Name: an in vivo assay to test blood vessel permeability
Uploaded: 2013-03-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability at JoVE.com

Ce travail a été soutenu par une subvention de la National Institutes of Health, R01CA142928.

1. Injection intraveineuse de bleu d&#39;Evans dans la veine de la queue de la souris latéral <ol><li> Préparer une solution à 0,5% stérile de bleu d&#39;Evans dans du PBS. Si nécessaire, stériliser par filtration la solution pour éliminer toute particule qui n&#39;a pas dissous. </li><li> Aspirer 200 pi Bleu Evans solution dans une seringue. Évitez toutes les bulles d&#39;air qui auraient échappé dans la seringue. </li><li> Placer les souris qui sont de 8-12 semaines vieux dans un dispositif de retenue pour...

<ol>
	<li>Beck, K. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+NO+synthase:+role+in+cellular+signaling.">Inducible NO synthase: role in cellular signaling.</a> J. Exp. Biol. 202, 645-653 (1999).</li><li>Bertglia, S., Giusti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+nitric+oxide+in+capillary+perfusion+and+oxygen+delivery+regulation+during+systemic+hypoxia.">Role of nitric oxide in capillary perfusion and oxygen delivery regulation during systemic hypoxia.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 288, H525-H531 (2005).</li><li>Miles, A. A., Miles, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+reactions+to+histamine,+histamine-liberator+and+leutaxine+in+the+skin+of+guinea+pigs.">Vascular reactions to histamine, histamine-liberator and leutaxine in the skin of guinea pigs.</a> J. Physiol. (London). 118, 228-257 (1952).</li><li>Weis, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+permeability+in+cardiovascular+disease+and+cancer.">Vascular permeability in cardiovascular disease and cancer.</a> Curr. Opin. Hematol. 15, 243-249 (2008).</li><li>Kumar, P., Shen, Q., Pivetii, C. D., Lee, E. S., We, M. H., Yuan, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+endothelial+hyperpermeability:+implications+in+inflammation.">Molecular mechanisms of endothelial hyperpermeability: implications in inflammation.</a> Expert Rev. Mol. Med. 30, 11-19 (2009).</li><li>Viazzi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+permeability,+blood+pressure,+and+organ+damage+in+primary+hypertension.">Vascular permeability, blood pressure, and organ damage in primary hypertension.</a> Hypertens. Res. 31, 873-879 (2008).</li><li>Scheppke, ., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+vascular+permeability+suppression+by+topical+application+of+a+novel+VEGFR2/Src+kinase+inhibitor+in+mice+and+rabbits.">Retinal vascular permeability suppression by topical application of a novel VEGFR2/Src kinase inhibitor in mice and rabbits.</a> J. Clin. Invest. 118, 2337-2346 (2008).</li><li>Blanchet, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+CD34+Leads+To+Exacerbated+Autoimmune+Arthritis+through+Increased+Vascular+Permeability.">Loss of CD34 Leads To Exacerbated Autoimmune Arthritis through Increased Vascular Permeability.</a> J. Immunol. 184, 1292-1299 (2010).</li><li>Dvorak, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mast+cell-derived+mediators+of+enhanced+microvascular+permeability,+vascular+permeability+factor/vascular+endothelial+growth+factor,+histamine,+and+serotonin,+cause+leakage+of+macromolecules+through+a+new+endothelial+cell+permeability+organelle,+the+vesiculo-vacuolar+organelle.">Mast cell-derived mediators of enhanced microvascular permeability, vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor, histamine, and serotonin, cause leakage of macromolecules through a new endothelial cell permeability organelle, the vesiculo-vacuolar organelle.</a> Chem. Immunol. Allergy. 85, 185-204 (2005).</li><li>Le Guelte, A., Gavard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+endothelial+cell-cell+junctions+in+endothelial+permeability.">Role of endothelial cell-cell junctions in endothelial permeability.</a> Methods Mol. Biol. 763, 265-279 (2011).</li><li>Martins-Green, M., Petreaca, M., Yao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+assay+system+for+in+vitro+detection+of+permeability+in+human+"endothelium".">An assay system for in vitro detection of permeability in human "endothelium".</a> Methods Enzymol. 443, 137-153 (2008).</li></ol>

La perméabilité vasculaire est un marqueur essentiel pour l&#39;état des vaisseaux sanguins. Augmentation de la perméabilité vasculaire a été montré pour être présent dans plusieurs maladies systémiques telles que le diabète, l&#39;hypertension et les maladies auto-immunes 6,7,8. Augmentation de la perméabilité vasculaire a été montré pour être médiée par la contrainte de cisaillement, des facteurs de croissance tels que le facteur de croissance endothélial vasculaire et le facteur de cro...

