Name: analysis of the solvent accessibility of cysteine residues on maize rayado fino virus virus-like particles produced in nicotiana benthamiana plants and cross-linking of peptides to vlps
Uploaded: 2013-02-14T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of the Solvent Accessibility of Cysteine Residues on Maize rayado fino virus Virus-like Particles Produced in Nicotiana benthamiana Plants and Cross-

1. Virus Inokulation och VLP Rening från Nicotiana benthamiana Växter <ol><li> Producera täckta T7-RNA-transkript från potatisvirus X (PVX)-baserade vektorplasmider bär MRFV vildtyp (wt) och Cys-muterade höljeproteinet (CP) generna 12, med användning av Ambion s T7-mMessage mMachine Kit. </li><li> För varje T7 transkript reaktion, inokulera två helt utvecklade blad av N. benthamiana med 10 pl reaktioner och inkubera anläggningar för 10 dagar i växthus, vid 60% fuktighe...

<ol>
	<li>Barnhill, H., Reuther, R., Ferguson, P. L., Dreher, T. W., Wang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Turnip+yellow+mosaic+virus+as+a+chemoaddressable+bionanoparticle.">Turnip yellow mosaic virus as a chemoaddressable bionanoparticle.</a> Bioconj. Chem. 18, 852-859 (2007).</li><li>Chapman, S., Kavanagh, T., Baulcombe, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potato+virus+X+as+a+vector+for+gene+expression+in+plants.">Potato virus X as a vector for gene expression in plants.</a> Plant J. 2, 549-557 (1992).</li><li>Chen, C., Kwak, E. S., Stein, B., Kao, C. C., Dragnea, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Packaging+of+gold+particles+in+viral+capsids.">Packaging of gold particles in viral capsids.</a> J. Nanosci. Nanotechnol. 5, 2029-2033 (2005).</li><li>Fowler, C. E., Shenton, W., Stubbs, G., Mann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tobacco+mosaic+virus+liquid+crystals+as+templates+for+the+interior+design+of+silica+mesophases+and+nanoparticles.">Tobacco mosaic virus liquid crystals as templates for the interior design of silica mesophases and nanoparticles.</a> Advanced Materials. 13, 1266-1269 (2001).</li><li>Gazit, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+biomolecular+templates+for+the+fabrication+of+metal+nanowires.">Use of biomolecular templates for the fabrication of metal nanowires.</a> FEBS. J. 274, 317-322 (2007).</li><li>Gillitzer, E., Wilts, D., Young, M., Douglas, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+modification+of+a+viral+cage+for+multivalent+presentation.">Chemical modification of a viral cage for multivalent presentation.</a> Chem. Commun. , 2390-2391 (2002).</li><li>Hammond, R. W., Hammond, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maize+rayado+fino+virus+capsid+proteins+assemble+into+virus-like+particles+in+Escherichia+coli.">Maize rayado fino virus capsid proteins assemble into virus-like particles in Escherichia coli.</a> Virus Res. 147, 208-215 (2010).</li><li>Hermamson, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bioconjugate techniques. , (1991).</li><li>Kaiser, C. R., Flenniken, M. L., Gillitzer, E., Harmsen, A. L., Harmsen, A. G., Jutila, M. A., Douglas, T., Young, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+studies+of+protein+cage+nanoparticles+demonstrate+broad+tissue+distribution+and+rapid+clearance+in+vivo.">Biodistribution studies of protein cage nanoparticles demonstrate broad tissue distribution and rapid clearance in vivo.</a> Int. J. Nanomed. 2, 715-733 (2007).</li><li>Knez, M., Bittner, A. M., Boes, F., Wege, C., Jeske, H., Maisse, E., Kern, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biotemplate+synthesis+of+3-nm+nickel+and+cobalt+nanowires.">Biotemplate synthesis of 3-nm nickel and cobalt nanowires.</a> Nano Lett. 3, 1079-1082 (2003).</li><li>Lee, S. Y., Culver, J. N., Harris, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+CuCl2+concentration+on+the+aggregation+and+mineralization+of+Tobacco+mosaic+virus+biotemplate.">Effect of CuCl2 concentration on the aggregation and mineralization of Tobacco mosaic virus biotemplate.</a> J. Colloid. Interface. Sci. 297, 554-560 (2006).</li><li>Lvov, Y., Haas, H., Decher, G., Mohwald, H., Mikhailov, A., Mtchedlishvily, B., Morgunova, E., Vainshtein, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successive+deposition+of+alternate+layers+of+polyelectrolytes+and+a+charged+virus.">Successive deposition of alternate layers of polyelectrolytes and a charged virus.</a> Langmuir. 10, 4232-4236 (1994).</li><li>Natilla, A., Hammond, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maize+rayado+fino+virus+virus-like+particles+expressed+in+tobacco+plants:+a+new+platform+for+cysteine+selective+bioconjugation+peptide+display.">Maize rayado fino virus virus-like particles expressed in tobacco plants: a new platform for cysteine selective bioconjugation peptide display.</a> J. Virol. Methods. 178, 209-215 (2011).</li><li>Rae, C. S., Khor, I. W., Wang, Q., Destito, G., Gonzalez, M. J., Singh, P., Thomas, D. M., Estrada, M. N., Powell, E., Finn, M. G., Manchester, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+trafficking+of+plant+virus+nanoparticles+in+mice+via+the+oral+route.">Systemic trafficking of plant virus nanoparticles in mice via the oral route.</a> Virology. 343, 2224-2235 (2005).</li><li>Raja, K. S., Wang, Q., Gonzalez, M. J., Manchester, M., Johnson, J. E., Finn, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hybrid+virus-polymer+materials.+Synthesis+and+properties+of+PEG-decorated+Cowpea+mosaic+virus.">Hybrid virus-polymer materials. Synthesis and properties of PEG-decorated Cowpea mosaic virus.</a> Biomacromolecules. 4, 472-476 (2003).</li><li>Royston, E., Lee, S. Y., Culver, J. N., Harris, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+silica-coated+Tobacco+mosaic+virus.">Characterization of silica-coated Tobacco mosaic virus.</a> J. Colloid Interface Sci. 298, 706-712 (2006).</li><li>Schlick, T. L., Ding, Z., Kovacs, E. W., Francis, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-surface+modification+in+the+Tobacco+mosaic+virus.">Dual-surface modification in the Tobacco mosaic virus.</a> J. Am. Chem. Soc. 127, 3718-3723 (2005).</li><li>Young, M., Willits, D., Uchida, M., Douglas, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+viruses+as+biotemplates+for+materials+and+their+use+in+nanotechnology.">Plant viruses as biotemplates for materials and their use in nanotechnology.</a> Annu. Rev. Phytopathol. 46, 361-384 (2008).</li></ol>

