Name: an in vivo assay to test blood vessel permeability
Uploaded: 2013-03-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability at JoVE.com

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri, R01CA142928 bir hibe ile desteklenmiştir.

1. Fare Yanal Tail Ven içinde Evans Blue İntravenöz Enjeksiyon <ol><li> PBS içinde Evans mavisi% 0.5 &#39;lik steril çözelti hazırlayın. Gerekirse, çözünmüş henüz herhangi bir partikül madde kaldırmak için çözüm filtre sterilize. </li><li> Bir enjektöre 200 ul Evans Blue çözüm aspire. Şırıngaya kaçmış olabilir tüm hava kabarcıkları kaçının. </li><li> Hayvan serbestçe mobil değil ama kendi kuyruğunu ele alınabilir böylece bir kısıtlama cihaza 8-12 hafta eski il fareler. </li><...

<ol>
	<li>Beck, K. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+NO+synthase:+role+in+cellular+signaling.">Inducible NO synthase: role in cellular signaling.</a> J. Exp. Biol. 202, 645-653 (1999).</li><li>Bertglia, S., Giusti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+nitric+oxide+in+capillary+perfusion+and+oxygen+delivery+regulation+during+systemic+hypoxia.">Role of nitric oxide in capillary perfusion and oxygen delivery regulation during systemic hypoxia.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 288, H525-H531 (2005).</li><li>Miles, A. A., Miles, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+reactions+to+histamine,+histamine-liberator+and+leutaxine+in+the+skin+of+guinea+pigs.">Vascular reactions to histamine, histamine-liberator and leutaxine in the skin of guinea pigs.</a> J. Physiol. (London). 118, 228-257 (1952).</li><li>Weis, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+permeability+in+cardiovascular+disease+and+cancer.">Vascular permeability in cardiovascular disease and cancer.</a> Curr. Opin. Hematol. 15, 243-249 (2008).</li><li>Kumar, P., Shen, Q., Pivetii, C. D., Lee, E. S., We, M. H., Yuan, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+endothelial+hyperpermeability:+implications+in+inflammation.">Molecular mechanisms of endothelial hyperpermeability: implications in inflammation.</a> Expert Rev. Mol. Med. 30, 11-19 (2009).</li><li>Viazzi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+permeability,+blood+pressure,+and+organ+damage+in+primary+hypertension.">Vascular permeability, blood pressure, and organ damage in primary hypertension.</a> Hypertens. Res. 31, 873-879 (2008).</li><li>Scheppke, ., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+vascular+permeability+suppression+by+topical+application+of+a+novel+VEGFR2/Src+kinase+inhibitor+in+mice+and+rabbits.">Retinal vascular permeability suppression by topical application of a novel VEGFR2/Src kinase inhibitor in mice and rabbits.</a> J. Clin. Invest. 118, 2337-2346 (2008).</li><li>Blanchet, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+CD34+Leads+To+Exacerbated+Autoimmune+Arthritis+through+Increased+Vascular+Permeability.">Loss of CD34 Leads To Exacerbated Autoimmune Arthritis through Increased Vascular Permeability.</a> J. Immunol. 184, 1292-1299 (2010).</li><li>Dvorak, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mast+cell-derived+mediators+of+enhanced+microvascular+permeability,+vascular+permeability+factor/vascular+endothelial+growth+factor,+histamine,+and+serotonin,+cause+leakage+of+macromolecules+through+a+new+endothelial+cell+permeability+organelle,+the+vesiculo-vacuolar+organelle.">Mast cell-derived mediators of enhanced microvascular permeability, vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor, histamine, and serotonin, cause leakage of macromolecules through a new endothelial cell permeability organelle, the vesiculo-vacuolar organelle.</a> Chem. Immunol. Allergy. 85, 185-204 (2005).</li><li>Le Guelte, A., Gavard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+endothelial+cell-cell+junctions+in+endothelial+permeability.">Role of endothelial cell-cell junctions in endothelial permeability.</a> Methods Mol. Biol. 763, 265-279 (2011).</li><li>Martins-Green, M., Petreaca, M., Yao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+assay+system+for+in+vitro+detection+of+permeability+in+human+"endothelium".">An assay system for in vitro detection of permeability in human "endothelium".</a> Methods Enzymol. 443, 137-153 (2008).</li></ol>

Damar geçirgenliği kan damarı durumu için kritik bir göstergesidir. Artan vasküler permeabilite diyabet, hipertansiyon ve otoimmün hastalıklar 6,7,8 dahil olmak üzere çeşitli sistemik hastalıklar, mevcut olduğu gösterilmiştir. Artan vasküler permeabilite kayma gerilmesi aracılık gösterilmiştir, vasküler endotelyal büyüme faktörü ve fibroblast büyüme faktörü, serotonin, histamin ve 9 bradikinin gibi yangı benzeri büyüme faktörleri. Su ve küçük moleküller ekstrava...

