Name: antigens protected functional red blood cells by the membrane grafting of compact hyperbranched polyglycerols
Uploaded: 2013-01-02T12:00:00
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Questa ricerca è stata finanziata dal Canadian Blood Services (CBS) e gli Istituti di Scienze della Salute canadese (CIHR) Fondo di ricerca di partenariato. Gli autori ringraziano l&#39;hub LMB macromolecola presso il Centro UBC per la ricerca del sangue per l&#39;uso delle loro strutture di ricerca. La struttura infrastruttura è sostenuto dalla Fondazione canadese per l&#39;innovazione (CFI) e Michael Smith Fondazione per la ricerca sulla salute (MSFHR). R. Chapanian è un destinatario di (CIHR / CBS) borse di studio post-dottorato in Scienze trasfusione e un destinatario dell&#39;assegno di ricerca posta MSFHR tirocinante dottorato. JN Kizhakkedathu è un destinatario del Premio alla Carriera Scholar Investigator MSFHR.

A. Modifica poliglicerolo Hyperbranched (SS-HPG) <ol><li> Posto liofilizzato HPG 60 kDa (0,5 g, 0,0083 mmol) in un pallone a fondo tondo e asciugare una notte sotto vuoto a 90 ° C. </li><li> Refrigerare il matraccio a temperatura ambiente, e sciogliere il HPG essiccato in piridina anidra (3 ml). </li><li> Per funzionalizzare circa otto gruppi ossidrilici su HPG con gruppi carbossilici, aggiungere quantità catalitica di dimetilamminopiridina (una goccia di 5 mg / ml di soluzione in piridina) alla soluzione HPG. A que...