Metoden presenteras här ger en mycket känslig och snabb analys av reaktiva cysteiner som finns på ytan av anläggningen producerade VLP samt andra proteinkomplex. Maleimider är tiol-specifika reagens, som reagerar med fria sulfhydryl-innehållande molekyler för att bilda stabila tioeterbindningar. Denna metod bygger på specificitet maleimiderna att reagera med sulfhydrylgrupperna inte deltar i interaktioner med andra aminosyror. Bevara den nativa strukturen hos VLP är mycket viktigt genom hela processen. I den be...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namnet av reagenset </td><td> Företag </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> Thinwall, Ultra-Klar rör </td><td> Beckman </td><td> 344.059 </td><td></td></tr><tr><td> mMESSAGE mMACHINE T7 Kit </td><td> Life Tecnologies </td><td> AM1344M </td><td></td></tr><tr><td> Fluorescein-5-maleimid </td><td> Thermo Scientific Life Technologies </td><td> 46.130 F150 </td><td> 46.130 är ur substitut med F150 </td></tr><tr><td> Pierce biotin kvantifieringskit </td><td> Thermo Scientific </td><td> 28.005 </td><td></td></tr><tr><td> EZ-Link maleimid-PEG2-Biotin, No-Väg format </td><td> Thermo Scientific </td><td> 21.901 </td><td></td></tr><tr><td> SM (PEG) n Tvärbindningsmedel </td><td> Thermo Scientific </td><td> 22.107 </td><td></td></tr><tr><td> 10-20% Tris-glycin-gel </td><td> Invitrogen </td><td> EC61352 </td><td></td></tr><tr><td> Laemmli buffert </td><td> Bio-Rad </td><td> 1610737 </td><td></td></tr><tr><td> Tris Glycin SDS löpbuffert </td><td> Invitrogen </td><td> LC2675 </td><td></td></tr><tr><td> Tris Glycin överföringsbuffert </td><td> Invitrogen </td><td> LC3675 </td><td></td></tr><tr><td> Nitrocellulosamembranfilter papper Sandwich </td><td> Invitrogen </td><td> LC2001 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfatasmärkt affinitetsrenade antikroppen till kanin-IgG </td><td> Kirkegaard och Perry Laboratories </td><td> 0751516 </td><td></td></tr><tr><td> NBT / BCIP fosfatassubstrat </td><td> Kirkegaard och Perry Laboratories </td><td> 508.107 </td><td></td></tr></tbody></table>

