Name: skin tattooing as a novel approach for dna vaccine delivery
Uploaded: 2012-10-18T13:00:00
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Nos gustaría dar las gracias a todos los miembros del Laboratorio Kong y el Dr. Yan Deng en Microscopy Core, Oficina de Ciencia Colaborativa, NYUMC por su asistencia y apoyo técnico. Este trabajo fue apoyado por una subvención piloto de la New York University Center for AIDS Research (CFAR, NIH subvención AI027742).

1. Purificación de ADN plásmido <ol><li> Transformar el plásmido de ADN eucariótico que codifica la EGFP (PCX-EGFP) en células de E. coli DH5a competentes. El vector vacío PCX también puede ser utilizado como un control negativo. </li><li> Cultura y cosechar las células DH5a de E. coli y se purifica el pDNA de acuerdo con el Manual de Qiagen EndoFree purificación de plásmidos. </li><li> Filtrar pDNA solución a través de un 0,22 m PVDF filtro estéril, y almacenar a -20 ° C hasta su uso. ...

<ol>
	<li>Bins, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+and+potent+DNA+vaccination+strategy+defined+by+in+vivo+monitoring+of+antigen+expression.">A rapid and potent DNA vaccination strategy defined by in vivo monitoring of antigen expression.</a> Nat Med. 11, 899-904 (2005).</li><li>Pokorna, D., Rubio, I., Muller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA-vaccination+via+tattooing+induces+stronger+humoral+and+cellular+immune+responses+than+intramuscular+delivery+supported+by+molecular+adjuvants.">DNA-vaccination via tattooing induces stronger humoral and cellular immune responses than intramuscular delivery supported by molecular adjuvants.</a> Genet. Vaccines Ther. 6, 4 (2008).</li><li>van den Berg, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+intradermal+vaccination+by+DNA+tattooing+in+human+skin.">Optimization of intradermal vaccination by DNA tattooing in human skin.</a> Hum. Gene Ther. 20, 181-189 (2009).</li><li>Liu, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+vaccines:+a+review.">DNA vaccines: a review.</a> J. Intern. Med. 253, 402-410 (2003).</li><li>Koide, Y., Nagata, T., Yoshida, A., Uchijima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+vaccines.">DNA vaccines.</a> Jpn. J. Pharmacol. 83, 167-174 (2000).</li><li>Peachman, K. K., Rao, M., Alving, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+DNA+through+the+skin.">Immunization with DNA through the skin.</a> Methods. 31, 232-242 (2003).</li><li>Verstrepen, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+HIV-1+specific+T-cell+responses+by+short-interval+DNA+tattooing+as+compared+to+intramuscular+immunization+in+non-human+primates.">Improved HIV-1 specific T-cell responses by short-interval DNA tattooing as compared to intramuscular immunization in non-human primates.</a> Vaccine. 26, 3346-3351 (2008).</li><li>Potthoff, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunogenicity+and+efficacy+of+intradermal+tattoo+immunization+with+adenoviral+vector+vaccines.">Immunogenicity and efficacy of intradermal tattoo immunization with adenoviral vector vaccines.</a> Vaccine. 27, 2768-2774 (2009).</li><li>Quaak, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+tattoo+vaccination:+effect+on+plasmid+purity+and+transfection+efficiency+of+different+topoisoforms.">DNA tattoo vaccination: effect on plasmid purity and transfection efficiency of different topoisoforms.</a> J. Control Release. 139, 153-159 (2009).</li><li>Pokorna, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccination+with+human+papillomavirus+type+16-derived+peptides+using+a+tattoo+device.">Vaccination with human papillomavirus type 16-derived peptides using a tattoo device.</a> Vaccine. 27, 3519-3529 (2009).</li></ol>

Vacunación de ADN se considera más seguro que las estrategias de vacunación tradicionales, ya que no requiere la manipulación de, o exponer las vacunas a, patógenos vivos o atenuados 4. Sin embargo, el resultado de la vacunación de ADN depende en gran medida de la ruta de entrega. La piel es abundante en las células presentadoras de antígeno, tales como células de Langerhans y células dendríticas 1, y por lo tanto un sitio ideal para la inmunización en términos de inmunogenicidad y la ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo / material </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> PCX-EGFP ADN plásmido </td><td> Clontech </td><td></td><td></td></tr><tr><td> STEALTH Sistema Rotary Tattoo </td><td> Worldwide Tattoo Supply </td><td> STEALTH-L </td><td></td></tr><tr><td> Agujas de tatuaje </td><td> Worldwide Tattoo Supply </td><td> 1207RSB </td><td></td></tr><tr><td> Kit EndoFree Plasmid Maxi </td><td> Qiagen </td><td> 12362 </td><td></td></tr><tr><td> 0,22 m PVDF filtro estéril </td><td> Millipore </td><td> SLGV013SL </td><td></td></tr><tr><td> cortador de pelo eléctrico </td><td> Disponible comercialmente </td><td></td><td></td></tr><tr><td> maquinillas de afeitar desechables seguridad </td><td> Disponible comercialmente </td><td></td><td></td></tr><tr><td> PlataSulfadiazina Cream </td><td> Watson </td><td> NDC 0591-0810-55 </td><td></td></tr><tr><td> La ketamina HCl </td><td></td><td> NDC 0856-2012-01 </td><td></td></tr><tr><td> Solución estéril Zylazine </td><td></td><td> NADA 139-236 </td><td></td></tr></tbody></table>

