Name: an in vivo assay to test blood vessel permeability
Uploaded: 2013-03-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability at JoVE.com

Эта работа была поддержана грантом Национального института здоровья, R01CA142928.

1. Внутривенное введение Evans Blue в мышь латеральную хвостовую вену <ol><li> Подготовка 0,5% стерильный раствор голубого Эванса в PBS. При необходимости фильтр-стерилизовать раствором для удаления любых твердых частиц, которые не растворяются. </li><li> Аспирируйте 200 мкл Evans Blue раствор в шприц. Изб?...

<ol>
	<li>Beck, K. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+NO+synthase:+role+in+cellular+signaling.">Inducible NO synthase: role in cellular signaling.</a> J. Exp. Biol. 202, 645-653 (1999).</li><li>Bertglia, S., Giusti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+nitric+oxide+in+capillary+perfusion+and+oxygen+delivery+regulation+during+systemic+hypoxia.">Role of nitric oxide in capillary perfusion and oxygen delivery regulation during systemic hypoxia.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 288, H525-H531 (2005).</li><li>Miles, A. A., Miles, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+reactions+to+histamine,+histamine-liberator+and+leutaxine+in+the+skin+of+guinea+pigs.">Vascular reactions to histamine, histamine-liberator and leutaxine in the skin of guinea pigs.</a> J. Physiol. (London). 118, 228-257 (1952).</li><li>Weis, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+permeability+in+cardiovascular+disease+and+cancer.">Vascular permeability in cardiovascular disease and cancer.</a> Curr. Opin. Hematol. 15, 243-249 (2008).</li><li>Kumar, P., Shen, Q., Pivetii, C. D., Lee, E. S., We, M. H., Yuan, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+endothelial+hyperpermeability:+implications+in+inflammation.">Molecular mechanisms of endothelial hyperpermeability: implications in inflammation.</a> Expert Rev. Mol. Med. 30, 11-19 (2009).</li><li>Viazzi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+permeability,+blood+pressure,+and+organ+damage+in+primary+hypertension.">Vascular permeability, blood pressure, and organ damage in primary hypertension.</a> Hypertens. Res. 31, 873-879 (2008).</li><li>Scheppke, ., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+vascular+permeability+suppression+by+topical+application+of+a+novel+VEGFR2/Src+kinase+inhibitor+in+mice+and+rabbits.">Retinal vascular permeability suppression by topical application of a novel VEGFR2/Src kinase inhibitor in mice and rabbits.</a> J. Clin. Invest. 118, 2337-2346 (2008).</li><li>Blanchet, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+CD34+Leads+To+Exacerbated+Autoimmune+Arthritis+through+Increased+Vascular+Permeability.">Loss of CD34 Leads To Exacerbated Autoimmune Arthritis through Increased Vascular Permeability.</a> J. Immunol. 184, 1292-1299 (2010).</li><li>Dvorak, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mast+cell-derived+mediators+of+enhanced+microvascular+permeability,+vascular+permeability+factor/vascular+endothelial+growth+factor,+histamine,+and+serotonin,+cause+leakage+of+macromolecules+through+a+new+endothelial+cell+permeability+organelle,+the+vesiculo-vacuolar+organelle.">Mast cell-derived mediators of enhanced microvascular permeability, vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor, histamine, and serotonin, cause leakage of macromolecules through a new endothelial cell permeability organelle, the vesiculo-vacuolar organelle.</a> Chem. Immunol. Allergy. 85, 185-204 (2005).</li><li>Le Guelte, A., Gavard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+endothelial+cell-cell+junctions+in+endothelial+permeability.">Role of endothelial cell-cell junctions in endothelial permeability.</a> Methods Mol. Biol. 763, 265-279 (2011).</li><li>Martins-Green, M., Petreaca, M., Yao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+assay+system+for+in+vitro+detection+of+permeability+in+human+"endothelium".">An assay system for in vitro detection of permeability in human "endothelium".</a> Methods Enzymol. 443, 137-153 (2008).</li></ol>

Проницаемости сосудов является важным маркером для крови статуса судна. Повышенная проницаемость сосудов, как было показано присутствовать в нескольких системных заболеваний, включая диабет, гипертонию и аутоиммунных заболеваний 6,7,8. Повышенная проницаемость сосудов была пок?...

