Name: skin tattooing as a novel approach for dna vaccine delivery
Uploaded: 2012-10-18T13:00:00
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Wir möchten alle Mitglieder der Kong Lab und Dr. Yan Deng am Microscopy Core, Office of Collaborative Wissenschaft, NYUMC danken für ihre Unterstützung und technischen Support. Diese Arbeit wurde von einem Piloten Zuschuss von der New York University Center for AIDS Research (CFAR, NIH AI027742) unterstützt.

Ein. Plasmid DNA Purification <ol><li> Wandeln Sie die eukaryontischen Plasmid DNA, EGFP (pCX-EGFP) in DH5 E.coli kompetenten Zellen. Der leere pCX Vektor kann auch als negative Kontrolle verwendet werden. </li><li> Kultur und Ernte die DH5a E.coli Zellen und reinigen die pDNA nach dem Qiagen EndoFree Plasmid Purification Handbook. </li><li> Filter pDNA Lösung durch einen 0,22 um PVDF Sterilfilter, und speichern Sie sie bei -20 ° C bis zur Verwendung. </li></ol> 2. Tattoo Syst...

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	<li>Bins, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+and+potent+DNA+vaccination+strategy+defined+by+in+vivo+monitoring+of+antigen+expression.">A rapid and potent DNA vaccination strategy defined by in vivo monitoring of antigen expression.</a> Nat Med. 11, 899-904 (2005).</li><li>Pokorna, D., Rubio, I., Muller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA-vaccination+via+tattooing+induces+stronger+humoral+and+cellular+immune+responses+than+intramuscular+delivery+supported+by+molecular+adjuvants.">DNA-vaccination via tattooing induces stronger humoral and cellular immune responses than intramuscular delivery supported by molecular adjuvants.</a> Genet. Vaccines Ther. 6, 4 (2008).</li><li>van den Berg, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+intradermal+vaccination+by+DNA+tattooing+in+human+skin.">Optimization of intradermal vaccination by DNA tattooing in human skin.</a> Hum. Gene Ther. 20, 181-189 (2009).</li><li>Liu, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+vaccines:+a+review.">DNA vaccines: a review.</a> J. Intern. Med. 253, 402-410 (2003).</li><li>Koide, Y., Nagata, T., Yoshida, A., Uchijima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+vaccines.">DNA vaccines.</a> Jpn. J. Pharmacol. 83, 167-174 (2000).</li><li>Peachman, K. K., Rao, M., Alving, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+DNA+through+the+skin.">Immunization with DNA through the skin.</a> Methods. 31, 232-242 (2003).</li><li>Verstrepen, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+HIV-1+specific+T-cell+responses+by+short-interval+DNA+tattooing+as+compared+to+intramuscular+immunization+in+non-human+primates.">Improved HIV-1 specific T-cell responses by short-interval DNA tattooing as compared to intramuscular immunization in non-human primates.</a> Vaccine. 26, 3346-3351 (2008).</li><li>Potthoff, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunogenicity+and+efficacy+of+intradermal+tattoo+immunization+with+adenoviral+vector+vaccines.">Immunogenicity and efficacy of intradermal tattoo immunization with adenoviral vector vaccines.</a> Vaccine. 27, 2768-2774 (2009).</li><li>Quaak, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+tattoo+vaccination:+effect+on+plasmid+purity+and+transfection+efficiency+of+different+topoisoforms.">DNA tattoo vaccination: effect on plasmid purity and transfection efficiency of different topoisoforms.</a> J. Control Release. 139, 153-159 (2009).</li><li>Pokorna, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccination+with+human+papillomavirus+type+16-derived+peptides+using+a+tattoo+device.">Vaccination with human papillomavirus type 16-derived peptides using a tattoo device.</a> Vaccine. 27, 3519-3529 (2009).</li></ol>

