Name: isolation and culture of mouse cortical astrocytes
Uploaded: 2013-01-19T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes at JoVE.com

נתמך על ידי קרן Fazit בוגרת המלגה לס&quot;ס, המשרד הפדרלי לחינוך ולמחקר (BMBF 01 איו 0803) לק&quot;ג והנציבות האירופיים FP7 גרנט PIRG08-GA-2010-276989, NEUREX, וקרן המחקר הגרמני גרנט SCHA 1442 / המחברים 3-1 לCS אין אינטרסים כלכליים סותרים.

1. בידוד וציפוי של תאים קליפתיים מעורבים בידוד תא קליפת מוח מעורב עבור תרבויות astrocyte יכול להתבצע באמצעות P1 עד P4 גורי עכברים. על מנת להשיג צפיפות astrocyte נכונה יש צורך להשתמש 4 קורטקס סיירי עכבר לבקבוק תרבית רקמת T75. לכן, כרכים בפרוטוקול ...

<ol>
	<li>Nedergaard, M., Ransom, B., Goldman, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+roles+for+astrocytes:+redefining+the+functional+architecture+of+the+brain.">New roles for astrocytes: redefining the functional architecture of the brain.</a> Trends Neurosci. 26, 523-530 (2003).</li><li>Belanger, M., Allaman, I., Magistretti, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+energy+metabolism:+focus+on+astrocyte-neuron+metabolic+cooperation.">Brain energy metabolism: focus on astrocyte-neuron metabolic cooperation.</a> Cell Metab. 14, 724-738 (2011).</li><li>Allen, N. J., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroscience:+Glia+-+more+than+just+brain+glue.">Neuroscience: Glia - more than just brain glue.</a> Nature. 457, 675-677 (2009).</li><li>Ballas, N., Lioy, D. T., Grunseich, C., Mandel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-cell+autonomous+influence+of+MeCP2-deficient+glia+on+neuronal+dendritic+morphology.">Non-cell autonomous influence of MeCP2-deficient glia on neuronal dendritic morphology.</a> Nat. Neurosci. 12, 311-317 (2009).</li><li>Jacobs, S., Nathwani, M., Doering, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fragile+X+astrocytes+induce+developmental+delays+in+dendrite+maturation+and+synaptic+protein+expression.">Fragile X astrocytes induce developmental delays in dendrite maturation and synaptic protein expression.</a> BMC Neurosci. 11, 132 (2010).</li><li>Kaneko, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+neurons+clear+the+path+of+astrocytic+processes+for+their+rapid+migration+in+the+adult+brain.">New neurons clear the path of astrocytic processes for their rapid migration in the adult brain.</a> Neuron. 67, 213-223 (2010).</li><li>Min, R., Nevian, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte+signaling+controls+spike+timing-dependent+depression+at+neocortical+synapses.">Astrocyte signaling controls spike timing-dependent depression at neocortical synapses.</a> Nat. Neurosci. , (2012).</li><li>Eroglu, C., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+synaptic+connectivity+by+glia.">Regulation of synaptic connectivity by glia.</a> Nature. 468, 223-231 (2010).</li><li>Sasaki, T., Matsuki, N., Ikegaya, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action-potential+modulation+during+axonal+conduction.">Action-potential modulation during axonal conduction.</a> Science. 331, 599-601 (2011).</li><li>Bozoyan, L., Khlghatyan, J., Saghatelyan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+control+the+development+of+the+migration-promoting+vasculature+scaffold+in+the+postnatal+brain+via+VEGF+signaling.">Astrocytes control the development of the migration-promoting vasculature scaffold in the postnatal brain via VEGF signaling.</a> J. Neurosci. 32, 1687-1704 .</li><li>Alvarez, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hedgehog+pathway+promotes+blood-brain+barrier+integrity+and+CNS+immune+quiescence.">The Hedgehog pathway promotes blood-brain barrier integrity and CNS immune quiescence.