Name: analyzing murine schwann cell development along growing axons
Uploaded: 2012-11-21T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analyzing Murine Schwann Cell Development Along Growing Axons at JoVE.com

Biz mükemmel teknik destek için bir kollajen protokol ve Jutta Fey ve Ursula Hinz paylaşmak için Urmas Arumae teşekkür etmek istiyorum. Ayrıca biz nazik Video Atış için yardım için Hıristiyan F. Ackermann, Ulrike Engel ve Heidelberg Üniversitesi Nikon Görüntüleme Merkezi ve ayrıca Joachim Kirsch teşekkür etmek istiyorum. Çalışma kısmen Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB 592) yoluyla finanse edildi.

1. Kollajen Jeller hazırlanması <ol><li> 455 ul 10x MEM, 112 ul% 7.5 NaHCO3, 50 ul glutamin ve NaOH içeren bir stok ortamı hazırlayın. Konsantrasyon ve NaOH miktarı sıçan kuyruğu kolajeni hazırlanması (1.2), 1.000 ul olmak stok orta son hacmine bağlıdır. </li><li> Ebendal (1) &#39;e göre-fare kuyruk kolajeni hazırlayın. 4 ° C&#39;de depolayın Kolajen çözeltisi Kollajen çözümün bir bozulma gözlenmemektedir. Yeni bir toplu hazırlandıktan sonra, (1.1) stok ortam i?...

<ol>
	<li>Ebendal, T., Rush, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Use of collagen gels to bioassay nerve growth factor activity. IBRO Handh, (1989).</li><li>Heermann, S., Schm&#195;cker, J., Hinz, U., Rickmann, M., Unterbarnscheidt, T., Schwab, M. H., Krieglstein, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuregulin+1+type+III/ErbB+signaling+is+crucial+for+Schwann+cell+colonization+of+sympathetic+axons.">Neuregulin 1 type III/ErbB signaling is crucial for Schwann cell colonization of sympathetic axons.</a> PloS One. 6 (12), e28692 (2011).</li><li>Zuo, Y., Lubischer, J. L., Kang, H., Tian, L., Mikesh, M., Marks, A., Scofield, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+proteins+expressed+in+mouse+transgenic+lines+mark+subsets+of+glia,+neurons,+macrophages,+and+dendritic+cells+for+vital+examination.">Fluorescent proteins expressed in mouse transgenic lines mark subsets of glia, neurons, macrophages, and dendritic cells for vital examination.</a> The Journal of Neuroscience. The Official Journal of the Society for Neuroscience. 24 (49), 10999-11009 (2004).</li><li>Levi-Montalcini, R., Booker, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EXCESSIVE+GROWTH+OF+THE+SYMPATHETIC+GANGLIA+EVOKED+BY+A+PROTEIN+ISOLATED+FROM+MOUSE+SALIVARY+GLANDS.">EXCESSIVE GROWTH OF THE SYMPATHETIC GANGLIA EVOKED BY A PROTEIN ISOLATED FROM MOUSE SALIVARY GLANDS.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 46 (3), 373-384 (1960).</li><li>Meintanis, S., Thomaidou, D., Jessen, K. R., Mirsky, R., Matsas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neuron-glia+signal+beta-neuregulin+promotes+Schwann+cell+motility+via+the+MAPK+pathway.">The neuron-glia signal beta-neuregulin promotes Schwann cell motility via the MAPK pathway.</a> Glia. 34 (1), 39-51 (2001).</li><li>Yamauchi, J., Miyamoto, Y., Chan, J. R., Tanoue, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ErbB2+directly+activates+the+exchange+factor+Dock7+to+promote+Schwann+cell+migration.">ErbB2 directly activates the exchange factor Dock7 to promote Schwann cell migration.</a> The Journal of cell biology. 181 (2), 351-365 (2008).</li><li>Anton, E. S., Weskamp, G., Reichardt, L. F., Matthew, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+growth+factor+and+its+low-affinity+receptor+promote+Schwann+cell+migration.">Nerve growth factor and its low-affinity receptor promote Schwann cell migration.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (7), 2795-2799 (1994).</li><li>Mahanthappa, N. K., Anton, E. S., Matthew, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+growth+factor+2,+a+soluble+neuregulin,+directly+increases+Schwann+cell+motility+and+indirectly+promotes+neurite+outgrowth.">Glial growth factor 2, a soluble neuregulin, directly increases Schwann cell motility and indirectly promotes neurite outgrowth.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 16 (15), 4673-4683 (1996).</li><li>Yamauchi, J., Chan, J. R., Shooter, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotrophins+regulate+Schwann+cell+migration+by+activating+divergent+signaling+pathways+dependent+on+Rho+GTPases.">Neurotrophins regulate Schwann cell migration by activating divergent signaling pathways dependent on Rho GTPases.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (23), 8774-8779 (2004).</li><li>Gumy, L. F., Bampton, E. T. W., Tolkovsky, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperglycaemia+inhibits+Schwann+cell+proliferation+and+migration+and+restricts+regeneration+of+axons+and+Schwann+cells+from+adult+murine+DRG.">Hyperglycaemia inhibits Schwann cell proliferation and migration and restricts regeneration of axons and Schwann cells from adult murine DRG.</a> Molecular and Cellular Neurosciences. 37 (2), 298-311 (2008).</li><li>Sakaue-Sawano, A., Kurokawa, H., Morimura, T., Hanyu, A., Hama, H., Osawa, H., Kashiwagi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+spatiotemporal+dynamics+of+multicellular+cell-cycle+progression.">Visualizing spatiotemporal dynamics of multicellular cell-cycle progression.</a> Cell. 132 (3), 487-498 (2008).</li><li>Park, D., Don, A. S., Massamiri, T., Karwa, A., Warner, B., MacDonald, J., Hemenway, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+imaging+of+cell+death+using+an+Hsp90+ligand.">Noninvasive imaging of cell death using an Hsp90 ligand.</a> Journal of the American Chemical Society. 133 (9), 2832-2835 (2011).</li><li>Shcherbo, D., Souslova, E. A., Goedhart, J., Chepurnykh, T. V., Gaintzeva, A., Shemiakina, I. I., Gadella, T. W. J., Lukyanov, S., Chudakov, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+and+reliable+FRET/FLIM+pair+of+fluorescent+proteins.">Practical and reliable FRET/FLIM pair of fluorescent proteins.</a> BMC Biotechnology. 9, 24 (2009).</li></ol>

