Name: staphylococcus aureus growth using human hemoglobin as an iron source
Uploaded: 2013-02-07T12:30:00
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Cette recherche a été financée par des subventions publiques aux États-Unis des services de santé et AI073843 AI69233 de l&#39;Institut national des allergies et des maladies infectieuses. EPS est un Fellow Burroughs Wellcome dans la pathogenèse des maladies infectieuses. KPH a été financé par le cellulaire et moléculaire Microbiologie Subvention de formation Programme 5 T32 A107611-10.

1. Purification de l&#39;hémoglobine à partir de sang frais <ol><li> Acquérir le sang frais humain additionné d&#39;un anticoagulant. Gardez le sang sur la glace ou à 4 ° C tout au long de la purification. </li><li> Centrifuger le sang pendant 20 min à 1500 x g. Les globules rouges (GR) est au fond du tube. Soigneusement aspirer le surnageant et remettre en suspension doucement le culot dans une solution glacée de NaCl 0,9% (p / v). Répétez la centrifugation et laver 3 fois. </li><li> Remettre en suspension ...

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	<li>Mazmanian, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passage+of+heme-iron+across+the+envelope+of+Staphylococcus+aureus.">Passage of heme-iron across the envelope of Staphylococcus aureus.</a> Science. 299, 906-909 (2003).</li><li>Pishchany, G., Skaar, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taste+for+blood:+hemoglobin+as+a+nutrient+source+for+pathogens.">Taste for blood: hemoglobin as a nutrient source for pathogens.</a> PLOS Pathogens. 8, e1002535 (2012).</li><li>Haley, K. P., Skaar, E. 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Chem. 283, 6668-6676 (2008).</li><li>Pishchany, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+for+human+hemoglobin+enhances+Staphylococcus+aureus+infection.">Specificity for human hemoglobin enhances Staphylococcus aureus infection.</a> Cell Host Microbe. 8, 544-550 (2010).</li><li>Pishchany, G., Dickey, S. E., Skaar, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+localization+of+the+Staphylococcus+aureus+heme+iron+transport+components+IsdA+and+IsdB.">Subcellular localization of the Staphylococcus aureus heme iron transport components IsdA and IsdB.</a> Infect. Immun. 77, 2624-2634 (2009).</li><li>Torres, V. J., Pishchany, G., Humayun, M., Schneewind, O., Skaar, E. 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G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+requirements+for+Staphylococcus+aureus+abscess+formation+and+persistence+in+host+tissues.">Genetic requirements for Staphylococcus aureus abscess formation and persistence in host tissues.</a> Faseb J. 23, 3393-3404 (2009).</li><li>Andreini, C., Bertini, I., Cavallaro, G., Holliday, G. L., Thornton, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metal+ions+in+biological+catalysis:+from+enzyme+databases+to+general+principles.">Metal ions in biological catalysis: from enzyme databases to general principles.</a> J. Biol. Inorg. Chem. 13, 1205-1218 (2008).</li><li>Weinberg, E. 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Le fer est un nutriment essentiel requis par les organismes de tous les royaumes de la vie 15. Chez les vertébrés, le fer est séquestré à éviter la toxicité provoquée par cet élément. Cette séquestration dissimule aussi le fer de microbes envahisseurs dans un processus connu sous le nom immunité nutritionnel 16. En réponse, les agents pathogènes ont développé des stratégies permettant de contourner l&#39;immunité nutritionnel. Un tel mécanisme repose sur l&#39;hémoglobine, qui e...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom de réactif / Matériel </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Colonne HPLC d&#39;échange d&#39;anions </td><td> Varian </td><td> PL1551-3802 </td><td></td></tr><tr><td> Réactif de Drabkin </td><td> Sigma </td><td> D5941-6VL </td><td></td></tr><tr><td> Norme hémoglobine </td><td> Pointe Scientific </td><td> H7506-STD </td><td></td></tr><tr><td> RPMI </td><td> HyClone </td><td> SH30011.02 </td><td></td></tr><tr><td> Forme Chelex sodium 100 </td><td> Sigma </td><td> C7901 </td><td></td></tr><tr><td> EDDHA </td><td> Normes de LGC GmbH </td><td> ANC 001 </td><td></td></tr><tr><td> Hémoglobine un anticorps </td><td> Santa Cruz Biotechnology, Inc </td><td> SC-21005 </td><td> &lt;/ Td&gt; </tr><tr><td> Gélose TSA </td><td> BD </td><td> 236920 </td><td></td></tr></tbody></table>

