Name: c. elegans chemotaxis assay
Uploaded: 2013-04-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about C. elegans Chemotaxis Assay at JoVE.com

Мы благодарим естественных наук и факультет искусств и наук в Королевском университете для финансирования этой работы. Кроме того, мы благодарим Чин-Санг лабораторию для предоставления необходимых реагентов, оборудования и технической поддержки. Мы также благодарим QGEM 2011 году, особенно Тони Он за его вклад в дискуссию.

1. Подготовка / стиральная черви <ol><li> Синхронизация червей молодых взрослых 11. </li><li> Пипетки 2 мл базальной S на 5 см Хемотаксис тарелку поставил червей, которые только что очистили газон OP50 Е. палочки. Наклоните пластины мере необходимости для обеспечения червей промывают с п?...

<ol>
	<li>Bargmann, C. I., Hartwieg, E., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant-selective+genes+and+neurons+mediate+olfaction+in+C.+elegans.">Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans.</a> Cell. 74, 515-527 (1993).</li><li>Bargmann, C. I., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemosensory+neurons+with+overlapping+functions+direct+chemotaxis+to+multiple+chemicals+in+C.+elegans.">Chemosensory neurons with overlapping functions direct chemotaxis to multiple chemicals in C. elegans.</a> Neuron. 7, 729-742 (1991).</li><li>Lee, J., Jee, C., McIntire, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+preference+in+C.+elegans.">Ethanol preference in C. elegans.</a> Genes Brain Behav. 8, 578-585 (2009).</li><li>Swierczek, N. A., Giles, A. C., Rankin, C. H., Kerr, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+behavioral+analysis+in+C.+elegans.">High-throughput behavioral analysis in C. elegans.</a> Nat. Methods. 8, 592-598 (2011).</li><li>Ward, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotaxis+by+the+nematode+Caenorhabditis+elegans:+identification+of+attractants+and+analysis+of+the+response+by+use+of+mutants.">Chemotaxis by the nematode Caenorhabditis elegans: identification of attractants and analysis of the response by use of mutants.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 70, 817-821 (1973).</li><li>Colbert, H. A., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant-specific+adaptation+pathways+generate+olfactory+plasticity+in+C.+elegans.">Odorant-specific adaptation pathways generate olfactory plasticity in C. elegans.</a> Neuron. 14, 803-812 (1995).</li><li>Kauffman, A., Parsons, L., Stein, G., Wills, A., Kaletsky, R., Murphy, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+Positive+Butanone+Learning,+Short-term,+and+Long-term+Associative+Memory+Assays.">C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays.</a> J. Vis. Exp. (49), e2490 (2011).</li><li>Troemel, E. R., Kimmel, B. E., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reprogramming+chemotaxis+responses:+sensory+neurons+define+olfactory+preferences+in+C.+elegans.">Reprogramming chemotaxis responses: sensory neurons define olfactory preferences in C. elegans.</a> Cell. 91, 161-169 (1997).</li><li>Pierce-Shimomura, J. T., Morse, T. M., Lockery, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fundamental+role+of+pirouettes+in+Caenorhabditis+elegans+chemotaxis.">The fundamental role of pirouettes in Caenorhabditis elegans chemotaxis.</a> J Neurosci. 19, 9557-9569 (1999).</li><li>Frokjaer-Jensen, C., Ailion, M., Lockery, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ammonium-acetate+is+sensed+by+gustatory+and+olfactory+neurons+in+Caenorhabditis+elegans.">Ammonium-acetate is sensed by gustatory and olfactory neurons in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS One. 3, e2467 (2008).</li><li>Porta-de-la-Riva, M., Fontrodona, L., Villanueva, A., Cer&#243;n, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+Caenorhabditis+elegans+Methods:+Synchronization+and+Observation.">Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation.</a> J. Vis. Exp. (64), e4019 (2012).</li><li>Sengupta, P., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+fate+specification+and+differentiation+in+the+nervous+system+of+Caenorhabditis+elegans.">Cell fate specification and differentiation in the nervous system of Caenorhabditis elegans.</a> Dev. Genet. 18, 73-80 (1996).</li><li>Hart, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavior.">Behavior.</a> WormBook. , (1895).</li></ol>

Хемотаксиса, хотя контролируется комплексом нейронов и клеточные механизмы, может быть легко и объективно количественно с помощью хемотаксиса. Для получения наилучших результатов анализов, некоторые важные шаги должны быть приняты. Во-первых, постановка червей имеет важное значение ...