Формирование и поддержание избирательный проницаемые барьеры, необходимые для нормального развития органов и производительностью 1,2. Эндотелиальные клетки линии просвета кровеносных сосудов и образуют полупроницаемый барьер, который играет важную роль в избирательный перевозок между кровью и интерстициальным пространством всех органов. Адекватный барьер проницаемости поддерживается благодаря тесной клетки к клетке соединений, которые строго контролируются факторы роста, цитокины и другие связанные со стрессом молекулы 3. Нарушение эндотелиального барьера клетки может привести к увеличению проницаемости сосудистой и утечки. Эти эффекты проявляются в различных болезненных состояний и понимание подчеркивание молекулярного сигнального требует междисциплинарных методов 4,5. В этой статье мы опишем в естественных условиях метод измерения проницаемости судна с помощью мыши модели. Анализ, который мы описываем, также известный как анализ Майлз, это хорошо establбедных и обнищавших слоев метод для тестирования проницаемости сосудов в естественных условиях. Анализ основан на том факте, что при физиологических условиях базальная, альбумин не пересекает эндотелиального барьера. Evans Blue, азокрасителя с высоким сродством к альбумина, вводится в кровоток подопытных животных, и в физиологических условиях, как ожидается, будет ограничен в пределах кровеносных сосудов. При сосудистой проницаемости стимул добавляется, либо местно или системно, кровеносные сосуды начинают течь белка и, таким образом, также синего Эванса, который связан с альбумином. Это приводит к быстрому голубовато окраска тканей, которые имеют проницаемые сосуды. Успешное введение красителя в мышь латеральную хвостовую вену имеет решающее значение для хорошего результата эксперимента. Хвостовую вену инъекцию техника требует обширной практики и должны быть освоены до начала эксперимента. Судно проницаемость сильно зависит от возраста и весамальных, так что при сравнении различных линий мышей важно, что у мышей или других испытуемых имеют близкие к идентичным даты рождения и весом. Другие факторы, которые влияют на проницаемость эндотелиального барьера условий окружающей среды, таких как температура, влажность, и очень важно, обработка стресс мыши. В связи с множеством факторов, которые могут повлиять на результаты эксперимента это всегда желательно, что эксперимент повторяется не менее трех раз и статистический анализ выполняется. Этот анализ может быть использован либо для сравнения судна проницаемость мышей, которые были генетически модифицированы, а также мышей с различным генетическим фоном. Проницаемость может быть оценена в присутствии или в отсутствии стимула, в зависимости от функции генов, которые модулируют. Этот анализ также может быть использован и для проверки влияния различных соединений на судне проницаемость.

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> РЕАГЕНТОВ </td></tr><tr><td> Evans Blue </td><td> SIGMA </td><td> E2129 </td><td></td></tr><tr><td> Формамида </td><td> INVITROGEN </td><td> 15515-026 </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td></td><td></td><td> 0,2 М фосфат 1,5 М NaCl рН 7,4 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> ОБОРУДОВАНИЕ </td></tr><tr><td> СПЕКТРОФОТОМЕТР </td><td> EPPENDORF </td><td> 952000006 </td><td></td></tr><tr><td> Устройства мыши УДЕРЖИВАЮЩИХ </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 340012 </td><td></td></tr><tr><td> ШПРИЦ </td><td> BD </td><td> 309659 </td><td></td></tr><tr><td> ИГЛЫ </td><td> BD </td><td> 305106 </td><td> Датчик иглы зависит от размера животного. </td></tr><tr><td> BALANCE </td><td> Denver Instrument </td><td> TP-64 </td><td></td></tr></tbody></table>