</a> Science. 334, 1727-1731 (2011).</li><li>Abbott, N. J., Ronnback, L., Hansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte-endothelial+interactions+at+the+blood-brain+barrier.">Astrocyte-endothelial interactions at the blood-brain barrier.</a> Nat. Rev. Neurosci. 7, 41-53 (2006).</li><li>Tao-Cheng, J. H., Nagy, Z., Brightman, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tight+junctions+of+brain+endothelium+in+vitro+are+enhanced+by+astroglia.">Tight junctions of brain endothelium in vitro are enhanced by astroglia.</a> J. Neurosci. 7, 3293-3299 (1987).</li><li>Gordon, G. R., Choi, H. B., Rungta, R. L., Ellis-Davies, G. C., MacVicar, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+metabolism+dictates+the+polarity+of+astrocyte+control+over+arterioles.">Brain metabolism dictates the polarity of astrocyte control over arterioles.</a> Nature. 456, 745-749 (2008).</li><li>Silver, J., Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+beyond+the+glial+scar.">Regeneration beyond the glial scar.</a> Nat. Rev. Neurosci. 5, 146-156 (2004).</li><li>Schachtrup, C., Moan, N. L. e., Passino, M. A., Akassoglou, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+stellate+cells+and+astrocytes:+Stars+of+scar+formation+and+tissue+repair.">Hepatic stellate cells and astrocytes: Stars of scar formation and tissue repair.</a> Cell Cycle. 10, 1764-1771 (2011).</li><li>Schachtrup, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrinogen+triggers+astrocyte+scar+formation+by+promoting+the+availability+of+active+TGF-beta+after+vascular+damage.">Fibrinogen triggers astrocyte scar formation by promoting the availability of active TGF-beta after vascular damage.</a> J. Neurosci. 30, 5843-5854 (2010).</li><li>Bushong, E. A., Martone, M. E., Jones, Y. Z., Ellisman, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protoplasmic+astrocytes+in+CA1+stratum+radiatum+occupy+separate+anatomical+domains.">Protoplasmic astrocytes in CA1 stratum radiatum occupy separate anatomical domains.</a> J. Neurosci. 22, 183-192 (2002).</li><li>Ogata, K., Kosaka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+quantitative+analysis+of+astrocytes+in+the+mouse+hippocampus.">Structural and quantitative analysis of astrocytes in the mouse hippocampus.</a> Neuroscience. 113, 221-233 (2002).</li><li>Dabir, D. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+glutamate+transport+in+a+mouse+model+of+tau+pathology+in+astrocytes.">Impaired glutamate transport in a mouse model of tau pathology in astrocytes.</a> J. Neuroscience. 26, 644-654 (2006).</li><li>Wisniewski, H. M., Wegiel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+relationships+between+astrocytes+and+classical+plaque+components.">Spatial relationships between astrocytes and classical plaque components.</a> Neurobiol. Aging. 12, 593-600 (1991).</li><li>Shin, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+mutant+huntingtin+in+glial+cells+contributes+to+neuronal+excitotoxicity.">Expression of mutant huntingtin in glial cells contributes to neuronal excitotoxicity.</a> J. Cell Biol. 171, 1001-1012 (2005).</li><li>Wakabayashi, K., Hayashi, S., Yoshimoto, M., Kudo, H., Takahashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NACP/alpha-synuclein-positive+filamentous+inclusions+in+astrocytes+and+oligodendrocytes+of+Parkinson's+disease+brains.">NACP/alpha-synuclein-positive filamentous inclusions in astrocytes and oligodendrocytes of Parkinson's disease brains.</a> Acta Neuropathol. 99, 14-20 (2000).</li><li>Lioy, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+glia+in+the+progression+of+Rett's+syndrome.">A role for glia in the progression of Rett's syndrome.