Periferik sinir sisteminin gelişimi heyecan verici bir süreçtir. Gelişimi tamamlandıktan sonra, aksonların, insanlarda, sık sık, 100 cm olabilir tüm uzunluğu boyunca, SKS ile ensheathed edilir. Bu amaca yönelik olarak, gerekli SCs sayısı doğru gelişme sırasında oluşturulmalıdır ve SCs da tam kapsamı sağlamak aksonal için çevre uzanan akson boyunca hareket etmek zorunda. Bu miyelinli hem de için unmeylinated aksonlar için de geçerlidir. Her iki durumda da tüm aksonların SCs ile temas halinde ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Malzeme Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> 10x MEM </td><td> Gibco </td><td> 21430 </td><td></td></tr><tr><td> Sodyum Bikarbonat (% 7.5) </td><td> Gibco </td><td> 25080 </td><td></td></tr><tr><td> Glutamin </td><td> Gibco </td><td> 25030 </td><td></td></tr><tr><td> NaOH </td><td> Merck </td><td> 109137 </td><td></td></tr><tr><td> NGF </td><td> Roche </td><td> 1058231 </td><td> ARGE # 556-NG-100 </td></tr><tr><td> Neurobasal Orta </td><td> Gibco </td><td> 21103 </td><td></td></tr><tr><td> B27 Supplement </td><td> Gibco </td><td> 17504 </td><td></td></tr><tr><td> antibiyotikler </td><td> Gibco </td><td> 15640 </td><td></td></tr><tr><td> d-PBS </td><td> Gibco </td><td> 14040 </td><td></td></tr><tr><td> Böcek iğneleri </td><td> FST </td><td> 26002-20 </td><td></td></tr><tr><td> şırınga iğnesi </td><td> Braun </td><td></td><td> BD # 300013 </td></tr><tr><td> 8 de kamara slayt </td><td> Lab tek </td><td> 177402 </td><td></td></tr></tbody></table>

analyzing murine schwann cell development along growing axons

Periferik sinirlerin gelişimi ilginç bir süreçtir. Nöronlar insanlarda 100&#39;den fazla cm uzaklıkta nöronun soma gelen genellikle belirli hedeflere, innerve aksonlar gönderir. Gelişme sırasında nöronal hayatta kalma hedef türevi büyüme faktörleri üzerinde değil, aynı zamanda Schwann hücreleri (SC&#39;ler) bir desteğe bağlıdır. Sinaps veya nöromuskuler kavşağa nöronal soma (veya merkezi periferik sinir sistemine geçiş) bölgesinden Bu amaçla SC ensheath aksonlar için. Schwann hücreleri nöral krest türevleri ve tüm akson SC&#39;ler ile kaplıdır kadar çıkan aksonlar boyunca habercileri olarak göç ederler. Bu periferik sinir sisteminin gelişimi için SC göçün önemini göstermektedir ve bu sürecin araştırılması gerekliliğini vurgulamaktadır. SC gelişme analiz etmek için, bir ayar da geçiş için onların fizyolojik alt tabaka, akson içeren SCs yanında olan ihtiyaç vardır. Intrauterin gelişme nedeniyle <em&gt; in vivo time-lapse görüntüleme, ancak, (Mus musculus) fare gibi plasental omurgalılarda mümkün değildir. Bunu aşmak için, biz üstün servikal ganglion (SCG) eksplant tekniği uyarlanmıştır. Sinir büyüme faktörü (NGF) ile tedavi üzerine SCG eksplantlar gangliyondan çevreye aksonları boyunca göç SC öncüleri takip aksonlar uzatmak. Bu sistemin güzelliği SC endojen SC bir havuz ve onlar aynı anda büyüyor kendi fizyolojik aksonlar boyunca göç ettiğini elde olmasıdır. Aksonlar boyunca SC gelişimi SC göç içgörüler kazanmak için başka imkanların açıldığı, time-lapse görüntüleme ile analiz edilebilir, çünkü bu sistem, özellikle şaşırtıcıdır.