an in vivo assay to test blood vessel permeability

Этот метод основан на внутривенном введении Evans Blue мышей в качестве модели испытаний на животных. Эванс синий краситель, который связывается альбумином. В физиологических условиях эндотелий является непроницаемой для альбумина, так Эванса синего связанного альбумина остается ограниченным в кровеносных сосудах. В патологических условиях, которые способствуют повышение сосудистой проницаемости эндотелиальных клеток частично теряют свои тесные контакты и эндотелий становится проницаемой для небольших белков, таких как альбумин. Это условие позволяет экстравазации Evans Blue в тканях. Здоровый эндотелий предотвращает кровоизлияние красителя в соседние ткани васкуляризированной. Органы с повышенной проницаемостью покажет значительно увеличилось синюю окраску по сравнению с органов с интактным эндотелием. Уровень проницаемости сосудов можно оценить по простой визуализации или количественного измерения красителя включены на миллиграмм ткани контроля в сравнении с экспериментальными животными / ткань. Два Пауrful аспекты этого анализа являются его простота и количественных характеристик. Evans Blue красителей могут быть извлечены из тканей путем инкубации определенное количество ткани в формамида. Evans Blue максимум поглощения находится при 620 нм и поглощения минимум при 740 нм. С помощью стандартной кривой для Evans Blue, измерения оптической плотности могут быть преобразованы в миллиграммах красителя захватили на миллиграмм ткани. Статистический анализ должен быть использован для оценки существенных различий в проницаемости сосудов.

Мы использовали в анализе проницаемость естественных для проверки судна утечки на мышах 8-12 недель. Этот тест полезен при сравнении относительной проницаемости сосудов между животными разных генетических фоне или в один штамм мышей, подвергавшихся лечения, которые влияют на...

Watch this Scientific Journal Video about An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability at JoVE.com

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

Мы представляем<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Анализ для проверки проницаемость кровеносных сосудов. Этот анализ основан на внутривенное введение красителя и последующей визуализацией его диффузии в интерстициального пространства.

<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Анализ для тестирования проницаемости кровеносных сосудов

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under ...

Research

JoVE Journal

Medicine

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

Химиотерапия индуцированных Сосудистая токсичность - в режиме реального времени<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Изображений судна обесценение

Certain classes of chemotherapies may exert acute vascular changes that may progress into long-term conditions that may predispose the patient to an ...

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

Экс Vivo Кишечные Sacs для оценки слизистой проницаемости в моделях желудочно-кишечные заболевания

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Истощение мышиных клеток из ксенотрансплантатов опухолей человека значительно улучшает Downstream Анализ клеток-мишеней

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

In Vitro Assays to Assess Blood-brain Barrier Mesh-like Vessel Formation and Disruption

In Vitro Assays to Assess Blood-brain Barrier Mesh-like Vessel Formation and Disruption

В анализах in vitro для оценки образования и разрушения сосудов типа мозгового барьера

Blood-brain barrier (BBB) coverage plays a central role in the homeostasis of the central nervous system (CNS). The BBB is dynamically maintained by ...

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

Подход к выборке с четырьмя сосудами для интегративных исследований физиологии плаценты человека<em&gt; В Виво</em

The human placenta is highly inaccessible for research while still in utero. The current understanding of human placental physiology in vivo is therefore ...

A Chronic Cardiac Ischemia Model in Swine Using an Ameroid Constrictor

Хроническая сердечная ишемия модель в свиней, с помощью Ameroid удав

Cardiovascular disease remains the number one cause of mortality in the United States. There are numerous approaches to treating these diseases, but ...

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Повторно Arterialized крысы частично трансплантации печени в естественных условиях судно-ориентированный 70% гепатектомии

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. ...

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

В естественных условиях метод для оценки барьер крови кишки и печени метаболизм микробиоты продукции

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity ...

Measurement of Strial Blood Flow in Mouse Cochlea Utilizing an Open Vessel-Window and Intravital Fluorescence Microscopy

Измерение стойлового кровотока у улитки мыши с использованием открытого сосудистого окна и прижизненной флуоресцентной микроскопии

Transduction of sound is metabolically demanding, and the normal function of the microvasculature in the lateral wall is critical for maintaining ...

Precision Cut Lung Slices as an Efficient Tool for Ex vivo Pulmonary Vessel Structure and Contractility Studies

Precision Cut Lung Slices as an Efficient Tool for Ex vivo Pulmonary Vessel Structure and Contractility Studies

Прецизионная резка легких срезов как эффективный инструмент для исследования структуры и сократимости легочных сосудов Ex vivo

The visualization of murine lung tissue provides valuable structural and cellular information regarding the underlying airway and vasculature. However, ...