analysis of the solvent accessibility of cysteine residues on maize rayado fino virus virus-like particles produced in nicotiana benthamiana plants and cross-linking of peptides to vlps

Efterlikna och utnyttja virus egenskaper och fysikalisk-kemiska och fysiska egenskaper har förutsättningar att tillhandahålla lösningar till några av världens mest akuta utmaningar. Det stora sortimentet och typer av virus i kombination med deras spännande egenskaper ger potentiellt oändliga möjligheter för applikationer i virus-baserade tekniker. Virus har förmågan att själv montera in partiklar med diskret form och storlek, specificitet symmetri, mångsidighet och stabila egenskaper under en lång rad av temperatur-och pH-förhållanden. Inte överraskande, med en sådan anmärkningsvärd uppsättning egenskaper är virus föreslagits för användning i biomaterial 9, 14 vacciner, 15, elektroniska material, verktyg kemiska och molekylär elektronisk behållare 4, 5, 10, 11, 16, 18, ​​12. För att utnyttja virus i nanoteknik, måste de ändras från sina naturliga former för att ge nya funktioner. Denna utmanande process kan utföras genom flera mekanismer, inklusive genetisk modifiering av det virala genomet och kemiskt fästa utländska eller önskad molekyler till de reaktiva viruspartikel grupperna 8. Förmågan att modifiera ett virus beror primärt på de fysiokemiska och fysikaliska egenskaper hos viruset. Dessutom genetiska eller fysiokemiska ändringar behöver göras utan att negativt påverka viruset nativa struktur och virus funktion. Majs rayado fino virus (MRFV) höljeproteiner själv montera i Escherichia coli som producerar stabila och tomma VLP som stabiliseras genom protein-protein interaktioner och som kan användas i virus-baserade tekniker applikationer 8. VLP som produceras i tobaksplantor undersöktes som en klätterställning som olika peptider kan kovalent visas 13. Här beskriver vi stegen att 1) ​​bestämma vilka av de lösningsmedel-åtkomliga cysteiner i ett virus kapsid är tillgängliga för modifikatjon, och 2) biokonjugatet peptider till de modifierade kapsider. Genom att använda naturliga eller mutationellt-in aminosyrarester och standardkoppling teknik, har en mängd olika material visats på ytan av växtvirus såsom Brome viruset 3, Nejlika mottle virus 12, Cowpea klorotiska mottle virus 6, tobak mosaik virus 17, kålrot gul viruset 1 och MRFV 13.