</a> Nature. 475, 497-500 (2011).</li><li>Quinlan, R. A., Brenner, M., Goldman, J. E., Messing, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFAP+and+its+role+in+Alexander+disease.">GFAP and its role in Alexander disease.</a> Exp. Cell Res. 313, 2077-2087 (2007).</li><li>Beck, K., Schachtrup, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+damage+in+the+central+nervous+system:+a+multifaceted+role+for+vascular-derived+TGF-beta.">Vascular damage in the central nervous system: a multifaceted role for vascular-derived TGF-beta.</a> Cell Tissue Res. 347, 187-201 (2012).</li><li>McCarthy, K. D., de Vellis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+separate+astroglial+and+oligodendroglial+cell+cultures+from+rat+cerebral+tissue.">Preparation of separate astroglial and oligodendroglial cell cultures from rat cerebral tissue.</a> J. Cell Biol. 85, 890-902 (1980).</li><li>Siao, C. J., Tsirka, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+plasminogen+activator+mediates+microglial+activation+via+its+finger+domain+through+annexin+II.">Tissue plasminogen activator mediates microglial activation via its finger domain through annexin II.</a> J. Neurosci. 22, 3352-3358 (2002).</li><li>Armstrong, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+immature+oligodendrocyte+lineage+cells.">Isolation and characterization of immature oligodendrocyte lineage cells.</a> Methods. 16, 282-292 (1998).</li><li>Cahoy, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transcriptome+database+for+astrocytes,+neurons,+and+oligodendrocytes:+a+new+resource+for+understanding+brain+development+and+function.">A transcriptome database for astrocytes, neurons, and oligodendrocytes: a new resource for understanding brain development and function.</a> J. Neurosci. 28, 264-278 (2008).</li><li>Anthony, T. E., Heintz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+folate+metabolic+enzyme+ALDH1L1+is+restricted+to+the+midline+of+the+early+CNS,+suggesting+a+role+in+human+neural+tube+defects.">The folate metabolic enzyme ALDH1L1 is restricted to the midline of the early CNS, suggesting a role in human neural tube defects.</a> J. Comp. Neurol. 500, 368-383 (2007).</li><li>Skoff, R. P., Knapp, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Division+of+astroblasts+and+oligodendroblasts+in+postnatal+rodent+brain:+evidence+for+separate+astrocyte+and+oligodendrocyte+lineages.">Division of astroblasts and oligodendroblasts in postnatal rodent brain: evidence for separate astrocyte and oligodendrocyte lineages.</a> Glia. 4, 165-174 (1991).</li><li>Molofsky, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+and+disease:+a+neurodevelopmental+perspective.">Astrocytes and disease: a neurodevelopmental perspective.</a> Genes Dev. 26, 891-907 (2012).</li><li>Zhang, Y., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte+heterogeneity:+an+underappreciated+topic+in+neurobiology.">Astrocyte heterogeneity: an underappreciated topic in neurobiology.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 20, 588-594 (2010).</li><li>Foo, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+method+for+the+purification+and+culture+of+rodent+astrocytes.">Development of a method for the purification and culture of rodent astrocytes.</a> Neuron. 71, 799-811 (2011).</li><li>Jungblut, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+living+primary+astroglial+cells+using+the+new+GLAST-specific+monoclonal+antibody+ACSA-1.">Isolation and characterization of living primary astroglial cells using the new GLAST-specific monoclonal antibody ACSA-1.</a> Glia. 60, 894-907 (2012).</li></ol>