DNA-Impfung gilt als sicherer als herkömmliche Impfstrategien, da sie nicht verlangen, Manipulation oder aussetzen Impfstoffe, live oder abgeschwächte Erreger 4. Jedoch hängt das Ergebnis der DNA-Vakzinierung stark von der Lieferroute. Haut ist reichlich in Antigen-präsentierende Zellen, wie Langerhans-Zellen und dendritischen Zellen 1 und damit eine ideale Ort für die Immunisierung im Hinblick auf Immunogenität und leichte Zugänglichkeit 5,6. Als Ergebnis ist intradermale Impfstr...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenz / Material </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> pCX-EGFP-Plasmid-DNA </td><td> Clontech </td><td></td><td></td></tr><tr><td> STEALTH Rotary Tattoo-System </td><td> Weltweit Tattoo Supply </td><td> STEALTH-L </td><td></td></tr><tr><td> Tattoo Nadeln </td><td> Weltweit Tattoo Supply </td><td> 1207RSB </td><td></td></tr><tr><td> EndoFree Plasmid Maxi Kit </td><td> Qiagen </td><td> 12362 </td><td></td></tr><tr><td> 0,22 um PVDF Sterilfilter </td><td> Millipore </td><td> SLGV013SL </td><td></td></tr><tr><td> elektrischen Haarschneider </td><td> Kommerziell erhältliche </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Einweg-Rasierapparate </td><td> Kommerziell erhältliche </td><td></td><td></td></tr><tr><td> SilberSulfadiazin-Creme </td><td> Watson </td><td> NDC 0591-0810-55 </td><td></td></tr><tr><td> Ketamin HCL </td><td></td><td> NDC 0856-2012-01 </td><td></td></tr><tr><td> Zylazine sterilen Lösung </td><td></td><td> NADA 139-236 </td><td></td></tr></tbody></table>

skin tattooing as a novel approach for dna vaccine delivery

Nukleinsäure-basierte Impfungen ist ein Thema von wachsendem Interesse, insbesondere Plasmid-DNA (pDNA) Codieren immunologisch wichtigen Antigenen. Nachdem sich das manipulierte pDNA den Impfstoffen verabreicht wird, wird es transkribiert und übersetzt in Immunogen Proteine, die Antworten des Immunsystems auslösen kann. Viele Wege zur Umsetzung der DNA-Impfstoffe untersucht worden, aber jede Lieferung Strecke hat seine eigenen Vorteile und Fallstricke. Haut Tätowieren ist eine neuartige Technik, die sicher, kostengünstig und bequem ist. Darüber hinaus könnten die Einstiche von der Nadel zugefügt auch als potente Adjuvans dienen. Hier haben wir a) zeigen die intradermalen Verabreichen von Plasmid DNA, die verstärkt grün fluoreszierende Protein (EGFP pCX-) in einem Maus-Modell unter Verwendung eines Geräts Tätowieren und b) bestätigen die effektive Expression von EGFP in den Hautzellen mittels konfokaler Mikroskopie.

Die Expression von EGFP mit einem Anregungsfilter Peak bei 488 nm und Emissionspeak bei 509 nm kann in Hautzellen von Mäusen beobachtet werden. Aus einer 1,875 ug Dosis von DNA, die etwa 3 × 10 17 Kopien des Plasmids, wir typischerweise beobachtet 10-20 EGFP Signale in den 1 cm 2 tätowierten Bereich. Diese relativ geringe Anzahl von transfizierten Zellen ist konsistent mit den Ergebnissen einer früheren Studie 3. Das EGFP-Expression (Abbildung 1) liefert den Beweis, ...

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Skin Tattooing As A Novel Approach For DNA Vaccine Delivery

Haut Tätowieren ist ein potenter und sicheren Weg zur Auslieferung DNA-Impfstoff intradermal. Hier wird ein DNA-Plasmid kodiert EGFP durch Tätowierung auf der Haut eines Labormaus geliefert, und die Expression von EGFP in den Hautzellen wird dann durch konfokale Mikroskopie untersucht.