Formation et le maintien des barrières perméables sélectives sont essentiels pour le développement des organes appropriée et 1,2 performance. Les cellules endothéliales tapissent la lumière des vaisseaux sanguins et de former une barrière semi-perméable qui est essentiel dans le transport sélectif entre le sang et l&#39;espace interstitiel de tous les organes. Une barrière de perméabilité suffisante est maintenue par serrées cellule à cellule jonctions qui sont strictement contrôlées par des facteurs de croissance, des cytokines et des molécules de stress autres produits 3. Rupture de la barrière de cellules endothéliales peut entraîner une plus grande perméabilité et une fuite vasculaire. Ces effets sont observés dans divers états pathologiques et la compréhension de la signalisation moléculaire souligner nécessite des méthodes pluridisciplinaires 4,5. Dans cet article, nous décrivons une méthode in vivo pour mesurer la perméabilité des vaisseaux en utilisant un modèle de souris. Le test que nous décrivons, également connu sous le nom d&#39;analyse Miles, est un bien établMINE Procédé pour tester la perméabilité vasculaire in vivo. Le test est basé sur le fait que, dans des conditions physiologiques basales, l&#39;albumine ne traverse pas la barrière endothéliale. Bleu d&#39;Evans, un colorant azoïque avec une forte affinité pour l&#39;albumine, est injecté dans le flux sanguin d&#39;un animal expérimental, et dans des conditions physiologiques, il est prévu d&#39;être limité à l&#39;intérieur des vaisseaux sanguins. Lorsqu&#39;un stimulus perméabilité vasculaire est ajouté, par voie topique ou systémique, les vaisseaux sanguins commencent à couler protéine et donc, aussi le bleu Evans qui est lié à l&#39;albumine. Cela se traduit par une coloration bleutée des tissus rapide dont les navires perméables. Injection réussie du colorant dans la veine de la queue de la souris latéral est essentiel pour la bonne réussite de l&#39;expérience. Technique d&#39;injection queue veine exige de la pratique approfondie et doivent être maîtrisées avant de commencer l&#39;expérience. La perméabilité des vaisseaux est fortement dépendante de l&#39;âge et du poids de l&#39;unimal, donc lorsque l&#39;on compare différentes souches de souris, il est impératif que les souris ou les sujets de test ont d&#39;autres proches de la date de naissance et le poids identiques. Parmi les autres facteurs qui influent sur la perméabilité de la barrière endothéliale sont des conditions environnementales comme la température, l&#39;humidité, et c&#39;est très important, le stress de manipulation de la souris. En raison de la multitude de facteurs qui peuvent influencer le résultat de l&#39;expérience, il est toujours conseillé que l&#39;expérience est répétée au moins trois fois et l&#39;analyse statistique effectuée. Ce test peut être utilisé ou pour comparer la perméabilité des vaisseaux de souris qui ont été génétiquement modifiés, ainsi que les souris de différentes origines génétiques. On peut évaluer la perméabilité à la présence ou l&#39;absence d&#39;un stimulus, en fonction de la fonction du gène qui est modulé. Ce test peut également être utilisé ou pour tester l&#39;effet de différents composés sur la perméabilité des vaisseaux.

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> REACTIF </td></tr><tr><td> Evans Blue </td><td> SIGMA </td><td> E2129 </td><td></td></tr><tr><td> FORMAMIDE </td><td> INVITROGEN </td><td> 15515-026 </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td></td><td></td><td> Phosphate 0,2 M 1,5 M de NaCl pH 7,4 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> ÉQUIPEMENT </td></tr><tr><td> SPECTROPHOTOMÈTRE </td><td> EPPENDORF </td><td> 952000006 </td><td></td></tr><tr><td> DISPOSITIF DE RETENUE SOURIS </td><td> HARVARD APPARATUS </td><td> 340012 </td><td></td></tr><tr><td> SERINGUE </td><td> BD </td><td> 309659 </td><td></td></tr><tr><td> AIGUILLES </td><td> BD </td><td> 305106 </td><td> La jauge de l&#39;aiguille dépend de la taille de l&#39;animal. </td></tr><tr><td> SOLDE </td><td> Denver Instrument </td><td> TP-64 </td><td></td></tr></tbody></table>

