Name: isolation and culture of mouse cortical astrocytes
Uploaded: 2013-01-19T14:00:00
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1442キロバイトと欧州委員会のFP7のグラントPIRG08-GA-2010から276989、NEUREX、そしてドイツ研究財団助成SCHAにSS、教育研究連邦省（BMBF 01 EO 0803）にFazit財団大学院フェローシップでサポートされている/ CS 3-1〜著者らは相反する経済的利益を持っていません。

1。混合皮質細胞の単離及びメッキ星状膠細胞の培養のための混合皮質細胞の分離は、P4の仔マウスにP1を用いて行うことができる。適切なアストロサイト密度を達成するためには、T75組織培養フラスコあたり4マウス子犬皮質を使用する必要があります。したがって、次のプロトコル内のボリュームは4仔マウスを用いた細胞調製のために計算される。 <ol><li>解剖の手順?...

<ol>
	<li>Nedergaard, M., Ransom, B., Goldman, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+roles+for+astrocytes:+redefining+the+functional+architecture+of+the+brain.">New roles for astrocytes: redefining the functional architecture of the brain.</a> Trends Neurosci. 26, 523-530 (2003).</li><li>Belanger, M., Allaman, I., Magistretti, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+energy+metabolism:+focus+on+astrocyte-neuron+metabolic+cooperation.">Brain energy metabolism: focus on astrocyte-neuron metabolic cooperation.</a> Cell Metab. 14, 724-738 (2011).</li><li>Allen, N. J., Barres, B. 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C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fragile+X+astrocytes+induce+developmental+delays+in+dendrite+maturation+and+synaptic+protein+expression.">Fragile X astrocytes induce developmental delays in dendrite maturation and synaptic protein expression.</a> BMC Neurosci. 11, 132 (2010).</li><li>Kaneko, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+neurons+clear+the+path+of+astrocytic+processes+for+their+rapid+migration+in+the+adult+brain.">New neurons clear the path of astrocytic processes for their rapid migration in the adult brain.</a> Neuron. 67, 213-223 (2010).</li><li>Min, R., Nevian, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte+signaling+controls+spike+timing-dependent+depression+at+neocortical+synapses.">Astrocyte signaling controls spike timing-dependent depression at neocortical synapses.</a> Nat. Neurosci. , (2012).</li><li>Eroglu, C., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+synaptic+connectivity+by+glia.">Regulation of synaptic connectivity by glia.</a> Nature. 468, 223-231 (2010).</li><li>Sasaki, T., Matsuki, N., Ikegaya, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action-potential+modulation+during+axonal+conduction.">Action-potential modulation during axonal conduction.</a> Science. 331, 599-601 (2011).</li><li>Bozoyan, L., Khlghatyan, J., Saghatelyan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+control+the+development+of+the+migration-promoting+vasculature+scaffold+in+the+postnatal+brain+via+VEGF+signaling.">Astrocytes control the development of the migration-promoting vasculature scaffold in the postnatal brain via VEGF signaling.</a> J. Neurosci. 32, 1687-1704 .</li><li>Alvarez, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hedgehog+pathway+promotes+blood-brain+barrier+integrity+and+CNS+immune+quiescence.">The Hedgehog pathway promotes blood-brain barrier integrity and CNS immune quiescence.</a> Science. 334, 1727-1731 (2011).</li><li>Abbott, N. J., Ronnback, L., Hansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte-endothelial+interactions+at+the+blood-brain+barrier.">Astrocyte-endothelial interactions at the blood-brain barrier.</a> Nat. Rev. Neurosci. 7, 41-53 (2006).</li><li>Tao-Cheng, J. H., Nagy, Z., Brightman, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tight+junctions+of+brain+endothelium+in+vitro+are+enhanced+by+astroglia.">Tight junctions of brain endothelium in vitro are enhanced by astroglia.</a> J. Neurosci. 7, 3293-3299 (1987).</li><li>Gordon, G. R., Choi, H. B., Rungta, R. L., Ellis-Davies, G. C., MacVicar, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+metabolism+dictates+the+polarity+of+astrocyte+control+over+arterioles.">Brain metabolism dictates the polarity of astrocyte control over arterioles.</a> Nature. 456, 745-749 (2008).</li><li>Silver, J., Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+beyond+the+glial+scar.">Regeneration beyond the glial scar.</a> Nat. Rev. Neurosci. 5, 146-156 (2004).</li><li>Schachtrup, C., Moan, N. L. e., Passino, M. A., Akassoglou, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+stellate+cells+and+astrocytes:+Stars+of+scar+formation+and+tissue+repair.">Hepatic stellate cells and astrocytes: Stars of scar formation and tissue repair.</a> Cell Cycle. 10, 1764-1771 (2011).</li><li>Schachtrup, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrinogen+triggers+astrocyte+scar+formation+by+promoting+the+availability+of+active+TGF-beta+after+vascular+damage.">Fibrinogen triggers astrocyte scar formation by promoting the availability of active TGF-beta after vascular damage.</a> J. Neurosci. 30, 5843-5854 (2010).</li><li>Bushong, E. A., Martone, M. E., Jones, Y. Z., Ellisman, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protoplasmic+astrocytes+in+CA1+stratum+radiatum+occupy+separate+anatomical+domains.">Protoplasmic astrocytes in CA1 stratum radiatum occupy separate anatomical domains.</a> J. Neurosci. 22, 183-192 (2002).