השיטה המתוארת כאן מבוססת על הכנת תרבות astrocyte ממוח של ילוד מכרסם, שתואר לראשונה על ידי מקארתי ודה Vellis בשנת 1980 27. השיטה השונה של הבידוד והתרבות של האסטרוציטים קליפת המוח מP1 לאחר הלידה למוח עכבר P4 מוצגת כאן הוא מהיר, תשואות האסטרוציטים ראשוניים וטהורים וניתן לשחזור...

האסטרוציטים הם סוג תא נפוץ מאוד במערכת העצבים המרכזית (CNS). היחס של האסטרוציטים לנוירונים הוא 1:03 בקליפת המוח של עכברים וחולדות, ואילו יש 1.4 האסטרוציטים לנוירון ב1 קליפת אדם. ריבית בתפקוד astrocyte גדלה באופן דרמטי בשנים האחרונות. תפקיד מרכזי של האסטרוציטים הוא תפקידם במתן תמיכה מבנית לנוירונים וטבולים 2,3. תפקידים חדשים שהתגלו להאסטרוציטים לכסות ספקטרום רחב של פונקציות. אלה כוללים מנחים ההגירה של האקסונים המתפתחים וneuroblasts המסוים במהלך הפיתוח 4-6, פונקציות בהעברה הסינפטית, כוח סינפסה ועיבוד מידע על ידי מעגלים עצביים 7-9, תפקידים במחסום דם מוח (BBB) ​​היווצרות 10 ויושרה 11-13 ורגולציה של 14 טון כלי הדם במוח. תכונה בולטת נוספת של האסטרוציטים היא תגובתם לפציעה. תחת תנאי astrocyt פתולוגיes להיות תגובתי ועוד upregulate הביטוי של חלבון ביניים נימת גליה fibrillary חומצי (GFAP) ומטריצת החלבונים תאיים מעכבים (ECM) 15,16. האסטרוציטים תגובתי לתחום את הפגיעה באתר מהרקמה בריאה על ידי יצירת צלקת גלייה, המורכבת בעיקר מחלבונים מופרשים ECM astrocyte של סולפט כונדרואיטין משפחת גליקן (CSPG), הגורמים העיקריים המעכבים התחדשות axonal לאחר פציעת CNS 15-17. האסטרוציטים מקורן תאי גלייה רדיאלי (RG) במהלך התפתחות עוברת מאוחר וחיים לאחר לידה מוקדמים. לאחר מפרט astrocyte התרחש, מבשרי astrocyte להגר למצבם הסופי, שבו הם מתחילים בתהליך של בידול מסוף. בחי, האסטרוציטים להיראות בוגר שלושה עד ארבעה שבועות לאחר לידה כפי שצוינו על ידי המורפולוגיה האופיינית 18,19. תת אוכלוסיות של תאי RG להמיר לתוך האסטרוציטים אזור subventricular (סוג B תאים). Both, RG ותאים מסוג B לתפקד כתאי astrocyte דמוי גזע עצביים (NSCs) במהלך התפתחות ובמבוגרים, בהתאמה. כמו האסטרוציטים, RG ותאים מסוג B גם להביע טרנספורטר astrocyte הספציפי גלוטמט (GLAST), חלבון מוח שומנים מחייבים (BLBP), וGFAP, המציין כי סמנים אלה לא ניתן להשתמש באופן בלעדי במיוחד כדי לתייג את האסטרוציטים בוגרים. בניגוד להאסטרוציטים parenchymal מבוגרים, שאינם מחלקים במוח, RG הבריא ופוטנציאל הסוג B תאי תערוכת תאי גזע כגון יכולת עצמית לחדש. Dysregulation של האסטרוציטים היה מעורב בפתולוגיות רבות, כולל מחלת אלצהיימר 20,21, מחלת הנטינגטון 22, מחלת פרקינסון 23, 24 רט התסמונת ומחלתו של אלכסנדר 25. יתר על כן, האסטרוציטים להגיב לכל העלבונות של מערכת העצבים המרכזיים, מה שמוביל להפעלת astrocyte והיווצרות צלקת גלייה astrocytic 16,26. צלקת גלייה astrocytic שיוצרת מוח tr הבאפגיעה בחוט שדרה או auma נחשבת למכשול העיקרי המונע התחדשות תאי עצב 15. הפיתוח של שיטות אמינות לבודד ולשמור על אוכלוסיות מטוהרות של תאים היה חיוני להבנה של מערכת העצבים שלנו. עבודתו החלוצית של מקארתי ודה Vellis מאפשרת לחוקרים למועד להכין תרבויות כמעט טהורות של האסטרוציטים מרקמות חולדת יילודי 27. רב כבר למד על ביולוגית astrocyte שימוש בשיטה זו, המוצגת כאן בצורה שונה מעט לבידוד האסטרוציטים קליפת המוח של עכברים. משלימים במחקרי vivo, האסטרוציטים, כמו גם מדיום מותנה הושג באמצעות תואר בתרבות מבחנה, הם כלים חשובים נוספת להבנה הטובה של פונקציות astrocyte.