Уорд впервые разработана хемотаксиса в 1973 году 5, и с тех пор она имела далеко идущие приложений. Нейробиологии одно поле, что выиграл от использованием разнообразных хемотаксиса. Обонятельная адаптация, простой формы обучения и памяти, была продемонстрирована в C. Элеганс использованием хемотаксиса 6. Они также показано, что C. Элеганс этанола может развиваться толерантность результат, который не только демонстрирует поведенческую пластичность червей, но это также показывает, что черви могут быть очень полезны в изучении алкогольной зависимости у людей 3. Анализы даже были разработаны, чтобы продемонстрировать способность C. Элеганс для хранения краткосрочной и долгосрочной памяти, показав, что ассоциации сделаны червей между хемоаттрактанты и продукты питания (OP50) 7. Кроме того, учитывая обширную в настоящее время информация о C. Элеганс генома, chemotaxiс поведением C. Элеганс была изменена много раз путем индукции мутаций 1,8. Это позволяет много интересных возможностей техники, таких как развитие C. Элеганс как биологическая очистка инструмента. Таким образом, с момента первоначального развития анализа хемотаксиса в 1973 году, она была изменена и часто используется для выяснения тайн в различных дисциплинах. Некоторые анализы направленные выявить конкретные пути следования червей к цели. Прототипом анализ такого рода был разработан Ward 5. Три черви были размещены на расплавленный агар в течение 15 мин. Их движения были прослежены отпечаток они оставили на их пути от периферии пластины вверх градиента аттрактанта в центре пластины. Все червей на пластине были задержаны с использованием хлороформа в конце каждого испытания. Один потомок этого метода помещен одного червя в середине пластины с аттрактант и контрольт равными и противоположными расстояние от начала координат 2. Pierce-Shimomura соавт. разработали анализ наблюдать точный характер движения, участвующих в хемотаксис 9. Индивидуальные червей помещали в 9 см чашки Петри, содержащие либо единой концентрации аттрактанта или радиальную форму градиент, что привело к источнику аттрактанта. Компьютерной программы, которая признала червь был использован для записи наблюдаемого поведения. Видеокамера прикреплена к микроскопу работал совместно с этапом для регулировки чашку Петри автоматически анализа управлял обеспечить червь оставались в поле зрения. Исходя из этого, более подробная информация была обнаружена относительно причины пируэты отображается C. Элеганс. Другие анализы, более похожий на тот, описанный здесь, испытаны реакции большая популяция червей испытуемых соединений. Два квадранта хемотаксиса былииспользуются для изучения роли, которую различные нейроны, рецепторы, и молекулы передачи сигнала, подаваемого при C. Элеганс подвергают воздействию различных соединений 1. В период 20-50 промытого червей были помещены вблизи центра пластины с аттрактант и контроль на полярных концах вместе с анестетиком, азид натрия (NaN 3). Через 60 мин хемотаксический индекс со значениями от -1,0 до +1,0 был сгенерирован на основе разницы между количеством червей были прикреплены к аттрактант или управления. Аналогичный показатель хемотаксическими был использован в анализе сообщается в этой статье, хотя ранее анализа не удалось строго оценить неподвижные червей. Этот анализ был затем далее применительно к тестирования эффектов нейронов абляции на хемотаксис. Другой вариант вышеупомянутого Анализ проводили где 100-200 червей были помещены в центр пластины, содержащей четыре квадранта 3. Квадранта или содержатся в тесте иликонтрольного вещества. Как и в предыдущих анализах, черви не могли двигаться под действием азида натрия, прежде чем забил. Аналогичный способ описан здесь как способ оценки отклика С. Элеганс различных соединений. Тем не менее, ниже метод имеет дополнительное преимущество только оценки червей, которые прошли порог расстояния, отделяющего от мобильного неподвижными червей. Другие анализы включили аналогичных руководящих принципов для игнорирования неподвижными червей. Frøkjær-Йенсена и др.. разработали универсальный анализа, который может быть использован для тестирования как энергозависимые, так и водорастворимые соединения 10. Чашку Петри была разделена на четыре квадранта. Верхний и нижний квадранты не содержит растворителей. Левом квадранте содержал воду, а также право содержащихся аттрактанта. При тестировании летучих одорантов, аналит был помещен на крышку чашки, в течение надлежащего квадранте, тогда как водорастворимые соединения помещали непосредственно на агаR. Методы существующей в настоящее время для оценки хемотаксиса ответ С. Элеганс постоянно совершенствуются для оптимизации их простоты использования, эффективности и точности. Таким образом, в то время как анализ, описанный здесь, имеет возможность оценки наибольшего количества червей (максимальная пропускная способность:. 250 черви / час на тарелку, немного больше, чем пропускная способность продемонстрировано Ли и др. 3); реальную силу этого метода сжатый кульминацией многих из атрибутов ранее анализа (табл. 1).