</li><li>Ogata, K., Kosaka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+quantitative+analysis+of+astrocytes+in+the+mouse+hippocampus.">Structural and quantitative analysis of astrocytes in the mouse hippocampus.</a> Neuroscience. 113, 221-233 (2002).</li><li>Dabir, D. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+glutamate+transport+in+a+mouse+model+of+tau+pathology+in+astrocytes.">Impaired glutamate transport in a mouse model of tau pathology in astrocytes.</a> J. Neuroscience. 26, 644-654 (2006).</li><li>Wisniewski, H. M., Wegiel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+relationships+between+astrocytes+and+classical+plaque+components.">Spatial relationships between astrocytes and classical plaque components.</a> Neurobiol. Aging. 12, 593-600 (1991).</li><li>Shin, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+mutant+huntingtin+in+glial+cells+contributes+to+neuronal+excitotoxicity.">Expression of mutant huntingtin in glial cells contributes to neuronal excitotoxicity.</a> J. Cell Biol. 171, 1001-1012 (2005).</li><li>Wakabayashi, K., Hayashi, S., Yoshimoto, M., Kudo, H., Takahashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NACP/alpha-synuclein-positive+filamentous+inclusions+in+astrocytes+and+oligodendrocytes+of+Parkinson's+disease+brains.">NACP/alpha-synuclein-positive filamentous inclusions in astrocytes and oligodendrocytes of Parkinson's disease brains.</a> Acta Neuropathol. 99, 14-20 (2000).</li><li>Lioy, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+glia+in+the+progression+of+Rett's+syndrome.">A role for glia in the progression of Rett's syndrome.</a> Nature. 475, 497-500 (2011).</li><li>Quinlan, R. A., Brenner, M., Goldman, J. E., Messing, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFAP+and+its+role+in+Alexander+disease.">GFAP and its role in Alexander disease.</a> Exp. Cell Res. 313, 2077-2087 (2007).</li><li>Beck, K., Schachtrup, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+damage+in+the+central+nervous+system:+a+multifaceted+role+for+vascular-derived+TGF-beta.">Vascular damage in the central nervous system: a multifaceted role for vascular-derived TGF-beta.</a> Cell Tissue Res. 347, 187-201 (2012).</li><li>McCarthy, K. D., de Vellis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+separate+astroglial+and+oligodendroglial+cell+cultures+from+rat+cerebral+tissue.">Preparation of separate astroglial and oligodendroglial cell cultures from rat cerebral tissue.</a> J. Cell Biol. 85, 890-902 (1980).</li><li>Siao, C. J., Tsirka, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+plasminogen+activator+mediates+microglial+activation+via+its+finger+domain+through+annexin+II.">Tissue plasminogen activator mediates microglial activation via its finger domain through annexin II.</a> J. Neurosci. 22, 3352-3358 (2002).</li><li>Armstrong, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+immature+oligodendrocyte+lineage+cells.">Isolation and characterization of immature oligodendrocyte lineage cells.</a> Methods. 16, 282-292 (1998).</li><li>Cahoy, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transcriptome+database+for+astrocytes,+neurons,+and+oligodendrocytes:+a+new+resource+for+understanding+brain+development+and+function.">A transcriptome database for astrocytes, neurons, and oligodendrocytes: a new resource for understanding brain development and function.</a> J. Neurosci. 28, 264-278 (2008).</li><li>Anthony, T. E., Heintz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+folate+metabolic+enzyme+ALDH1L1+is+restricted+to+the+midline+of+the+early+CNS,+suggesting+a+role+in+human+neural+tube+defects.">The folate metabolic enzyme ALDH1L1 is restricted to the midline of the early CNS, suggesting a role in human neural tube defects.</a> J. Comp. Neurol. 500, 368-383 (2007).</li><li>Skoff, R. P., Knapp, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Division+of+astroblasts+and+oligodendroblasts+in+postnatal+rodent+brain:+evidence+for+separate+astrocyte+and+oligodendrocyte+lineages.">Division of astroblasts and oligodendroblasts in postnatal rodent brain: evidence for separate astrocyte and oligodendrocyte lineages.</a> Glia. 4, 165-174 (1991).</li><li>Molofsky, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+and+disease:+a+neurodevelopmental+perspective.">Astrocytes and disease: a neurodevelopmental perspective.</a> Genes Dev. 26, 891-907 (2012).</li><li>Zhang, Y., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte+heterogeneity:+an+underappreciated+topic+in+neurobiology.">Astrocyte heterogeneity: an underappreciated topic in neurobiology.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 20, 588-594 (2010).</li><li>Foo, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+method+for+the+purification+and+culture+of+rodent+astrocytes.">Development of a method for the purification and culture of rodent astrocytes.</a> Neuron. 71, 799-811 (2011).</li><li>Jungblut, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+living+primary+astroglial+cells+using+the+new+GLAST-specific+monoclonal+antibody+ACSA-1.">Isolation and characterization of living primary astroglial cells using the new GLAST-specific monoclonal antibody ACSA-1.</a> Glia. 60, 894-907 (2012).</li></ol>