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	<li>Bradley, A. J., Murad, K. L., Regan, K. L., Scott, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophysical+consequences+of+linker+chemistry+and+polymer+size+on+stealth+erythrocytes:+size+does+matter.">Biophysical consequences of linker chemistry and polymer size on stealth erythrocytes: size does matter.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1561 (2), 147-158 (2002).</li><li>Murad, K. T., Mahany, K. L., Brugnara, C., Kuypers, F. A., Eaton, J. W., Scott, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+consequences+of+antigenic+modulation+of+red+blood+cells+with+methoxypoly(ethylene+glycol.">Structural and functional consequences of antigenic modulation of red blood cells with methoxypoly(ethylene glycol.</a> Blood. 93 (6), 2121-2127 (1999).</li><li>Scott, M. D., Murad, K. L., Koumpouras, F., Talbot, M., Eaton, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+camouflage+of+antigenic+determinants:+Stealth+erythrocytes.">Chemical camouflage of antigenic determinants: Stealth erythrocytes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94 (14), 7566-7571 (1997).</li><li>Daniels, G., Reid, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+groups:+the+past+50+years.">Blood groups: the past 50 years.</a> Transfusion. 50 (2), 281-289 (2010).</li><li>Murad, K. L., Gosselin, E. J., Eaton, J. W., Scott, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stealth+cells:+Prevention+of+major+histocompatibility+complex+class+II-mediated+T-cell+activation+by+cell+surface+modification.">Stealth cells: Prevention of major histocompatibility complex class II-mediated T-cell activation by cell surface modification.</a> Blood. 94 (6), 2135-2141 (1999).</li><li>Kainthan, R. K., Hester, S. R., Levin, E., Devine, D. V., Brooks, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+biological+evaluation+of+high+molecular+weight+hyperbranched+polyglycerols.">In vitro biological evaluation of high molecular weight hyperbranched polyglycerols.</a> Biomaterials. 28 (31), 4581-4590 (2007).</li><li>Kainthan, R. K., Janzen, J., Levin, E., Devine, D. V., Brooks, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biocompatibility+testing+of+branched+and+linear+polyglycidol.">Biocompatibility testing of branched and linear polyglycidol.</a> Biomacromolecules. 7 (3), 703-709 (2006).</li><li>Chapanian, R., Constantinescu, I., Brooks, D. E., Scott, M. D., Kizhakkedathu, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+circulation,+clearance,+and+biodistribution+of+polyglycerol+grafted+functional+red+blood+cells.">In vivo circulation, clearance, and biodistribution of polyglycerol grafted functional red blood cells.</a> Biomaterials. 33 (10), 3047-3057 (2012).</li><li>Chapanian, R., Constantinescu, I., Rossi, N. A. A., Medvedev, N., Brooks, D. E., Scott, M. D., Kizhakkedathu, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+polymer+architecture+on+antigens+Camouflage,+CD47+protection+and+complement+mediated+lysis+of+surface+grafted+red+blood+cells.">Influence of polymer architecture on antigens Camouflage, CD47 protection and complement mediated lysis of surface grafted red blood cells.</a> Biomaterials. 33 (31), 7871-7883 (2012).</li><li>Rossi, N. A. A., Constantinescu, I., Brooks, D. E., Scott, M. D., Kizhakkedathu, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+cell+surface+polymer+grafting+in+concentrated+and+nonreactive+aqueous+polymer+solutions.">Enhanced cell surface polymer grafting in concentrated and nonreactive aqueous polymer solutions.</a> J. Am. Chem. Soc. 132 (10), 3423-3430 (2010).</li><li>Rossi, N. A. A., Constantinescu, I., Kainthan, R. K., Brooks, D. E., Scott, M. D., Kizhakkedathu, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Red+blood+cell+membrane+grafting+of+multi-functional+hyperbranched+polyglycerols.">Red blood cell membrane grafting of multi-functional hyperbranched polyglycerols.</a> Biomaterials. 31 (14), 4167-4178 (2010).</li><li>Muzykantov, V. R., Smirnov, M. D., Domogatsky, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemolytic+complement+activity+assay+in+microtitration+plates.">Hemolytic complement activity assay in microtitration plates.</a> J. App. Biochem. 7 (3), 223-227 (1985).</li><li>Walter, H., Brooks, D. E., Fisher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Partitioning in aqueous two-phase systems: theory, methods, uses, and applications to biotechnology. , (1985).</li><li>Rossi, L., Serafini, S., Pierige, F., Antonelli, A., Cerasi, A., Franternale, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythrocyte-based+drug+delivery.">Erythrocyte-based drug delivery.</a> Expert Opin. Drug Deliv. 2 (2), 311-322 (2005).</li><li>Walter, H., Krob, E. J., Brooks, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+surface+properties+other+than+charge+involved+in+cell+separation+by+partition+in+polymer,+aqueous+2-phase+systems.">Membrane surface properties other than charge involved in cell separation by partition in polymer, aqueous 2-phase systems.</a> Biochemistry. 15 (14), 2959-2964 (1976).</li><li>Muzykantov, V. R., Murciano, J. C., Taylor, R. P., Atochina, E. N., Herraez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+complement-mediated+elimination+of+red+blood+cells+modified+with+biotin+and+streptavidin.">Regulation of the complement-mediated elimination of red blood cells modified with biotin and streptavidin.</a> Anal Biochem. 241 (1), 109-119 (1996).</li></ol>

RBC donatori universali hanno un grande potenziale disponibilità del sangue ed il di sicurezza per la terapia trasfusionale. Globuli rossi sono considerati promettenti veicoli di somministrazione di farmaci per la loro circolazione lungo e biocompatibilità intrinseca 14, 15. Esperimenti presentati in questo documento valutare la caratteristiche in vitro di HPG RBC modificati. La proprietà in vitro e in vivo di circolazione HPG globuli rossi modificati sono stati studiati nel nost...

