Name: skin tattooing as a novel approach for dna vaccine delivery
Uploaded: 2012-10-18T13:00:00
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Vorremmo ringraziare tutti i membri del Laboratorio Kong e il dottor Yan Deng al Nucleo Microscopia, Office of Science Collaborative, NYUMC per la loro assistenza e supporto tecnico. Questo lavoro è stato sostenuto da una borsa di studio pilota della New York University Center for AIDS Research (CFAR, sovvenzione del NIH AI027742).

1. Purificazione del DNA plasmidico <ol><li> Trasformare il eucariotica plasmide DNA codificante EGFP (pcx-EGFP) in DH5a cellule E.coli competenti. Il vettore vuoto PCX può anche essere utilizzato come controllo negativo. </li><li> Cultura e raccogliere le cellule E.coli DH5a e purificare il pDNA secondo il Manuale Purificazione EndoFree Qiagen Plasmid. </li><li> Filtrare la soluzione attraverso un pDNA 0,22 micron PVDF filtro sterile, e conservarlo a -20 ° C fino all&#39;uso. </li></ol><p class="j...

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	<li>Bins, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+and+potent+DNA+vaccination+strategy+defined+by+in+vivo+monitoring+of+antigen+expression.">A rapid and potent DNA vaccination strategy defined by in vivo monitoring of antigen expression.</a> Nat Med. 11, 899-904 (2005).</li><li>Pokorna, D., Rubio, I., Muller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA-vaccination+via+tattooing+induces+stronger+humoral+and+cellular+immune+responses+than+intramuscular+delivery+supported+by+molecular+adjuvants.">DNA-vaccination via tattooing induces stronger humoral and cellular immune responses than intramuscular delivery supported by molecular adjuvants.</a> Genet. Vaccines Ther. 6, 4 (2008).</li><li>van den Berg, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+intradermal+vaccination+by+DNA+tattooing+in+human+skin.">Optimization of intradermal vaccination by DNA tattooing in human skin.</a> Hum. Gene Ther. 20, 181-189 (2009).</li><li>Liu, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+vaccines:+a+review.">DNA vaccines: a review.</a> J. Intern. Med. 253, 402-410 (2003).</li><li>Koide, Y., Nagata, T., Yoshida, A., Uchijima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+vaccines.">DNA vaccines.</a> Jpn. J. Pharmacol. 83, 167-174 (2000).</li><li>Peachman, K. K., Rao, M., Alving, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+DNA+through+the+skin.">Immunization with DNA through the skin.</a> Methods. 31, 232-242 (2003).</li><li>Verstrepen, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+HIV-1+specific+T-cell+responses+by+short-interval+DNA+tattooing+as+compared+to+intramuscular+immunization+in+non-human+primates.">Improved HIV-1 specific T-cell responses by short-interval DNA tattooing as compared to intramuscular immunization in non-human primates.</a> Vaccine. 26, 3346-3351 (2008).</li><li>Potthoff, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunogenicity+and+efficacy+of+intradermal+tattoo+immunization+with+adenoviral+vector+vaccines.">Immunogenicity and efficacy of intradermal tattoo immunization with adenoviral vector vaccines.</a> Vaccine. 27, 2768-2774 (2009).</li><li>Quaak, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+tattoo+vaccination:+effect+on+plasmid+purity+and+transfection+efficiency+of+different+topoisoforms.">DNA tattoo vaccination: effect on plasmid purity and transfection efficiency of different topoisoforms.</a> J. Control Release. 139, 153-159 (2009).</li><li>Pokorna, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccination+with+human+papillomavirus+type+16-derived+peptides+using+a+tattoo+device.">Vaccination with human papillomavirus type 16-derived peptides using a tattoo device.</a> Vaccine. 27, 3519-3529 (2009).</li></ol>