ここに概説された方法は、もともと1980年に27マッカーシーとde Vellisによって記述げっ歯新生児の脳からアストロサイトの培養準備に基づいています。生後P1からP4をマウス脳に皮質星状膠細胞の分離と培養の変法は速いここに提示された、純粋な一次星状膠細胞を生み出す、再現性の高いです。この手法は、簡単にこのようなラットやブタ由来や脊髄などの他の脳領域からなどの他の?...

アストロサイトは、中枢神経系（CNS）において非常に豊富な細胞型である。人間の大脳皮質のニューロン1あたり1.4アストロサイトが存在するのに対し、ニューロンへのアストロサイトの比率は、マウスおよびラットの大脳皮質で1:3である。アストロサイト機能に興味は近年劇的に増加している。アストロサイトの主な機能は、ニューロン2,3に構造的および代謝のサポートを提供する上で自らの役割である。アストロサイトのための新たに発見された役割は、機能の広いスペクトルをカバーしています。これらは、開発4月6日の間に開発の軸索と特定の神経芽細胞の遊走を誘導、シナプス伝達関数、神経回路7から9によるシナプス強度と情報処理、血液脳関門における役割（BBB）の形成10と整合性11月13日を含む脳血管トーン14と規制。アストロサイトのもう一つの大きな特徴は、傷害への応答です。 astrocyt病的条件下でES反応となり、さらに中間フィラメントグリア線維性酸性タンパク質（GFAP）と抑制性細胞外マトリックス（ECM）タンパク質15,16の発現をアップレギュレートする。反応性アストロサイトは、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（CSPG）家族のアストロ分泌ECMタンパク質、CNS損傷15から17の後に軸索の再生を阻害する主要な要因の主に構成されていますグリア瘢痕を形成することによって、健康な組織から損傷部位の境界を定める。 アストロサイトは後期胚発生および出生後の早い時期に放射状グリア（RG）の細胞に由来する。アストロサイトの仕様が発生した後、アストロサイト前駆体は、彼らは終末分化のプロセスを開始し、最終的な位置に移動する。 生体内では 、アストロサイトは彼らの典型的な形態18,19によって示されるように3〜4週間、出生後成熟したように見える。 RGの細胞の亜集団は、脳室下帯のアストロサイト（タイプB細胞）に変換します。 BOTH、RGとB型細胞はそれぞれ、開発中および成人におけるアストロサイトのような神経幹細胞（NSC）として機能します。アストロサイトと同様に、RGとB型細胞はまた、これらのマーカーはもっぱら特に成人星状膠細胞を標識するために使用できないことを示す、アストロサイト特異的グルタミン酸トランスポーター（GLAST）、脳脂質結合タンパク質（BLBP）、およびGFAPを発現している。健康な脳、RGとB型細胞では分裂しない大人実質アストロサイトとは対照的に、自己再生する能力のような幹細胞の可能性を示す。アストロサイトの異常は、アルツハイマー病20,21、ハンチントン病22、パーキンソン病23、レット症候群24とアレキサンダー病25を含む、数多くの病態に関与している。また、アストロサイトはアストロサイトの活性化とアストログリア瘢痕形成16,26につながる、CNSのすべての侮辱に反応します。以下の脳trを形成アストロサイトグリア瘢痕アウマまたは脊髄損傷は、神経再生15を防止プライム障壁であると考えられている。 細胞の精製された集団を分離し、維持するための信頼できる方法の開発は、神経系の我々の理解に不可欠となっています。マッカーシーとde Vellisによる先駆的な仕事は、新生児ラット組織27からアストロサイトのほぼ純粋な培養物を調製するためにこれまでに研究者を可能にします。多くはマウス大脳皮質アストロサイトを単離するためのわずかに修正された形でここに提示され、この方法を用いて、星状膠細胞生物学を学んだされています。 in vivo試験、アストロサイトと同様にin vitro培養で説明を使用して得られた馴化培地中で補完して、アストロサイト機能にさらなるゲイン洞察に貴重なツールです。