skin tattooing as a novel approach for dna vaccine delivery

Basadas en ácidos nucleicos vacunación es un tema de creciente interés, especialmente de ADN plásmido (pDNA) que codifican antígenos inmunológicamente importantes. Después de la ingeniería de pDNA se administra a las vacunas, que se transcribe y se traduce en proteínas inmunógenos que pueden provocar respuestas del sistema inmune. Existen muchas formas de aplicar vacunas de ADN han sido investigadas, sin embargo, cada vía de administración tiene sus propias ventajas y dificultades. Los tatuajes es una técnica novedosa que es seguro, rentable y conveniente. Además, las perforaciones causadas por la aguja podría también servir como un potente adyuvante. Aquí, a) demostrar la administración intradérmica de ADN de plásmido que codifica la proteína verde fluorescente mejorada (EGFP-PCX) en un modelo de ratón utilizando un dispositivo de tatuaje y b) confirmar la expresión eficaz de EGFP en las células de la piel utilizando microscopía confocal.

La expresión de EGFP con un pico de excitación a 488 nm y un pico de emisión a 509 nm puede ser observado en las células de piel de ratón. A partir de una dosis de 1,875 mg de ADN, que contiene aproximadamente 3 × 10 17 copias del plásmido, se observa típicamente 10-20 señales de EGFP en los 1 cm 2 zona tatuada. Este número relativamente bajo de células transfectadas es consistente con los resultados de un estudio anterior 3. La expresión de EGFP (Figura 1) p...

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Skin Tattooing As A Novel Approach For DNA Vaccine Delivery

Los tatuajes es un medio potente y seguro para la administración de ADN vacuna por vía intradérmica. Aquí, un ADN plásmido que codifica EGFP se entrega por el tatuaje en la piel de un ratón de laboratorio, y la expresión de EGFP en las células de la piel es entonces inspeccionado por microscopía confocal.

Piel tatuaje como un nuevo enfoque para la entrega de vacunas de ADN

Nucleic acid-based vaccination is a topic of growing interest, especially plasmid DNA (pDNA) encoding immunologically important antigens. After the ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Cell Squeezing as a Robust, Microfluidic Intracellular Delivery Platform

Exprimir la célula como un robusto, Microfluidic intracelular Delivery Platform

Rapid mechanical deformation of cells has emerged as a promising, vector-free method for intracellular delivery of macromolecules and nanomaterials. This ...

Investigación

Bioingeniería

An Improved Method for the Preparation of Type I Collagen From Skin

Un método mejorado para la preparación de colágeno tipo I De Piel

Soluble type 1 collagen (COL1) is used extensively as an adhesive substrate for cell cultures and as a cellular scaffold for regenerative applications. ...

Characterization of Complex Systems Using the Design of Experiments Approach: Transient Protein Expression in Tobacco as a Case Study

Caracterización de Sistemas Complejos Uso del Diseño de Experimentos Enfoque: Expresión de Proteínas transitoria en tabaco como un estudio de caso

Plants provide multiple benefits for the production of biopharmaceuticals including low costs, scalability, and safety. Transient expression offers the ...

A Full Skin Defect Model to Evaluate Vascularization of Biomaterials In Vivo

A Full Skin Defect Model to Evaluate Vascularization of Biomaterials In Vivo

Una piel llena de defectos modelo para evaluar la vascularización de Biomateriales<em&gt; En Vivo</em

Insufficient vascularization is considered to be one of the main factors limiting the clinical success of tissue-engineered constructs. In order to ...

Microscale Vortex-assisted Electroporator for Sequential Molecular Delivery

Vortex asistida Microscale Electroporador para entrega secuencial Molecular

Electroporation has received increasing attention in the past years, because it is a very powerful technique for physically introducing non-permeant ...

Fabrication of a Functionalized Magnetic Bacterial Nanocellulose with Iron Oxide Nanoparticles

La fabricación de una funcionalizado magnética bacteriana NANOCELULOSA con nanopartículas de óxido de hierro

In this study, bacterial nanocellulose (BNC) produced by the bacteria Gluconacetobacter xylinus is synthesized and impregnated in situ with iron oxide ...

Development of a Multicellular Three-dimensional Organotypic Model of the Human Intestinal Mucosa Grown Under Microgravity

Desarrollo de un Modelo Organotípicos multicelular tridimensional de la mucosa intestinal humanas cultivadas en condiciones de microgravedad

Because cells growing in a three-dimensional (3-D) environment have the potential to bridge many gaps of cell cultivation in 2-D environments (e.g., ...

Mesenchymal Stromal Cell Culture and Delivery in Autologous Conditions: A Smart Approach for Orthopedic Applications

Mesenquimales estromales de cultivo celular y de entrega en autólogas Condiciones: Enfoque inteligente para aplicaciones ortopédicas

Human Mesenchymal Stromal Cells (hMSCs) are cultured in vitro with different media. Limits on their use in clinical settings, however, mainly depend on ...

DNA Nanotubes as a Versatile Tool to Study Semiflexible Polymers

Nanotubos de ADN como una herramienta versátil para el estudio de polímeros Semiflexible

Mechanical properties of complex, polymer-based soft matter, such as cells or biopolymer networks, can be understood in neither the classical frame of ...

Bioprinting of Cartilage and Skin Tissue Analogs Utilizing a Novel Passive Mixing Unit Technique for Bioink Precellularization

Bioprinting de cartílago y piel análogos de tejido utilizando un pasivo novela mezcla de unidad técnica de Bioink Precellularization

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