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שמו של פתרון עובד </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> ריכוז סופי </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> תקשורת התרבות astrocyte </td></tr><tr><td> DMEM, רמת סוכר גבוה </td><td> חי טכנולוגיות </td><td> 31966-021 </td><td></td></tr><tr><td> FBS, חום מומת </td><td> חי טכנולוגיות </td><td> 10082-147 </td><td> ריכוז סופי: 10% </td></tr><tr><td> פניצילין סטרפטומיצין </td><td> חי טכנולוגיות </td><td> 15140-122 </td><td> ריכוז סופי: 1% </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> פתרון לעקיצת רקמת המוחestion </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> חי טכנולוגיות </td><td> 14170-088 </td><td></td></tr><tr><td> 2.5% טריפסין </td><td> חי טכנולוגיות </td><td> 15090-046 </td><td> ריכוז סופי: 0.25% </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> אחר </td></tr><tr><td> 70% אתנול (כרך / כרך) </td><td> רוט </td><td> 9065.2 </td><td></td></tr><tr><td> פולי-D-ליזין </td><td> Millipore </td><td> -003-E </td><td> 50 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> מים </td><td> Paa </td><td> S15-012 </td><td> כיתת תרבית תאים </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Paa </td><td> H15-002 </td><td> כיתת תרבית תאים </td></tr><tr><td> 0.05% נסוpsin-EDTA </td><td> חי טכנולוגיות </td><td> 25300-062 </td><td></td></tr><tr><td> 0.45 סינון סטרילי מיקרומטר </td><td> סארטוריוס </td><td> 16555 </td><td></td></tr><tr><td> 3.5 צלחת פטרי סנטימטר </td><td> BD פלקון </td><td> 353001 </td><td></td></tr><tr><td> 15 מיליליטר צינור פלקון </td><td> BD פלקון </td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> 50 מ&quot;ל פלקון צינור </td><td> BD פלקון </td><td> 352070 </td><td></td></tr><tr><td> 75 בקבוק התרבות 2 סנטימטר רקמות </td><td> BD פלקון </td><td> 353136 </td><td></td></tr><tr><td> מלקחיים, בסדר </td><td> דומון </td><td> 2-1032; 2-1033 </td><td> # 3 ג; # 5 </td></tr><tr><td> מלקחיים, קצה שטוח </td><td> KLS מרטין </td><td> 12-120-11 </td><td></td></tr><tr><td> 13 סנטימטר מספרי כירורגיות </td><td> Aesculap </td><td> BC-140-R </td><td></td></tr><tr><td> Stereomicroscope </td><td> ליקה </td><td></td><td> MZ7.5 </td></tr><tr><td> סטראו + מצלמה </td><td> ליקה </td><td></td><td> MZ16F; DFC320 </td></tr><tr><td> מיקרוסקופ + מצלמה </td><td> Zeiss; Canon </td><td></td><td> פרימו רט; A650 IS PowerShot </td></tr><tr><td> סרכזת </td><td> אפנדורף </td><td> 5805000.017 </td><td> Centrifuge5804R </td></tr><tr><td> Orbital אכר </td><td> Thermo Scientific </td><td> SHKE 4450-1CE </td><td> MaxQ 4450 </td></tr><tr><td> אמבט מים </td><td> Julabo </td><td></td><td> SW20; 37 מעלות צלזיוס </td></tr></tbody></table>

