Name: skin tattooing as a novel approach for dna vaccine delivery
Uploaded: 2012-10-18T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Skin Tattooing As A Novel Approach For DNA Vaccine Delivery at JoVE.com

Vi vill tacka alla medlemmar i Kong Lab och Dr Yan Deng på Mikroskopi Core Office of Collaborative Science NYUMC för deras hjälp och teknisk support. Detta arbete stöddes av en pilot bidrag från New York University Center for AIDS Research (CFAR, NIH bidrag AI027742).

1. Plasmid-DNA Rening <ol><li> Omvandla den eukaryota plasmid-DNA som kodar för EGFP (PCX-EGFP) i DH5a E. coli-kompetenta celler. Den tomma PCx Vektorn kan också användas som en negativ kontroll. </li><li> Kultur och skörd DH5a E. coli-celler och rena pDNA enligt Qiagen EndoFree plasmidrening Handbook. </li><li> Filter pDNA lösningen genom ett 0,22 um PVDF sterilfilter, och förvara den vid -20 ° C fram till användning. </li></ol> 2. Tatuering System Preparation <ol><...

<ol>
	<li>Bins, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+and+potent+DNA+vaccination+strategy+defined+by+in+vivo+monitoring+of+antigen+expression.">A rapid and potent DNA vaccination strategy defined by in vivo monitoring of antigen expression.</a> Nat Med. 11, 899-904 (2005).</li><li>Pokorna, D., Rubio, I., Muller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA-vaccination+via+tattooing+induces+stronger+humoral+and+cellular+immune+responses+than+intramuscular+delivery+supported+by+molecular+adjuvants.">DNA-vaccination via tattooing induces stronger humoral and cellular immune responses than intramuscular delivery supported by molecular adjuvants.</a> Genet. Vaccines Ther. 6, 4 (2008).</li><li>van den Berg, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+intradermal+vaccination+by+DNA+tattooing+in+human+skin.">Optimization of intradermal vaccination by DNA tattooing in human skin.</a> Hum. Gene Ther. 20, 181-189 (2009).</li><li>Liu, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+vaccines:+a+review.">DNA vaccines: a review.</a> J. Intern. Med. 253, 402-410 (2003).</li><li>Koide, Y., Nagata, T., Yoshida, A., Uchijima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+vaccines.">DNA vaccines.</a> Jpn. J. Pharmacol. 83, 167-174 (2000).</li><li>Peachman, K. K., Rao, M., Alving, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+DNA+through+the+skin.">Immunization with DNA through the skin.</a> Methods. 31, 232-242 (2003).</li><li>Verstrepen, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+HIV-1+specific+T-cell+responses+by+short-interval+DNA+tattooing+as+compared+to+intramuscular+immunization+in+non-human+primates.">Improved HIV-1 specific T-cell responses by short-interval DNA tattooing as compared to intramuscular immunization in non-human primates.</a> Vaccine. 26, 3346-3351 (2008).</li><li>Potthoff, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunogenicity+and+efficacy+of+intradermal+tattoo+immunization+with+adenoviral+vector+vaccines.">Immunogenicity and efficacy of intradermal tattoo immunization with adenoviral vector vaccines.</a> Vaccine. 27, 2768-2774 (2009).</li><li>Quaak, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+tattoo+vaccination:+effect+on+plasmid+purity+and+transfection+efficiency+of+different+topoisoforms.">DNA tattoo vaccination: effect on plasmid purity and transfection efficiency of different topoisoforms.</a> J. Control Release. 139, 153-159 (2009).</li><li>Pokorna, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccination+with+human+papillomavirus+type+16-derived+peptides+using+a+tattoo+device.">Vaccination with human papillomavirus type 16-derived peptides using a tattoo device.</a> Vaccine. 27, 3519-3529 (2009).</li></ol>

DNA-vaccination anses säkrare än traditionella vaccinationsstrategier eftersom det inte kräver manipulation av, eller exponera de vacciner som, levande eller försvagade patogener 4. Beror emellertid resultatet av DNA-vaccination tungt på leverans rutten. Hud är rikligt förekommande i antigenpresenterande celler, såsom Langerhans celler och dendritiska celler 1, och därmed en idealisk plats för immunisering i termer av immunogenicitet och lättillgänglighet 5,6. Som ett resulta...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namn på reagens / material </td><td> Företag </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> PCX-EGFP plasmid-DNA </td><td> Clontech </td><td></td><td></td></tr><tr><td> STEALTH roterande tatueringen System </td><td> Världen Tattoo Supply </td><td> STEALTH-L </td><td></td></tr><tr><td> Tattoo nålar </td><td> Världen Tattoo Supply </td><td> 1207RSB </td><td></td></tr><tr><td> EndoFree Plasmid Maxi Kit </td><td> Qiagen </td><td> 12.362 </td><td></td></tr><tr><td> 0,22 um PVDF sterilt filter </td><td> Millipore </td><td> SLGV013SL </td><td></td></tr><tr><td> elektrisk hår trimmer </td><td> Kommersiellt tillgängliga </td><td></td><td></td></tr><tr><td> disponibel rakhyvlar </td><td> Kommersiellt tillgängliga </td><td></td><td></td></tr><tr><td> SilverSulfadiazin Cream </td><td> Watson </td><td> NDC 0591-0810-55 </td><td></td></tr><tr><td> Ketamin HCl </td><td></td><td> NDC 0856-2012-01 </td><td></td></tr><tr><td> Zylazine Steril lösning </td><td></td><td> NADA 139-236 </td><td></td></tr></tbody></table>