staphylococcus aureus growth using human hemoglobin as an iron source

S. aureus est une bactérie pathogène qui nécessite de fer pour mener à bien les fonctions vitales du métabolisme et causer des maladies. Le réservoir le plus abondant de fer à l&#39;intérieur de l&#39;hôte humain est l&#39;hème, qui est le cofacteur de l&#39;hémoglobine. Pour acquérir le fer de l&#39;hémoglobine, S. aureus utilise un système complexe connu sous le déterminant de surface régulée par le fer (Isd) système 1. Composants du premier système d&#39;hémoglobine Isd hôte bind, puis extraire et importer l&#39;hème, et enfin libérer de fer de l&#39;hème dans le cytoplasme bactérien 2,3. Cette voie a été disséqué par de nombreuses études in vitro 4-9. En outre, la contribution du système Isd à l&#39;infection a été maintes fois démontrée dans des modèles de souris 8,10-14. Instituant la contribution du système Isd à l&#39;hémoglobine dérivée de l&#39;acquisition du fer et de la croissance s&#39;est avérée plus difficile. Essais de croissance en utilisant l&#39;hémoglobine en tant que source de fer unique sont compliquées by l&#39;instabilité de l&#39;hémoglobine disponible dans le commerce, contaminant fer libre dans le milieu de croissance, et la toxicité associée à des chélateurs du fer. Nous présentons ici une méthode qui permet de surmonter ces limitations. D&#39;hémoglobine de qualité est préparé à partir du sang frais et conservés dans l&#39;azote liquide. L&#39;hémoglobine purifiée est complétée en fer épuiser milieu simulant le milieu pauvre en fer rencontrées par les agents pathogènes à l&#39;intérieur de l&#39;hôte vertébré. En affamant S. aureus de fer libre et en complétant un formulaire de manipulation minimale de l&#39;hémoglobine nous induire la croissance d&#39;une manière qui dépend entièrement de la capacité de lier l&#39;hémoglobine, d&#39;extraire l&#39;hème, l&#39;hème passer à travers l&#39;enveloppe cellulaire bactérienne et de dégrader l&#39;hème dans le cytoplasme. Ce test sera utile pour les chercheurs qui cherchent à élucider les mécanismes de l&#39;acquisition du fer hemoglobin-/heme-derived dans S. aureus et éventuellement d&#39;autres agents pathogènes bactériens.

Nous avons purifié l&#39;hémoglobine humaine à partir hémolysat par HPLC (étape Protocole de 1,7). Figure 1 montre enregistrées absorbance de l&#39;éluat à 280 nm et 410 longueurs d&#39;onde. Fraction 5 a été recueilli et autres fractions ont été rejetées. Les rendements de cinq à quinze milligrammes d&#39;hémoglobine par millilitre d&#39;éluat sont généralement acquises. D&#39;hémoglobine purifiée a été analysée par SDS-PAGE en double et les gels ont été soit colorés pour des ...

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Staphylococcus aureus Growth using Human Hemoglobin as an Iron Source

Nous décrivons ici un test de croissance pour<em&gt; Staphylococcus aureus</em&gt; En utilisant l&#39;hémoglobine comme la seule source de fer nutritif disponible. Ce test établit le rôle des facteurs bactériens impliqués dans l&#39;hémoglobine dérivée de l&#39;acquisition du fer.

Croissance Staphylococcus aureus en utilisant l&#39;hémoglobine humaine comme source de fer

S. aureus is a pathogenic bacterium that requires iron to  carry out vital metabolic functions and cause disease. The most abundant  reservoir of iron ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Staphylococcus aureus Growth using Human Hemoglobin as an Iron Source

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