isolation and culture of mouse cortical astrocytes

האסטרוציטים הם סוג תא בשפע במוח של היונקים, עדיין נותרים הרבה מה ללמוד על המאפיינים המולקולריים ופונקציונליים שלהם. במערכות סלולריות תרבות astrocyte מבחנה יכול לשמש כדי ללמוד את הפונקציות הביולוגיות של תאי גליה אלה בפירוט. פרוטוקול וידאו זה מראה כיצד להשיג האסטרוציטים טהורים על ידי בידוד והתרבות של תאי קליפת מוח המעורבים של גורי עכברים. השיטה מבוססת על העדר נוירונים קיימא וההפרדה של האסטרוציטים, oligodendrocytes ומיקרוגלים, שלוש האוכלוסיות העיקריות גליה התאים של מערכת העצבים המרכזית, בתרבות. תמונות מייצגות בימים הראשונים של התרבות להדגים את נוכחותה של אוכלוסיית תאים מעורבת ומצביעות timepoint, כאשר האסטרוציטים הופכים confluent וצריך להיות מופרדים מהמיקרוגליאה וoligodendrocytes. יתר על כן, אנו מדגימים טוהר ומורפולוגיה astrocytic של האסטרוציטים תרבית באמצעות stainings immunocytochemical למבוסס היטב ותאר חדש סמני astrocyte. מערכת זו התרבות יכולה לשמש בקלות להשיג האסטרוציטים עכבר טהורים ובינוני astrocyte ממוזג ללימוד היבטים שונים של ביולוגית astrocyte.

על הבידוד של מוח העכבר השלם (איור 1 א), המוח הקטן ואת נורות חוש הריח יש להסיר (1B איור). הקורטקס הם קלפו של גזע מוח העכבר (התרשים 1C) וקרומים של קליפת הפרט (1D איור &#39;) הם הוציאו בזהירות (האיור 1E). קרום המוח הוא ברור על ידי מערכת עור...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes at JoVE.com

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

האסטרוציטים הוכרו כתאים צדדיים המשתתפים בתהליכים ביולוגיים בסיסיים שחיוניים להתפתחות המוח ותפקודו תקין, ותיקון מערכת עצבים מרכזי. כאן אנו מציגים הליך מהיר לקבלת תרבויות astrocyte עכבר טהורות ללמוד ביולוגיה בכיתה זו גדולה של תאים במערכת עצבים מרכזיים.

בידוד ותרבות של האסטרוציטים עכבר קליפתיים

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Nucleofection and Primary Culture of Embryonic Mouse Hippocampal and Cortical Neurons

Nucleofection ותרבות ראשונית של נוירונים בהיפוקמפוס עכבר עובריים קליפתיים

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and ...

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

לקטינים מבוססי בידוד תרבות Motoneurons עכבר עובריים

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

Bilaminar Co-culture of Primary Rat Cortical Neurons and Glia

Bilaminar משותף התרבות של נוירונים בקליפת המוח עכברוש ראשי גליה

This video will guide you through the process of culturing rat cortical neurons in the presence of a glial feeder layer, a system known as a bilaminar or ...

Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice

בידוד והתרבות של נוירונים בהיפוקמפוס מעכברים טרום לידתי

Primary cultures of rat and murine hippocampal neurons are widely used to reveal cellular mechanisms in neurobiology. By isolating and growing individual ...

Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

בידוד והתרבות של האדם בחוש הטעם תאים Fungiform גבשושיות

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Isolation of Cerebrospinal Fluid from Rodent Embryos for use with Dissected Cerebral Cortical Explants

בידוד של נוזל השדרתי מעוברים מכרסמים לשימוש עם explants מוחות קליפתיים גזור

The CSF is a complex fluid with a dynamically varying proteome throughout development and in adulthood. During embryonic development, the nascent CSF ...

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

דוגמנות אסטרוציטומה פתוגנזה<em&gt; במבחנה</em&gt; ו<em&gt; בVivo</em&gt; שימוש בקליפת מוח האסטרוציטים או בתאי גזע עצביים מעכברים מותנים, מהונדסים גנטי

Current astrocytoma models are limited in their ability to define the roles of oncogenic mutations in specific brain cell types during disease ...

Sex Differences in Mouse Hippocampal Astrocytes after In-Vitro Ischemia

Sex Differences in Mouse Hippocampal Astrocytes after In-Vitro Ischemia

הבדלים בין המינים עכבר בהיפוקמפוס האסטרוציטים לאחר<em&gt; In-Vitro</em&gt; איסכמיה

Astrogliosis following hypoxia/ischemia (HI)-related brain injury plays a role in increased morbidity and mortality in neonates. Recent clinical studies ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

בידוד והתרבות של תאי גזע בוגרים עצביים מאזור העכבר Subcallosal

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...