Seçici geçirgen engellerin Oluşumu ve bakım uygun organ gelişimi ve performansı 1,2 için gereklidir. Endotel hücreleri hattı damar lümeni ve kan ve tüm organları interstisyel boşluk arasında seçici ulaşım esastır yarı geçirgen bir bariyer oluşturur. Yeterli bir geçirgenlik bariyer sıkı bir şekilde büyüme faktörleri, sitokinler ve diğer stres bağlantılı moleküllerin 3 tarafından kontrol edilmektedir sıkı hücre-hücre birleşme yoluyla korunur. Endotel hücre bariyerin bozulması artmış geçirgenlik ve vasküler sızmasına neden olabilir. Bu etkiler, çeşitli hastalık durumlarında görülür ve altı çizili olan moleküler sinyalizasyonun anlayış multidisipliner yöntemlerin 4,5 gerektirir edilir. Bu yazıda, bir fare modeli kullanılarak damar geçirgenliğini ölçmek için in vivo yöntemi bir tarif. Ayrıca Miles test olarak bilinir tanımlamakta olduğumuz testi, iyi establ olduğunuin vivo vasküler permeabilite test yöntemi ished. Tahlil bazal fizyolojik koşullar altında, albümin endotel bariyer çapraz değil, gerçeğine dayanır. Evans Mavisi, albümin için yüksek afinitesi olan bir azo boyası, deneysel bir hayvan, kan dolaşımında enjekte edilir, ve fizyolojik koşullar altında, bu kan damarları içinde sınırlı olması beklenmektedir. Bir vasküler geçirgenlik uyarıcı eklendiği zaman, ya da topikal veya sistemik olarak, kan damarlarını albümin bağlı Evans mavisi da, böylece protein sızdırmaya başlar ve. Geçirgen damarlar vardır dokuların hızlı bir mavi renk elde edilir. Fare yanal kuyruk damarı içinde boya başarılı bir şekilde enjeksiyon deney iyi sonuç için kritik önem taşır. Kuyruk ven enjeksiyon tekniği kapsamlı uygulama gerektirir ve deney başlamadan önce hakim olmalıdır. Gemi geçirgenliği bir yaşına ve ağırlığına son derece bağlıdırolmuş bölgeler, çok farklı fare suşları karşılaştırırken bu fareler veya diğer deneklere aynı doğum tarihleri ​​ve kilosuna yakın olması şarttır. Endotel bariyer geçirgenliğini etkileyen diğer faktörler, sıcaklık, nem gibi çevresel koşullar ve çok önemlisi, fare kullanımı stres. Deney sonucunu etkileyebilecek faktörlerin çokluğu nedeniyle bu deney en az üç kez ve istatistiksel analiz yapılır tekrarlanır olduğunu her zaman tavsiye edilir. Bu tahlil, damar genetik olarak modifiye edilmiş farelerin geçirgenlik yanı sıra, farklı genetik geçmişe sahip fareler veya karşılaştırmak için kullanılabilir. Geçirgenlik modüle edilen gen fonksiyonu bağlı olarak, bir uyarıcı varlığında ya da yokluğunda bir biçimde tespit edilebilir. Bu tahlil, ayrıca damar geçirgenliğini farklı bileşiklerin etkisini test etmek için ya da kullanılabilmektedir.

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> REAKTİF </td></tr><tr><td> Evans Mavisi </td><td> SIGMA </td><td> E2129 </td><td></td></tr><tr><td> Formamid </td><td> Invitrogen </td><td> 15515-026 </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td></td><td></td><td> 0.2M Fosfat 1,5 M NaCl pH 7.4 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> EKİPMAN </td></tr><tr><td> SPEKTROFOTOMETRESİNDE </td><td> EPPENDORF </td><td> 952000006 </td><td></td></tr><tr><td> FARE GÜVENLİK CİHAZI </td><td> HARVARD APARATI </td><td> 340012 </td><td></td></tr><tr><td> SYRINGE </td><td> BD </td><td> 309659 </td><td></td></tr><tr><td> İĞNE </td><td> BD </td><td> 305106 </td><td> İğnenin göstergesi hayvanın büyüklüğüne bağlıdır. </td></tr><tr><td> BALANCE </td><td> DENVER INSTRUMENT </td><td> TP-64 </td><td></td></tr></tbody></table>

