более 100 см от сомы нейрона. Выживаемость нейронов в процессе развития зависит от целевой факторы роста, но и на поддержку шванновских клеток (СК). С этой целью SC ensheath аксоны из области нейронных сома (или переход от централизованного к периферической нервной системы) к синапса или нервно-мышечного соединения. Шванновские клетки являются производными нервного гребня и мигрируют в качестве предшественников по развивающиеся аксоны, пока весь аксон покрыт SCs. Это показывает важность SC миграции для развития периферической нервной системы и подчеркивает необходимость исследовать этот процесс. Для того чтобы проанализировать SC развитие, установка необходима, который рядом с ТЦ также включает их физиологическим субстратом для миграции, аксона. В связи с внутриутробного развития <eм&gt; в естественных условиях покадровой обработки изображений, однако, не представляется возможным в плацентарной позвоночных, как мышь (муз мышцы). Чтобы обойти это, мы адаптировали верхний шейный ганглий (SCG) эксплантов техники. После лечения с фактором роста нервов (ФРН) SCG эксплантов расширить аксонов, а затем прекурсоров SC мигрируют вдоль аксонов из ганглия к периферии. Красота этой системы является то, что SC выводятся из пула эндогенных SC и что они мигрируют по своим физиологическим аксоны которых растут одновременно. Эта система особенно интригует, потому что развитие SC вдоль аксонов могут быть проанализированы покадровой обработки изображений, открытие дополнительных возможностей, чтобы получить представление миграции SC.

Рост аксонов облегчается от SCG эксплантов при обработке NGF (4) (фильм схеме S1 рисунке 1 схемы). Этот процесс хорошо виден на любой инвертированный микроскоп и может сопровождаться замедленной съемки (фильм S2). Если ученый является новым для рассечения SCG из мышиных эмбрио...

Watch this Scientific Journal Video about Analyzing Murine Schwann Cell Development Along Growing Axons at JoVE.com

Analyzing Murine Schwann Cell Development Along Growing Axons

Здесь мы опишем Шванновских клеток (СК) миграции тест, в котором SCs могут развиваться расширения аксонов.

Анализируя мышиной сотовых шванновских развития по Растущие аксоны

The  development of peripheral nerves is an intriguing process. Neurons send out  axons to innervate specific targets, which in humans are often more than ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Live Imaging of Dorsal Root Axons after Rhizotomy

Живая съемка Спинной Аксоны Корневая после ризотомия

The primary sensory axons injured by spinal root injuries fail to regenerate into the spinal cord, leading to chronic pain and permanent sensory loss. ...

Single-cell Profiling of Developing and Mature Retinal Neurons

Одноклеточный профилирования развивающихся и зрелых нейронов сетчатки

Highly specialized, but exceedingly small populations of cells play important roles in many tissues. The identification of cell-type specific markers and ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Выделение и культуры клеток нервного гребня из эмбриональных мышей нервной трубки

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Sequential Photo-bleaching to Delineate Single Schwann Cells at the Neuromuscular Junction

Последовательное фото-отбеливание разграничить отдельные клетки шванновских в нервно-мышечном соединении

Sequential photo-bleaching provides a non-invasive way to label individual SCs at the NMJ. The NMJ is the largest synapse of the mammalian nervous system ...

A Quantitative Cell Migration Assay for Murine Enteric Neural Progenitors

Количественный Анализ сотового мигрантах мышиных кишечных нейронных прародителей

Neural crest cells (NCC) are a transient and multipotent cell population that originates from the dorsal neural tube and migrates extensively throughout ...

Laser Nanosurgery of Cerebellar Axons In Vivo

Laser Nanosurgery of Cerebellar Axons In Vivo

Лазерная нанохирургии мозжечка Аксоны<em&gt; В Vivo</em

Only a few neuronal populations in the central nervous system (CNS) of adult mammals show local regrowth upon dissection of their axon. In order to ...

Live Imaging of Nicotine Induced Calcium Signaling and Neurotransmitter Release Along Ventral Hippocampal Axons

Живая съемка никотина индуцированной сигнализации кальция и высвобождение нейромедиаторов Наряду вентральной гиппокампа Аксоны

Sustained enhancement of axonal signaling and increased neurotransmitter release by the activation of pre-synaptic nicotinic acetylcholine receptors ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

В естественных условиях переноса гена к шванновских клеток в нерве Грызун седалищного путем электропорации

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Использование линейных агарозном каналов для изучения<em&gt; Drosophila</em&gt; Личиночная Ползучая Поведение

Drosophila larval crawling is emerging as a powerful model to study neural control of sensorimotor behavior. However, larval crawling behavior on flat ...

Analyzing Dendritic Morphology in Columns and Layers

Анализ Дендритные Морфология в столбцах и слоях

In many regions of the central nervous systems, such as the fly optic lobes and the vertebrate cortex, synaptic circuits are organized in layers and ...