Aksonal büyüme NGF (4) (film düzeni S1 Şekil 1 düzeni) ile muamele üzerine ikinci eksplantlar SCG kolaylaştırılır. Bu işlem herhangi bir inverted mikroskop ile görülebilen ve time-lapse görüntüleme (film S2) takip edilebilir. Bir bilim adamı fare embriyoları SCG diseksiyon için yeni ise şiddetle basit bir anti-tirozin hidroksilaz (TH) immünohistokimyasal olarak tekniğin bir doğrulama öneririz. TH etiketi aksonlar (Şekil 2B) katekolaminerjik nör...

Watch this Scientific Journal Video about Analyzing Murine Schwann Cell Development Along Growing Axons at JoVE.com

Analyzing Murine Schwann Cell Development Along Growing Axons

Burada SC&#39;ler uzanan aksonlar boyunca geliştirmek için mümkün olduğu bir Schwann hücresi (SC) göç tahlil tarif.

Büyüyen Aksonlar boyunca murin Schwann Hücresi Kalkınma Analizi

The  development of peripheral nerves is an intriguing process. Neurons send out  axons to innervate specific targets, which in humans are often more than ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Live Imaging of Dorsal Root Axons after Rhizotomy

Rizotomi sonra Dorsal Kök Aksonlar Canlı Görüntüleme

The primary sensory axons injured by spinal root injuries fail to regenerate into the spinal cord, leading to chronic pain and permanent sensory loss. ...

Single-cell Profiling of Developing and Mature Retinal Neurons

Gelişen ve Olgun Retina Nöronlar Tek hücreli Profilleme

Highly specialized, but exceedingly small populations of cells play important roles in many tissues. The identification of cell-type specific markers and ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Embriyonik Mürin Nöral Tüp çıkan sinirsel Crest Hücre İzolasyonu ve Kültür

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Sequential Photo-bleaching to Delineate Single Schwann Cells at the Neuromuscular Junction

Sıralı Nöromusküler Kavşağı&#39;nda Tek Schwann Hücreleri belirginleştiren Photo-beyazlatma

Sequential photo-bleaching provides a non-invasive way to label individual SCs at the NMJ. The NMJ is the largest synapse of the mammalian nervous system ...

A Quantitative Cell Migration Assay for Murine Enteric Neural Progenitors

Kemirgen Enterik Sinir progenitörlerin için Kantitatif Hücre Göç Tahlili

Neural crest cells (NCC) are a transient and multipotent cell population that originates from the dorsal neural tube and migrates extensively throughout ...

Laser Nanosurgery of Cerebellar Axons In Vivo

Laser Nanosurgery of Cerebellar Axons In Vivo

Serebellar Aksonlar Lazer Nanosurgery<em&gt; In Vivo</em

Only a few neuronal populations in the central nervous system (CNS) of adult mammals show local regrowth upon dissection of their axon. In order to ...

Live Imaging of Nicotine Induced Calcium Signaling and Neurotransmitter Release Along Ventral Hippocampal Axons

Nikotin Kaynaklı Kalsiyum Sinyali ve ventral Hipokampal Aksonlar boyunca Nörotransmitter Release Canlı Görüntüleme

Sustained enhancement of axonal signaling and increased neurotransmitter release by the activation of pre-synaptic nicotinic acetylcholine receptors ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

Elektroporasyon tarafından Kemirgen Siyatik Sinir Schwann Hücreleri için Vivo Gen Transferi

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Doğrusal Agaroz Kanallar kullanarak Okuyacak<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva Tarama Davranış

Drosophila larval crawling is emerging as a powerful model to study neural control of sensorimotor behavior. However, larval crawling behavior on flat ...

Analyzing Dendritic Morphology in Columns and Layers

Sütunlar ve Katmanlar dendritik Morfoloji Analizi

In many regions of the central nervous systems, such as the fly optic lobes and the vertebrate cortex, synaptic circuits are organized in layers and ...