<table border="1"><tbody><tr><td> Glycidol </td><td> Sigma Aldrich </td><td></td><td> (ON, Canada) </td></tr><tr><td> Trimethylolpropane </td><td> Fluka </td><td></td><td> (ON, Canada) </td></tr><tr><td> Metilato di potassio </td><td> Sigma Aldrich </td><td></td><td> (ON, Canada) </td></tr><tr><td> Anidro piridina </td><td> Sigma Aldrich </td><td></td><td> (ON, Canada) </td></tr><tr><td> 4-dimetilamminopiridina </td><td> Sigma Aldrich </td><td></td><td> (ON, Canada) </td></tr><tr><td> Anidride succinica </td><td> Sigma Aldrich </td><td></td><td> (ON, Canada) </td></tr><tr><td> Acetone </td><td> Fisher Scientific </td><td></td><td> (ON, Canada) </td></tr><tr><td> Anidro dimetilformammide </td><td> Sigma Aldrich </td><td></td><td> (ON, Canada) </td></tr><tr><td> N-Hydroxysuccinimide </td><td> Sigma Aldrich </td><td></td><td> (ON, Canada) </td></tr><tr><td> N, N&#39;-diisopropilcarbodiimmide </td><td> Sigma Aldrich </td><td></td><td> (ON, Canada) </td></tr><tr><td> MTS carte </td><td></td><td></td><td> Micro Typing System (MTS) carte (FL, USA) </td></tr><tr><td> Destrano 500 kDa </td><td> Pharmacia Fine Chemicals </td><td></td><td> (Svezia) </td></tr><tr><td> PEG 8 kDa </td><td> Sigma Aldrich </td><td></td><td> (ON, Canada) </td></tr><tr><td> FITC anticorpo monoclonale anti-Rhesus D (Rh) </td><td> Quoziente Biodiagnostics </td><td></td><td> (PA, USA) </td></tr><tr><td> PE anticorpo monoclonale anti-CD47 </td><td> BD Biosciences </td><td></td><td> (NJ, USA) </td></tr><tr><td> Reagente Drabkin di </td><td> Sigma Aldrich </td><td></td><td> (ON, Canada) </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Tabella. Prodotti chimici e reagenti utilizzati per l&#39;innesto di HPG polimeri a RBC membrana e la loro analisi. </td></tr></tbody></table>

antigens protected functional red blood cells by the membrane grafting of compact hyperbranched polyglycerols

Globuli rossi (RBC) trasfusione è vitale per il trattamento di una serie di problemi medici acuti e cronici come talassemia e anemia falciforme 1-3. A causa della presenza di numerosi antigeni sulla superficie RBC (~ 308 antigeni noti 4), pazienti in terapia cronica trasfusione sviluppano alloanticorpi causa della partita miss di antigeni minori di eritrociti trasfusi 4, 5. Innesto di polimeri idrofili come polietilene glicole (PEG) e poliglicerolo hyperbranched (HPG) forma uno strato di esclusione sulla membrana RBC che previene l&#39;interazione di anticorpi con antigeni di superficie senza influenzare il passaggio di piccole molecole come l&#39;ossigeno, glucosio, e ioni 3. Attualmente è disponibile alcun metodo per la generazione di globuli rossi donatori universali in parte a causa della difficile sfida presentata dalla presenza di un gran numero di antigeni (proteine ​​e carboidrati base) sulla superficie RBC e la dviluppo di tali metodi migliorerà in modo significativo la sicurezza delle trasfusioni, e drammaticamente migliorare la disponibilità e l&#39;uso di globuli rossi. In questa relazione, gli esperimenti che vengono utilizzati per sviluppare antigene RBC funzionali protetti dalla membrana innesto di HPG e loro caratterizzazione vengono presentati. HPGs sono altamente biocompatibili polimeri compatte 6, 7, e dovrebbero essere situata all&#39;interno della cella glicocalice che circonda la membrana lipidica 8, 9 e maschera RBC antigeni di superficie 10, 11.

Mascherano di antigene Rhesus D e CD47 proteina di superficie RBC sono stati quantificati mediante citometria a flusso utilizzando fluorescenti anticorpi monoclonali marcati, e un risultato rappresentativo è riportato in figura 1. In caso di HPG-innestati GR (grigio), l&#39;intensità del segnale è diminuito (picco spostato a sinistra) rispetto al controllo RBC (rosso e verde) indica una riduzione nel legarsi agli anticorpi di superficie cellulare che indicano il mascheramento delle proteine ​​di ...