Haut Tätowieren als einen neuartigen Ansatz für DNA Vaccine Lieferung

Nucleic acid-based vaccination is a topic of growing interest, especially plasmid DNA (pDNA) encoding immunologically important antigens. After the ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Cell Squeezing as a Robust, Microfluidic Intracellular Delivery Platform

Zellzusammendrücken als Robust, Mikrofluidik Intrazelluläre Delivery Platform

Rapid mechanical deformation of cells has emerged as a promising, vector-free method for intracellular delivery of macromolecules and nanomaterials. This ...

Forschung

Biotechnik

An Improved Method for the Preparation of Type I Collagen From Skin

Ein verbessertes Verfahren zur Herstellung von Typ I-Kollagen aus der Haut

Soluble type 1 collagen (COL1) is used extensively as an adhesive substrate for cell cultures and as a cellular scaffold for regenerative applications. ...

Characterization of Complex Systems Using the Design of Experiments Approach: Transient Protein Expression in Tobacco as a Case Study

Charakterisierung komplexer Systeme Mit dem Design of Experiments Ansatz: Transient Protein Expression in Tabak als Case Study

Plants provide multiple benefits for the production of biopharmaceuticals including low costs, scalability, and safety. Transient expression offers the ...

A Full Skin Defect Model to Evaluate Vascularization of Biomaterials In Vivo

A Full Skin Defect Model to Evaluate Vascularization of Biomaterials In Vivo

Ein Vollhautdefekt Modell zur Vaskularisierung von Biomaterialien Bewerten<em&gt; In Vivo</em

Insufficient vascularization is considered to be one of the main factors limiting the clinical success of tissue-engineered constructs. In order to ...

Microscale Vortex-assisted Electroporator for Sequential Molecular Delivery

Microscale Vortex-unterstützte Electroporator für Sequential Molekulare Liefer

Electroporation has received increasing attention in the past years, because it is a very powerful technique for physically introducing non-permeant ...

Fabrication of a Functionalized Magnetic Bacterial Nanocellulose with Iron Oxide Nanoparticles

Die Herstellung einer funktionalisierter magnetischer bakterielle Nanocellulose mit Eisenoxid-Nanopartikel

In this study, bacterial nanocellulose (BNC) produced by the bacteria Gluconacetobacter xylinus is synthesized and impregnated in situ with iron oxide ...

Development of a Multicellular Three-dimensional Organotypic Model of the Human Intestinal Mucosa Grown Under Microgravity

Entwicklung eines unter Schwerelosigkeits Vielzellige Dreidimensionale Organotypischen Modell des menschlichen Darmschleimhaut Grown

Because cells growing in a three-dimensional (3-D) environment have the potential to bridge many gaps of cell cultivation in 2-D environments (e.g., ...

Mesenchymal Stromal Cell Culture and Delivery in Autologous Conditions: A Smart Approach for Orthopedic Applications

Mesenchymale Stromazellen Zellkultur und Lieferung in Autologe Bedingungen: Ein intelligenter Ansatz für orthopädische Anwendungen

Human Mesenchymal Stromal Cells (hMSCs) are cultured in vitro with different media. Limits on their use in clinical settings, however, mainly depend on ...

DNA Nanotubes as a Versatile Tool to Study Semiflexible Polymers

DNA-Nanoröhren als ein vielseitiges Werkzeug, semiflexiblen Polymere zu studieren

Mechanical properties of complex, polymer-based soft matter, such as cells or biopolymer networks, can be understood in neither the classical frame of ...

Bioprinting of Cartilage and Skin Tissue Analogs Utilizing a Novel Passive Mixing Unit Technique for Bioink Precellularization

Bioprinting von Knorpel und Haut-Gewebe-Analoga nutzen eine neuartige Passive Einheit Mischtechnik für Bioink Precellularization

Bioprinting is a powerful technique for the rapid and reproducible fabrication of constructs for tissue engineering applications. In this study, both ...