Transient uttryck av muterade MRFV (CP) höljeprotein gener i N. benthamiana växter i en PVX-baserad vektor som producerar VLP beskrivs i figur 1. Den modifierade MRFV höljesprotein-genen amplifieras med PCR och sedan placeras under den transkriptionella kontrollen av den duplicerade subgenoma CP promotor i en PVX-baserad vektor, pP2C2S 2, (en gåva från D. Baulcombe, Sainsbury Laboratories, Norwich, England). I in vitro RNA-transkription producerar RNA-transkript som sed...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of the Solvent Accessibility of Cysteine Residues on Maize rayado fino virus Virus-like Particles Produced in Nicotiana benthamiana Plants and Cross-

Analysis of the Solvent Accessibility of Cysteine Residues on Maize rayado fino virus Virus-like Particles Produced in Nicotiana benthamiana Plants and Cross-linking of Peptides to VLPs

En metod för att analysera lösningsmedlet tillgängligheten av tiolgruppen av cysteinrester i<em&gt; Majs rayado fino-virus</em&gt; (MRFV)-virusliknande partiklar (VLP) följt av en peptid tvärbindningsreaktion beskrives. Metoden drar fördel av tillgängligheten av flera kemiska grupper på ytan av VLP som kan vara mål för specifika reaktioner.

Analys av lösningsmedel tillgänglighet av cysteinrester på<em&gt; Majs rayado fino-virus</em&gt; Virusliknande partiklar framställda i<em&gt; Nicotiana benthamiana</em&gt; Växter och tvärbindning av peptider till VLP

Mimicking  and exploiting virus properties and physicochemical and physical  characteristics holds promise to provide solutions to some of  the world's ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Analysis of the Solvent Accessibility of Cysteine Residues on Maize rayado fino virus Virus-like Particles Produced in Nicotiana benthamiana Plants and Cross-linking of Peptides to VLPs

Isolation and Genome Analysis of Single Virions using 'Single Virus Genomics'

Isolering och Genome Analys av Single Virioner använder &quot;enda virus Genomics &#39;

Whole genome amplification and sequencing of single microbial cells enables genomic characterization without the need of cultivation 1-3. Viruses, which ...

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Analys av epitelskada Producerad av<em&gt; Entamoeba histolytica</em&gt; Infektion

Entamoeba histolytica is the causative agent of human amoebiasis, a major cause of diarrhea and hepatic abscess in tropical countries. Infection is ...

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In vitro Analys av MyD88-medierad cellulärt immunsvar till West Nile-virus mutant stam Infektion

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

Modeling The Lifecycle Of Ebola Virus Under Biosafety Level 2 Conditions With Virus-like Particles Containing Tetracistronic Minigenomes

Modellering livscykel Ebola Virus Under skyddsnivå 2 Villkor Med virusliknande partiklar innehållande Tetracistronic Minigenomes

Ebola viruses cause severe hemorrhagic fevers in humans and non-human primates, with case fatality rates as high as 90%. There are no approved vaccines or ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Neutrofil Isolering och analys för att fastställa deras roll i lymfom Cell Känslighet för terapeutiska medel

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Development of Stem Cell-derived Antigen-specific Regulatory T Cells Against Autoimmunity

Utveckling av stamcellshärledda antigen-specifika regulatoriska T-celler mot autoimmunitet

Autoimmune diseases arise due to the loss of immunological self-tolerance. Regulatory T cells (Tregs) are important mediators of immunologic ...

Use of the Soft-agar Overlay Technique to Screen for Bacterially Produced Inhibitory Compounds

Användning av Soft-agar Overlay Technique att screena för bakteriellt producerat Hämmande Föreningar

The soft-agar overlay technique was originally developed over 70 years ago and has been widely used in several areas of microbiological research, ...

Combining Analysis of DNA in a Crude Virion Extraction with the Analysis of RNA from Infected Leaves to Discover New Virus Genomes

Att kombinera analys av DNA i en rå Virion extraktion med analysen av RNA från infekterade blad att upptäcka nya Virus arvsmassa

This metagenome approach is used to identify plant viruses with circular DNA genomes and their transcripts. Often plant DNA viruses that occur in low ...

Rapid, Safe, and Simple Manual Bedside Nucleic Acid Extraction for the Detection of Virus in Whole Blood Samples

Snabb, säker och enkel manuell sängkanten nukleinsyra extraktion för påvisande av Virus i helblod

The rapid diagnosis of an infection is essential for the outbreak management, risk containment, and patient care. We have previously shown a method for ...

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Inrättandet av virusinfektion och analys av värd-Virus interaktion i Drosophila Melanogaster

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our ...