<table border="1"><tbody><tr><td> ワーキングソリューションの名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 最終濃度 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 星状膠細胞培養培地 </td></tr><tr><td> DMEM、高グルコース</td><td>ライフテクノロジーズ</td><td> 31966-021 </td><td></td></tr><tr><td>熱不活性化FBS、 </td><td>ライフテクノロジーズ</td><td> 10082-1​​47 </td><td>最終濃度：10％ </td></tr><tr><td>ペニシリン - ストレプトマイシン</td><td>ライフテクノロジーズ</td><td> 15140-122 </td><td>最終濃度：1％ </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 脳組織の発掘のためのソリューションestion </td></tr><tr><td> HBSS </td><td>ライフテクノロジーズ</td><td> 14170-088 </td><td></td></tr><tr><td> 2.5％トリプシン</td><td>ライフテクノロジーズ</td><td> 15090-046 </td><td>最終濃度：0.25％ </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> その他 </td></tr><tr><td> 70％（vol / vol）のエタノール</td><td>ロート</td><td> 9065.2 </td><td></td></tr><tr><td>ポリ-D-リジン</td><td>ミリポア</td><td> -003-E </td><td> 50μg/ mlの</td></tr><tr><td>水</td><td> PAA </td><td> S15-012 </td><td>細胞培養グレード</td></tr><tr><td> PBS </td><td> PAA </td><td> H15-002 </td><td>細胞培養グレード</td></tr><tr><td> 0.05％お試しくださいpsin-EDTA </td><td>ライフテクノロジーズ</td><td> 25300-062 </td><td></td></tr><tr><td> 0.45μmの滅菌フィルター</td><td>縫工筋</td><td> 16555 </td><td></td></tr><tr><td> 3.5センチメートルシャーレ</td><td> BDファルコン</td><td> 353001 </td><td></td></tr><tr><td> 15mlファルコンチューブ</td><td> BDファルコン</td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> 50mlのFalconチューブ</td><td> BDファルコン</td><td> 352070 </td><td></td></tr><tr><td> 75cm 2の組織培養フラスコ</td><td> BDファルコン</td><td> 353136 </td><td></td></tr><tr><td>細かい鉗子、 </td><td>デュモン</td><td> 2から1032まで、2から1033まで</td><td> ＃3cは、第5 </td></tr><tr><td>鉗子、フラットチップ</td><td> KLSマーティン</td><td> 12-120-11 </td><td></td></tr><tr><td> 13センチメートル手術用のハサミ</td><td> AESCULAP </td><td> BC-140-R </td><td></td></tr><tr><td>実体顕微鏡</td><td>ライカ</td><td></td><td> MZ7.5 </td></tr><tr><td>実体顕微鏡+カメラ</td><td>ライカ</td><td></td><td> MZ16F; DFC320 </td></tr><tr><td>顕微鏡+カメラ</td><td>ツァイス、キヤノン</td><td></td><td>プリモヴェール、のPowerShot A650 ISを</td></tr><tr><td>遠心</td><td>エッペンドルフ</td><td> 5805000.017 </td><td> Centrifuge5804R </td></tr><tr><td>オービタルシェーカー</td><td>サーモサイエンティフィック</td><td> SHKE 4450-1CE </td><td> MAXQ 4450 </td></tr><tr><td>水浴</td><td> JULABO </td><td></td><td> SW20、37℃ </td></tr></tbody></table>