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>S Basal (- cholesterol) [5.8 g NaCl; 1 M K phosphate buffer, pH 6.0; dH2O to 1 liter.] Autoclave</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PicoFuge</td>
 <td>Stratagene</td>
 <td>400552</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microscopes</td>
 <td>Leica</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dissecting</td>
 <td>Leica</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>P1000 Pipette</td>
 <td>Gilson</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>P10 Pipette</td>
 <td>Gilson</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>0.5 M Sodium Azide</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Chemotaxis Agar [1.6% BBL-agar (Benton-Dickinson) or 2% Difco-agar. Autoclave. Add 5 mM potassium phosphate, pH 6.0; 1 mM CaCl2, 1 mM MgSO4]</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ethanol/Distilled Water</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Test Compounds (eg. 0.5% diacetyl)</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Agar</td>
 <td>Bio-Rad</td>
 <td>166-0600</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>NH4Cl</td>
 <td>Amresco</td>
 <td>CA97062-046</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>MOPS</td>
 <td>VWR</td>
 <td>CA12001-120</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>NH4OH</td>
 <td>BDH</td>
 <td>CABDH8641-2</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>0.25% Tween 20</td>
 <td>Bio-Rad</td>
 <td>170-6531</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

c. elegans chemotaxis assay

Многие организмы используют хемотаксисе искать источники пищи, избегать вредных веществ, а также найти партнеров. Caenorhabditis Элеганс имеет впечатляющие поведения хемотаксиса. Помещение за тестирование реакции червей одоранта, чтобы разместить их в районе, и наблюдать за движением вызвало в ответ на одоранта. Даже с учетом многих доступных анализов, оптимизация червь местонахождение относительно контрольных и испытательных площадок, при сведении к минимуму взаимодействие червей друг с другом, при сохранении значительных размеров образец остается незавершенное 1-10. Описанный здесь метод направлен на решение этих вопросов, изменив анализа разработанных Баргман и соавт. 1. Чашку Петри разделена на четыре квадранта, два противоположных квадрантах с пометкой &quot;Тест&quot; и два обозначены &quot;Контроль&quot;. Обезболивающий размещается во всех исследуемых и контрольных сайтов. Черви помещаются в центре пластины с Circlэлектронной отмечены вокруг начала координат, чтобы неподвижные черви будут игнорироваться. Используя четырехквадрантные система, а не один или два 2 +1 исключает предвзятость в движение червей, так как они находятся на одинаковом расстоянии от опытных и контрольных образцов, независимо от того, с какой стороны от происхождения они начали. Это обходит проблему червей вынуждена путешествовать через кластер других червей, чтобы ответить на одоранта, которые могут задержать червей или заставить их принять более кружным путем, что дает неверное толкование их намеченного пути. Этот метод также показывает практические преимущества, имеющие больший размер выборки и позволяет исследователю для запуска анализа без присмотра и забить червей раз за отведенное время истекло.