an in vivo assay to test blood vessel permeability

Bu yöntem, deney hayvan modeli olarak, farelerde Evans Blue intravenöz enjeksiyon esas alınmaktadır. Evans mavisi albümin bağlayan bir boyadır. Fizyolojik koşullarda endotel albümin geçirmez, yani Evans mavisi ciltli albümini kalıntıları kan damarları içinde sınırlı. Artmış vasküler permeabilite endotel hücreleri teşvik patolojik koşullarda kısmen onların yakın temas kaybetmek ve endotel albumin gibi küçük proteinlerin geçirgen hale gelir. Bu durum dokularda Evans Mavisi ekstravazasyonu sağlar. Sağlıklı bir endotelin komşu damarlı dokularda boya ekstravazasyonu önler. Artan geçirgenlik sahip organlar sağlam endotel ile organlara kıyasla önemli ölçüde artmıştır mavi rengi gösterecektir. Vasküler permeabilite seviyesi basit görselleştirme veya deneysel hayvan / doku karşı kontrol doku miligram başına dahil boya kantitatif ölçümü ile değerlendirilebilir. İki poweBu testin rful yönlerini sadeliği ve kantitatif özellikleri vardır. Evans mavisi formamid doku belirli bir miktarda bekletilmeleri ile ekstrakte edilebilir. Evans Blue absorbans maksimum 620 nm&#39;de ve absorbans asgari 740 nm&#39;de olduğunu. Evans Mavisi için bir standart eğri kullanılarak, optik yoğunluk ölçümleri doku başına miligram çekilen miligram boya haline dönüştürülebilir. İstatistiksel analiz vasküler geçirgenliği önemli farklılıkları değerlendirmek için kullanılmalıdır.

Biz 8-12 hafta Yaşlı farelerde damar kaçaklarının tespitinde in vivo geçirgenliği tayininde kullanılır. Bu test, farklı genetik arka plan hayvanlar arasında veya damar sistemi etkileyen işlemlere tabi fareler tek bir gerilme içinde göreli damar geçirgenliğini karşılaştıran yararlıdır. Bizim sonuçlar bizim laboratuarda yaratılmış genetiği değiştirilmiş farelerin bir gerginlik yabani tip farelere göre daha geçirgen endotele sahip olduğunu göstermektedir. Bu değişiklikl...

Watch this Scientific Journal Video about An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability at JoVE.com

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

Biz sunuyoruz<em&gt; In vivo</em&gt; Damar geçirgenliği test etmek için test. Bu tahlil, interstisiyel boşluklar içine difüzyonu bir boya ve daha sonraki görüntüleme intravenöz enjeksiyon dayanmaktadır.

An<em&gt; In vivo</emKan Gemi Geçirgenlik Test&gt; Test

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under ...

Research

JoVE Journal

Medicine

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

Kemoterapi kaynaklı Vasküler Toksisite - Gerçek zamanlı<em&gt; In vivo</em&gt; Gemi Düşüklüğü Görüntüleme

Certain classes of chemotherapies may exert acute vascular changes that may progress into long-term conditions that may predispose the patient to an ...

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

Ex Vivo Bağırsak Sacs Gastrointestinal Hastalık Modelleri mukozal geçirgenliği Değerlendirmek için

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

İnsan Tümör ksenogratflarının gelen Fare Hücrelerinin tükenmesi Anlamlı Hedef Hücre Alt Analizi geliştirir

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

In Vitro Assays to Assess Blood-brain Barrier Mesh-like Vessel Formation and Disruption

In Vitro Assays to Assess Blood-brain Barrier Mesh-like Vessel Formation and Disruption

Kan-beyin Bariyeri Mesh Benzeri Gemi Oluşumu ve Kesintisini Değerlendiren İn Vitro Tahliller

Blood-brain barrier (BBB) coverage plays a central role in the homeostasis of the central nervous system (CNS). The BBB is dynamically maintained by ...

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

İnsan vücudunun fizyolojisini bütünleştiren 4 damarlı Örnekleme Yaklaşımı<emIn vivo</em

The human placenta is highly inaccessible for research while still in utero. The current understanding of human placental physiology in vivo is therefore ...

A Chronic Cardiac Ischemia Model in Swine Using an Ameroid Constrictor

Bir Ameroid yılanı kullanarak domuz kronik kalp iskemi modelinde

Cardiovascular disease remains the number one cause of mortality in the United States. There are numerous approaches to treating these diseases, but ...

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Yeniden Arterialized sıçan kısmi karaciğer nakli bir vivo içinde gemi odaklı % 70 ile Hepatectomy

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. ...

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

Gut-kan bariyerini ve karaciğer metabolizması Microbiota ürünlerin değerlendirilmesi için In Vivo yöntemi

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity ...

Measurement of Strial Blood Flow in Mouse Cochlea Utilizing an Open Vessel-Window and Intravital Fluorescence Microscopy

Açık Damar Penceresi ve İntravital Floresan Mikroskobu Kullanılarak Fare Kokleasında Strial Kan Akışının Ölçülmesi

Transduction of sound is metabolically demanding, and the normal function of the microvasculature in the lateral wall is critical for maintaining ...

Precision Cut Lung Slices as an Efficient Tool for Ex vivo Pulmonary Vessel Structure and Contractility Studies

Precision Cut Lung Slices as an Efficient Tool for Ex vivo Pulmonary Vessel Structure and Contractility Studies

Ex vivo Pulmoner Damar Yapısı ve Kontritite Çalışmaları İçin Verimli Bir Araç Olarak Hassas Kesim Akciğer Dilimleri

The visualization of murine lung tissue provides valuable structural and cellular information regarding the underlying airway and vasculature. However, ...