Vaccinazione DNA è considerato più sicuro di strategie di vaccinazione tradizionali in quanto non richiede la manipolazione dei, o esporre i vaccini a patogeni, vivi o attenuati 4. Tuttavia, il risultato della vaccinazione DNA dipende fortemente percorso di consegna. Pelle è abbondante in cellule presentanti l&#39;antigene, come le cellule di Langerhans e cellule dendritiche 1, e quindi un luogo ideale per l&#39;immunizzazione in termini di immunogenicità e facilità di accesso 5,6. ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente / materiale </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> pcx-EGFP DNA plasmidico </td><td> Clontech </td><td></td><td></td></tr><tr><td> STEALTH Sistema Tattoo Rotary </td><td> Tattoo Supply tutto il mondo </td><td> STEALTH-L </td><td></td></tr><tr><td> Aghi per tatuaggio </td><td> Tattoo Supply tutto il mondo </td><td> 1207RSB </td><td></td></tr><tr><td> EndoFree Kit Maxi Plasmid </td><td> Qiagen </td><td> 12362 </td><td></td></tr><tr><td> 0,22 um PVDF filtro sterile </td><td> Millipore </td><td> SLGV013SL </td><td></td></tr><tr><td> capelli trimmer elettrico </td><td> Disponibile in commercio </td><td></td><td></td></tr><tr><td> monouso rasoi di sicurezza </td><td> Disponibile in commercio </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ArgentoSulfadiazine Crema </td><td> Watson </td><td> NDC 0591-0810-55 </td><td></td></tr><tr><td> Ketamina HCL </td><td></td><td> NDC 0856-2012-01 </td><td></td></tr><tr><td> Zylazine soluzione sterile </td><td></td><td> NADA 139-236 </td><td></td></tr></tbody></table>

skin tattooing as a novel approach for dna vaccine delivery

A base di acido nucleico vaccinazione è un argomento di crescente interesse, in particolare del DNA plasmidico (pDNA), che codifica gli antigeni immunologicamente importanti. Dopo la pDNA ingegneria è somministrato ai vaccini, si trascritta e tradotta in proteine ​​immunogeno che possono suscitare risposte dal sistema immunitario. Molti modi di fornitura di vaccini a DNA sono stati indagati, ma ogni percorso di consegna ha i suoi vantaggi e le insidie. Tatuaggio della pelle è una nuova tecnica che è sicuro, economico e conveniente. Inoltre, le punture inflitte da dell&#39;ago potrebbe anche servire come un potente adiuvante. Qui, a) dimostrare l&#39;erogazione intradermica di codifica DNA plasmidico maggiore proteina verde fluorescente (PCX-EGFP) in un modello di topo usando un dispositivo di tatuaggi e b) confermare l&#39;espressione efficace EGFP nelle cellule della pelle utilizzando la microscopia confocale.

L&#39;espressione di EGFP con un picco di eccitazione a 488 nm e picco di emissione a 509 nm può essere osservata in cellule di topo. Da una dose di 1,875 pg di DNA, contenente circa 3 × 10 17 copie del plasmide, si osserva tipicamente 10-20 segnali eGFP in 1 cm 2 tatuato zona. Questo numero relativamente basso di cellule trasfettate è coerente con i risultati di uno studio precedente 3. L&#39;espressione EGFP (Figura 1) fornisce la prova che è stato consegnato plasm...

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Skin Tattooing As A Novel Approach For DNA Vaccine Delivery

Tatuaggio della pelle è un modo potente e sicuro per la consegna del DNA vaccino intradermica. Qui, un plasmide EGFP codifica DNA viene consegnato da tatuaggio alla pelle di un topo di laboratorio, e l&#39;espressione di EGFP in cellule della pelle viene poi controllata mediante microscopia confocale.

Pelle tatuaggio come un nuovo approccio per la consegna del DNA vaccino

Nucleic acid-based vaccination is a topic of growing interest, especially plasmid DNA (pDNA) encoding immunologically important antigens. After the ...

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