an in vivo assay to test blood vessel permeability

Cette méthode est basée sur l&#39;injection intraveineuse de bleu d&#39;Evans dans la souris comme modèle animal d&#39;essai. Bleu Evans est un colorant qui se lie albumine. Dans les conditions physiologiques de l&#39;endothélium est imperméable à l&#39;albumine, de sorte Evans bleus assortis de restes d&#39;albumine limitée dans les vaisseaux sanguins. Dans des conditions pathologiques qui favorisent l&#39;augmentation des cellules endothéliales vasculaires perméabilité partiellement perdent leurs contacts étroits et l&#39;endothélium devient perméable à de petites protéines comme l&#39;albumine. Cette condition permet d&#39;extravasation de bleu d&#39;Evans dans les tissus. Un endothélium sain empêche extravasation du colorant dans les tissus vascularisés voisins. Organes ayant une perméabilité accrue montrera nettement augmenté par rapport à coloration bleue des organes avec endothélium intact. Le niveau de perméabilité vasculaire peut être évaluée par simple visualisation ou par mesure quantitative du colorant constituée par milligramme de tissu de contrôle par rapport à des animaux d&#39;expérimentation / tissu. Deux PoweRFUL aspects de ce test sont sa simplicité et caractéristiques quantitatives. Colorant bleu Evans peut être extrait à partir de tissus en incubant une quantité spécifique d&#39;un tissu en le formamide. Maximale d&#39;absorbance Evans Blue est à 620 nm et un minimum d&#39;absorption est à 740 nm. À l&#39;aide d&#39;une courbe d&#39;étalonnage pour le bleu Evans, mesures de densité optique peut être transformé en colorant milligramme capturé par milligramme de tissu. L&#39;analyse statistique doit être utilisée pour évaluer des différences significatives dans la perméabilité vasculaire.

Nous avons utilisé un test de perméabilité in vivo pour tester les fuites navire dans des souris âgées de 8-12 semaines. Ce test est utile pour comparer la perméabilité relative vasculaire entre les animaux de fond génétique différent ou dans une seule souche de souris soumises à des traitements qui affectent le système vasculaire. Nos résultats montrent que la souche de souris génétiquement modifiées, nous avons créé dans notre laboratoire dispose d&#39;un endothélium plus perméabl...

Watch this Scientific Journal Video about An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability at JoVE.com

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

Nous présentons une<em&gt; In vivo</em&gt; Test afin de tester la perméabilité des vaisseaux sanguins. Ce test est basé sur l&#39;injection intraveineuse d&#39;un colorant et visualisation ultérieure de sa diffusion dans les espaces interstitiels.

Un<em&gt; In vivo</emTest&gt; Tester la perméabilité des vaisseaux sanguins

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under ...

Research

JoVE Journal

Medicine

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

Induits par la chimiothérapie vasculaire Toxicité - en temps réel<em&gt; In vivo</em&gt; Imagerie de déficience navire

Certain classes of chemotherapies may exert acute vascular changes that may progress into long-term conditions that may predispose the patient to an ...

Recherche

Médecine

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

Ex Vivo intestinale Sacs pour évaluer la perméabilité de la muqueuse dans les modèles de maladies gastro-intestinales

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Appauvrissement des cellules de souris de xénogreffes de tumeurs humaines améliore de manière significative l&#39;analyse en aval des cellules cibles

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

In Vitro Assays to Assess Blood-brain Barrier Mesh-like Vessel Formation and Disruption

In Vitro Assays to Assess Blood-brain Barrier Mesh-like Vessel Formation and Disruption

Essais in vitro pour évaluer la formation et la perturbation du vaisseau en forme de barrière de sang-cerveau

Blood-brain barrier (BBB) coverage plays a central role in the homeostasis of the central nervous system (CNS). The BBB is dynamically maintained by ...

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

L&#39;approche d&#39;échantillonnage à 4 navires pour les études intégratives de la physiologie du plaidoyer humain<em&gt; In vivo</em

The human placenta is highly inaccessible for research while still in utero. The current understanding of human placental physiology in vivo is therefore ...

A Chronic Cardiac Ischemia Model in Swine Using an Ameroid Constrictor

Un modèle d’ischémie cardiaque chronique chez les porcs à l’aide d’un Constrictor Améroïde

Cardiovascular disease remains the number one cause of mortality in the United States. There are numerous approaches to treating these diseases, but ...

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Re-artérialisé Transplantation de foie partielle de Rat in vivo axée sur le navire 70 % hépatectomie

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. ...

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

Une méthode In Vivo pour l’évaluation de la barrière intestinale-sang et le métabolisme hépatique du microbiote produits

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity ...

Measurement of Strial Blood Flow in Mouse Cochlea Utilizing an Open Vessel-Window and Intravital Fluorescence Microscopy

Mesure du débit sanguin strial dans la cochlée de souris à l’aide d’une fenêtre vasculaire ouverte et d’une microscopie à fluorescence intravitale

Transduction of sound is metabolically demanding, and the normal function of the microvasculature in the lateral wall is critical for maintaining ...

Precision Cut Lung Slices as an Efficient Tool for Ex vivo Pulmonary Vessel Structure and Contractility Studies

Precision Cut Lung Slices as an Efficient Tool for Ex vivo Pulmonary Vessel Structure and Contractility Studies

Les tranches pulmonaires coupées avec précision comme outil efficace pour les études ex vivo sur la structure et la contractilité des vaisseaux pulmonaires

The visualization of murine lung tissue provides valuable structural and cellular information regarding the underlying airway and vasculature. However, ...