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Antigens Protected Functional Red Blood Cells By The Membrane Grafting Of Compact Hyperbranched Polyglycerols

La modifica membrana cellulare dei globuli rossi (RBC) con poliglicerolo hyperbranched (HPG) è presentato. RBC modificati sono stati caratterizzati da due partizionamento fase acquosa, la fragilità osmotica e lisi complemento mediata. Il camuffamento di proteine ​​di superficie e degli antigeni è stata valutata utilizzando la citometria a flusso e sistema Micro Typing (MTS) carte fenotipizzazione sangue.

Gli antigeni Protetto funzionali globuli rossi dalla membrana innesto di Compact Poligliceroli Hyperbranched

Red blood cell (RBC) transfusion is vital for the treatment of a number of acute and chronic medical problems such as thalassemia major and sickle cell ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

L&#39;esaurimento delle popolazioni di cellule specifiche da deplezione del complemento

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Ricerca

Immunologia e infezioni

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

Isolamento di cellule della cavità peritoneale mouse

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Purification of Specific Cell Population by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS)

Purification of Specific Cell Population by Fluorescence Activated Cell Sorting FACS

Purificazione della popolazione di cellule specifiche per fluorescenza separazione delle cellule attivate (FACS)

Experimental and clinical studies often require highly purified cell populations.  FACS is a technique of choice to purify cell populations of known ...

Expansion, Purification, and Functional Assessment of Human Peripheral Blood NK Cells

Espansione, di purificazione, e la valutazione funzionale delle cellule del sangue umano periferico NK

Natural killer (NK) cells play an important role in immune surveillance against a variety of infectious microorganisms and tumors. Limited availability of ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

Metodi per quantitativa individuazione di anticorpi indotta da attivazione del complemento sui globuli rossi

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

Real-time Imaging of Myeloid Cells Dynamics in ApcMin/+ Intestinal Tumors by Spinning Disk Confocal Microscopy

Real-time Imaging of Myeloid Cells Dynamics in ApcMin/+ Intestinal Tumors by Spinning Disk Confocal Microscopy

In tempo reale Imaging di cellule mieloidi Dynamics in<em&gt; Apc<sup&gt; Min / +</sup</em&gt; Intestinale tumori da Spinning Disk Microscopia confocale

Myeloid cells are the most abundant immune cells within tumors and have been shown to promote tumor progression. Modern intravital imaging techniques ...

Detecting Glycogen in Peripheral Blood Mononuclear Cells with Periodic Acid Schiff Staining

Rilevamento glicogeno in cellule periferiche mononucleate del sangue con Periodic Acid Schiff colorazione

Periodic acid Schiff (PAS) staining is an immunohistochemical technique used on muscle biopsies and as a diagnostic tool for blood samples. ...

Development of an Antigen-driven Colitis Model to Study Presentation of Antigens by Antigen Presenting Cells to T Cells

Sviluppo di un modello colite Antigen-driven per studiare presentazione di antigeni da cellule presentanti l&#39;antigene alle cellule T

Inflammatory bowel disease (IBD) is a chronic inflammation which affects the gastrointestinal tract (GIT). One of the best ways to study the immunological ...

Using X-ray Crystallography, Biophysics, and Functional Assays to Determine the Mechanisms Governing T-cell Receptor Recognition of Cancer Antigens

Utilizzando cristallografia a raggi X, Biofisica, e saggi funzionali per determinare i meccanismi di amministrazione delle cellule T del recettore Riconoscimento di cancro antigeni

Human CD8+ cytotoxic T lymphocytes (CTLs) are known to play an important role in tumor control. In order to carry out this function, the cell ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

Destrano migliora l'efficienza di trasduzione lentivirale di cellule NK primarie Murine ed umane

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...