Сравнение дикого типа (N2) С. Элеганс в УСО-10 (KY10) мутанта. Мы использовали диацетил, известный C. Элеганс хемоаттрактант, сравнивать дикого типа червей, что и мутант, который не хватает рецепторов Диацетил 1,12. Для дикого типа (N2) червей хемотаксически?...

Watch this Scientific Journal Video about C. elegans Chemotaxis Assay at JoVE.com

C. elegans Chemotaxis Assay

Метод количественной оценки хемотаксического ответа<em&gt; Caenorhabditis Элеганс</em&gt; Описан. Хемотаксическими индекс (СИ) был использован как способ точно оценить реакцию червей определенные цели, а также служить в качестве платформы для сравнения между штаммами и соединений, представляющих интерес.

C. Элеганс Анализ хемотаксиса

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates.  Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis ...

Research

JoVE Journal

Biology

C. elegans Chemotaxis Assay

Generation of Stable Transgenic C. elegans Using Microinjection

Генерация Стабильный Трансгенные Элеганс C. Использование Микроинъекция

Transgenic Caenorhabditis elegans can be readily created via microinjection of a DNA plasmid solution into the gonad 1.  The plasmid DNA rearranges to ...

Application of a C. elegans Dopamine Neuron Degeneration Assay for the Validation of Potential Parkinson's Disease Genes

Применение допамина Элеганс C. Анализ дегенерация нейронов для проверки потенциальных болезни Паркинсона Гены

Improvements to the diagnosis and treatment of Parkinson's disease (PD) are dependent upon knowledge about susceptibility factors that render populations ...

Paradigms for Pharmacological Characterization of C. elegans Synaptic Transmission Mutants

Парадигмы для Фармакологические Характеристика C. Элеганс Synaptic Мутанты передачи

The nematode, Caenorhabditis elegans, has become an expedient model for studying neurotransmission. C. elegans is unique among animal models, as the ...

Dissecting and Recording from The C. Elegans Neuromuscular Junction

Разбор и запись с Junction C. Elegans нервно-мышечной

Neurotransmission is the process by which neurons transfer information via chemical signals to their post-synaptic targets, on a rapid time scale.   This ...

Generation of Transgenic C. elegans by Biolistic Transformation

Generation of Transgenic C. elegans by Biolistic Transformation

Поколение трансгенных С. Элеганс По Biolistic преобразования

The number of laboratories using the free living nematode C. elegans is rapidly growing. The popularity of this biological model is attributed to a rapid ...

RNAi Screening to Identify Postembryonic Phenotypes in C. elegans

RNAi Screening to Identify Postembryonic Phenotypes in C. elegans

RNAi скрининга для выявления Постэмбриональное фенотипы в С. Элеганс</em

C. elegans has proven to be a valuable model system for the discovery and functional characterization of many genes and gene pathways1. More sophisticated ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Основной<em&gt; Caenorhabditis Элеганс</em&gt; Методы синхронизации и наблюдения

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

Метод для культивирования эмбриональных<em&gt; С. Элеганс</em&gt; Клетки

C. elegans is a powerful model system, in which genetic and molecular techniques are easily applicable. Until recently though, techniques that require ...

Antibody Staining in C. Elegans Using &quot;Freeze-Cracking&quot;

Antibody Staining in C. Elegans Using "Freeze-Cracking"

Антитела Окрашивание в<em&gt; С. Элеганс</em&gt; Использование &quot;Freeze-Крекинг&quot;

To stain C.  elegans with antibodies, the relatively impermeable cuticle must be  bypassed by chemical or mechanical methods.  "Freeze-cracking" is one ...

Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay

Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay

Измерения воздействия бактерий на<em&gt; C. Элеганс</em&gt; Поведение использованием анализа Яйцо Сохранение

C. elegans egg-laying behavior is  affected by environmental cues such as osmolarity1 and  vibration2. In the total absence of food C. elegans also cease ...