skin tattooing as a novel approach for dna vaccine delivery

Nukleinsyra-baserad vaccination är ett ämne av växande intresse, särskilt plasmid-DNA (pDNA) som kodar för immunologiskt viktiga antigener. Efter den manipulerade pDNA administreras till vacciner, är det transkriberas och translateras till immunogena proteiner som kan framkalla svar från immunsystemet. Många sätt att leverera DNA-vaccin har undersökts, men varje leverans väg har sina egna fördelar och fallgropar. Hud tatuering är en ny teknik som är säker, kostnadseffektiv och bekvämt. Dessutom kan de punkterar orsakade av nålen också tjäna som en potent adjuvans. Här, vi) demonstrerar intradermal leverans av plasmid-DNA som kodar för förstärkt grönt fluorescerande protein (PCX-EGFP) i en musmodell med en tatuering anordning och b) bekräfta effektiv expression av EGFP i hudceller med konfokalmikroskopi.

Uttrycket av EGFP med en excita topp vid 488 nm och emissionstopp vid 509 nm kan observeras i celler mushud. Från en 1,875 ug DNA, innehållande ca 3 x 10 17 kopior av plasmiden, observerade vi typiskt 10-20 EGFP signaler i de 1 cm 2 tatuerade område. Detta relativt låga antalet transfekterade celler stämmer överens med resultaten från en tidigare studie 3. Den EGFP uttryck (figur 1) ger bevis för att EGFP plasmid levereras till djurets hud celler med DNA tatuera ...

Watch this Scientific Journal Video about Skin Tattooing As A Novel Approach For DNA Vaccine Delivery at JoVE.com

Skin Tattooing As A Novel Approach For DNA Vaccine Delivery

Hud tatuering är en potent och säkert sätt att leverans DNA-vaccin intradermalt. Här, är en DNA-plasmid som kodar för EGFP som levereras av tatuering på huden av ett laboratorium mus och uttrycket av EGFP i hudcellerna därefter kontrolleras av konfokalmikroskopi.

Hud tatueringar som ett nytt sätt för DNA-vaccin Leverans

Nucleic acid-based vaccination is a topic of growing interest, especially plasmid DNA (pDNA) encoding immunologically important antigens. After the ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Cell Squeezing as a Robust, Microfluidic Intracellular Delivery Platform

Cell Klämma som en robust, mikroflödes Intracellular Delivery Platform

Rapid mechanical deformation of cells has emerged as a promising, vector-free method for intracellular delivery of macromolecules and nanomaterials. This ...

An Improved Method for the Preparation of Type I Collagen From Skin

En förbättrad metod för framställning av typ I kollagen från huden

Soluble type 1 collagen (COL1) is used extensively as an adhesive substrate for cell cultures and as a cellular scaffold for regenerative applications. ...

Characterization of Complex Systems Using the Design of Experiments Approach: Transient Protein Expression in Tobacco as a Case Study

Karakterisering av komplexa system Använda Försöks Tillvägagångssätt: Transient Protein Expression i tobak som en fallstudie

Plants provide multiple benefits for the production of biopharmaceuticals including low costs, scalability, and safety. Transient expression offers the ...

A Full Skin Defect Model to Evaluate Vascularization of Biomaterials In Vivo

A Full Skin Defect Model to Evaluate Vascularization of Biomaterials In Vivo

En Full Skin Defect modell för att utvärdera Vaskularisering av biomaterial<em&gt; In Vivo</em

Insufficient vascularization is considered to be one of the main factors limiting the clinical success of tissue-engineered constructs. In order to ...

Microscale Vortex-assisted Electroporator for Sequential Molecular Delivery

Micro Vortex-assisted Electroporator för sekventiell Molekylär Leverans

Electroporation has received increasing attention in the past years, because it is a very powerful technique for physically introducing non-permeant ...

Fabrication of a Functionalized Magnetic Bacterial Nanocellulose with Iron Oxide Nanoparticles

Tillverkning av en funktionaliserad Magnetic bakteriell Nanocellulosa med järnoxid nanopartiklar

In this study, bacterial nanocellulose (BNC) produced by the bacteria Gluconacetobacter xylinus is synthesized and impregnated in situ with iron oxide ...

Development of a Multicellular Three-dimensional Organotypic Model of the Human Intestinal Mucosa Grown Under Microgravity

Utveckling av en multicellulär Tredimensionell Organotypiska modell av det mänskliga tarmslemhinnan odlade under mikrogravitation

Because cells growing in a three-dimensional (3-D) environment have the potential to bridge many gaps of cell cultivation in 2-D environments (e.g., ...

Mesenchymal Stromal Cell Culture and Delivery in Autologous Conditions: A Smart Approach for Orthopedic Applications

Mesenkymala Stromacells- Kultur och leverans i Autologa Villkor: En smart strategi för ortopediska tillämpningar

Human Mesenchymal Stromal Cells (hMSCs) are cultured in vitro with different media. Limits on their use in clinical settings, however, mainly depend on ...

DNA Nanotubes as a Versatile Tool to Study Semiflexible Polymers

DNA nanorör som ett mångsidigt verktyg för att studera Semiflexible polymerer

Mechanical properties of complex, polymer-based soft matter, such as cells or biopolymer networks, can be understood in neither the classical frame of ...

Bioprinting of Cartilage and Skin Tissue Analogs Utilizing a Novel Passive Mixing Unit Technique for Bioink Precellularization

Bioprinting av brosk och hud vävnad analoger utnyttja en roman passiv enhet blandningsteknik för Bioink Precellularization

Bioprinting is a powerful technique for the rapid and reproducible fabrication of constructs for tissue engineering applications. In this study, both ...