Name: skin tattooing as a novel approach for dna vaccine delivery
Uploaded: 2012-10-18T13:00:00
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Gostaríamos de agradecer a todos os membros do Laboratório Kong e Yan Dr. Deng no Gabinete de Microscopia Core, da Ciência Colaborativa, NYUMC por sua assistência e suporte técnico. Este trabalho foi financiado por uma doação de piloto da New York University Center for AIDS Research (CFAR, NIH concessão AI027742).

1. A purificação do ADN plasmídico <ol><li> Transformar o plasmídeo de DNA eucariótico que codifica EGFP (PCX-EGFP) em células de E. coli DH5a competentes. O vector PCX vazio pode também ser usado como um controlo negativo. </li><li> Cultura e colheita das células de E. coli DH5a e purifica-se o pDNA de acordo com o Qiagen EndoFree Plasmid Purification Handbook. </li><li> Filtrar através de uma solução de pDNA PVDF de 0,22 um filtro esterilizado, e armazená-lo a -20 ° C até à sua utili...

<ol>
	<li>Bins, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+and+potent+DNA+vaccination+strategy+defined+by+in+vivo+monitoring+of+antigen+expression.">A rapid and potent DNA vaccination strategy defined by in vivo monitoring of antigen expression.</a> Nat Med. 11, 899-904 (2005).</li><li>Pokorna, D., Rubio, I., Muller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA-vaccination+via+tattooing+induces+stronger+humoral+and+cellular+immune+responses+than+intramuscular+delivery+supported+by+molecular+adjuvants.">DNA-vaccination via tattooing induces stronger humoral and cellular immune responses than intramuscular delivery supported by molecular adjuvants.</a> Genet. Vaccines Ther. 6, 4 (2008).</li><li>van den Berg, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+intradermal+vaccination+by+DNA+tattooing+in+human+skin.">Optimization of intradermal vaccination by DNA tattooing in human skin.</a> Hum. Gene Ther. 20, 181-189 (2009).</li><li>Liu, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+vaccines:+a+review.">DNA vaccines: a review.</a> J. Intern. Med. 253, 402-410 (2003).</li><li>Koide, Y., Nagata, T., Yoshida, A., Uchijima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+vaccines.">DNA vaccines.</a> Jpn. J. Pharmacol. 83, 167-174 (2000).</li><li>Peachman, K. K., Rao, M., Alving, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+DNA+through+the+skin.">Immunization with DNA through the skin.</a> Methods. 31, 232-242 (2003).</li><li>Verstrepen, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+HIV-1+specific+T-cell+responses+by+short-interval+DNA+tattooing+as+compared+to+intramuscular+immunization+in+non-human+primates.">Improved HIV-1 specific T-cell responses by short-interval DNA tattooing as compared to intramuscular immunization in non-human primates.</a> Vaccine. 26, 3346-3351 (2008).</li><li>Potthoff, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunogenicity+and+efficacy+of+intradermal+tattoo+immunization+with+adenoviral+vector+vaccines.">Immunogenicity and efficacy of intradermal tattoo immunization with adenoviral vector vaccines.</a> Vaccine. 27, 2768-2774 (2009).</li><li>Quaak, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+tattoo+vaccination:+effect+on+plasmid+purity+and+transfection+efficiency+of+different+topoisoforms.">DNA tattoo vaccination: effect on plasmid purity and transfection efficiency of different topoisoforms.</a> J. Control Release. 139, 153-159 (2009).</li><li>Pokorna, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccination+with+human+papillomavirus+type+16-derived+peptides+using+a+tattoo+device.">Vaccination with human papillomavirus type 16-derived peptides using a tattoo device.</a> Vaccine. 27, 3519-3529 (2009).</li></ol>