isolation and culture of mouse cortical astrocytes

アストロサイトは、哺乳類の脳に豊富に細胞型で、まだ多くのそれらの分子的および機能的特性について学んだことが残っている。 体外アストロサイト細胞培養系では詳細にこれらのグリア細胞の生物学的機能を研究するために使用することができます。このビデオプロトコルは仔マウスの混合皮質細胞の単離および培養により純粋アストロサイトを取得する方法を示します。法は生存ニューロンの欠如およびアストロサイト、オリゴデンドロサイトおよびミクログリア、文化の中枢神経系の3つの主要なグリア細胞集団の分離に基づいています。文化の最初の日中に代表的な画像は、混合細胞集団が存在することを実証し、アストロサイトがコンフルエントになるとミクログリア、オリゴデンドロサイトから分離する必要があるとき、時点を示しています。また、純度と十分に確立されたために免疫組織化学染色を用いて培養アストロサイトのアストロサイトの形態を示し、新たにアストロサイトのマーカーを説明した。この培養系は簡単に星状膠細胞生物学の様々な側面を研究するための純粋なマウスのアストロサイトおよびアストロサイト馴化培地を取得するために使用できます。

完全なマウス脳（ 図1A）、小脳、嗅球の分離の際（ 図1B）が除去されなければならない。皮質は、マウス脳幹（ 図1C）と個々の皮質（ 図1D &#39;）の髄膜の剥離し慎重に（ 図1E）は削除されます。髄膜は、硬膜動脈系と髄膜の細胞や線維芽細胞による最終アストロサイト培養の汚染の除去が不完全の結果は明白です。 <p class="jov...

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Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

アストロサイトは、脳の正常な発達と機能、および中枢神経系の修復に欠かせない基本的な生物学的プロセスに参加して多目的な細胞であると認識されてきた。ここでは、中枢神経系細胞のこの主要なクラスの生物学を研究するために純粋なマウスアストロサイトの培養液を得るための迅速な方法を提示します。

マウス大脳皮質アストロサイトの単離および培養

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Nucleofection and Primary Culture of Embryonic Mouse Hippocampal and Cortical Neurons

Nucleofectionとマウス胎児海馬および皮質ニューロンの初代培養

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and ...

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

マウス胚の運動ニューロンのレクチンに基づく分離と文化

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

Bilaminar Co-culture of Primary Rat Cortical Neurons and Glia

初代ラット皮質ニューロンとグリアのBilaminarの共培養

This video will guide you through the process of culturing rat cortical neurons in the presence of a glial feeder layer, a system known as a bilaminar or ...

Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice

胎児マウスから海馬ニューロンの単離および培養

Primary cultures of rat and murine hippocampal neurons are widely used to reveal cellular mechanisms in neurobiology. By isolating and growing individual ...

Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

人間の茸状の味覚乳頭細胞の単離および培養

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Isolation of Cerebrospinal Fluid from Rodent Embryos for use with Dissected Cerebral Cortical Explants

解剖大脳皮質植で使用するための齧歯類の胚から脳脊髄液の分離

The CSF is a complex fluid with a dynamically varying proteome throughout development and in adulthood. During embryonic development, the nascent CSF ...

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

モデル星細胞腫発症機序<em&gt;体外</em&gt;と<em&gt;インビボ</em&gt;皮質アストロサイトまたは条件付き、遺伝子改変マウスから神経幹細胞を使用した

Current astrocytoma models are limited in their ability to define the roles of oncogenic mutations in specific brain cell types during disease ...

Sex Differences in Mouse Hippocampal Astrocytes after In-Vitro Ischemia

Sex Differences in Mouse Hippocampal Astrocytes after In-Vitro Ischemia

マウス海馬アストロサイトにおける性差後<em&gt;インビトロ</em&gt;虚血

Astrogliosis following hypoxia/ischemia (HI)-related brain injury plays a role in increased morbidity and mortality in neonates. Recent clinical studies ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

マウス梁下ゾーンから成体神経幹細胞の単離および培養

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...