Vacinação de DNA é considerada mais segura do que as estratégias de vacinação tradicional, uma vez que não requer manipulação de, ou expor as vacinas, agentes patogénicos vivos ou atenuados 4. No entanto, o resultado da vacinação de DNA depende fortemente da via de administração. A pele é abundante em células apresentadoras de antigénio, tais como células de Langerhans e células dendríticas 1, e, portanto, um local ideal para a imunização em termos de imunogenicidade e facilid...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente / Material </td><td> Companhia </td><td> Número de Catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> PCX-DNA do plasmídeo EGFP </td><td> Clontech </td><td></td><td></td></tr><tr><td> STEALTH Sistema Tattoo Rotary </td><td> Fonte Tattoo Mundial </td><td> STEALTH L- </td><td></td></tr><tr><td> Agulhas de tatuagem </td><td> Fonte Tattoo Mundial </td><td> 1207RSB </td><td></td></tr><tr><td> EndoFree Plasmid Maxi Kit </td><td> Qiagen </td><td> 12362 </td><td></td></tr><tr><td> PVDF de 0,22 um filtro estéril </td><td> Millipore </td><td> SLGV013SL </td><td></td></tr><tr><td> máquina de cortar cabelo elétrica </td><td> Comercialmente disponível </td><td></td><td></td></tr><tr><td> descartável segurança navalhas </td><td> Comercialmente disponível </td><td></td><td></td></tr><tr><td> PrataSulfadiazina </td><td> Watson </td><td> NDC 0591-0810-55 </td><td></td></tr><tr><td> Cetamina HCL </td><td></td><td> NDC 0856-2012-01 </td><td></td></tr><tr><td> Solução Estéril Zylazine </td><td></td><td> NADA 139-236 </td><td></td></tr></tbody></table>

skin tattooing as a novel approach for dna vaccine delivery

Vacinação à base de ácido nucléico é um tema de interesse crescente, especialmente DNA plasmídeo (pDNA) codificando antígenos imunologicamente importantes. Após o pDNA engenharia é administrado às vacinas, é transcrita e traduzida em proteínas de imunogénio, que pode eliciar respostas do sistema imunológico. Muitas formas de entrega de vacinas de DNA têm sido investigados, mas cada rota de entrega tem suas próprias vantagens e armadilhas. Tatuagem da pele é uma nova técnica que é seguro, eficaz e conveniente. Além disso, as perfurações provocadas pela agulha pode também servir como um adjuvante potente. Aqui, a) demonstrar a entrega intradérmica de codificação de ADN do plasmídeo melhorada da proteína verde fluorescente (EGFP-PCX) num modelo de ratinho utilizando um dispositivo de tatuagem e b) confirmar a expressão eficaz de GFP em células da pele, utilizando microscopia confocal.

A expressão de EGFP, com um pico de excitação a 488 nm e pico de emissão a 509 nm pode ser observado nas células da pele do rato. A partir de uma dose de 1,875 ug de DNA, contendo cerca de 3 x 10 17 cópias do plasmídeo, que tipicamente observada 10-20 sinais EGFP em de 1 cm 2 área tatuada. Este número relativamente baixo de células transfectadas é consistente com os resultados de um estudo anterior 3. A expressão de EGFP (Figura 1) proporciona a evidência de...

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Skin Tattooing As A Novel Approach For DNA Vaccine Delivery

Tatuagem pele é um modo poderoso e seguro para a entrega de vacinas de ADN por via intradérmica. Aqui, um DNA que codifica EGFP plasmídeo é entregue por tatuagem na pele de um rato de laboratório, e a expressão de GFP em células da pele é então inspeccionado por microscopia confocal.

Pele a tatuagem como uma nova abordagem para a Campanha de Vacinação de DNA

Nucleic acid-based vaccination is a topic of growing interest, especially plasmid DNA (pDNA) encoding immunologically important antigens. After the ...

Research

JoVE Journal

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Caracterização de Sistemas Complexos Usando o Projeto de Experimentos Abordagem: Transient Protein Expression em tabaco como um Estudo de Caso

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Microescala Electroporator para entrega Sequential Molecular assistida por Vortex

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Mesenchymal Stromal Cell Culture and Delivery in Autologous Conditions: A Smart Approach for Orthopedic Applications

Estromais mesenquimais cultura de células e Entrega em condições autólogas: Uma abordagem inteligente para aplicações ortopédicas

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Bioprinting of Cartilage and Skin Tissue Analogs Utilizing a Novel Passive Mixing Unit Technique for Bioink Precellularization

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