Name: simple and efficient technique for the preparation of testicular cell suspensions
Uploaded: 2013-08-04T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Simple and Efficient Technique for the Preparation of Testicular Cell Suspensions at JoVE.com

وأيد هذا العمل جزئيا من قبل CSIC (I + D المشروع C022) وPEDECIBA. الكتاب أود أن أشكر مارييلا Bollati وفالنتينا بورو من وحدة بيولوجيا الخلية (معهد باستور دي مونتيفيديو) لتعاونهم السخي بشأن فارز الخلية MoFlo، وميريال-مونتفيديو لتوفير بلطف جميع العينات خنزير غينيا المستخدمة في هذا المشروع. الشكل 1 وقد استنسخ بإذن من بيوميد الوسطى؛ الشكلين 2 و 3، والجدول 1 بإذن من S. KARGER AG، بازل، وأرقام 4 و 5 استنسخت أو تكييفها مع إذن من جون وايلي وأولاده، وشركة (حقوق الطبع والنشر التي يملكها ايلي بلاكويل، 2011).

1. إعداد تعليق خلية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تضحية العينة ليتم استخدامها بعد توصيات اللجان المتخصصة مثل IACUC أو ما يعادلها (في أوروغواي، اللجنة الوطنية للتجارب على الحيوانات [مناخ الأعمال]). في حالتنا، وتدار جرعة زائدة من بنتوباربيتال. </li><li style="...

<ol>
	<li>Meistrich, M. L., Prescott, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+spermatogenic+cells+and+nuclei+from+rodent+testes.">Separation of spermatogenic cells and nuclei from rodent testes.</a> Methods of Cell Biology. 15, 15-54 (1977).</li><li>Lam, D. M. K., Furrer, R., Bruce, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+separation,+physical+characterization,+and+differentiation+kinetics+of+spermatogonial+cells+of+the+mouse.">The separation, physical characterization, and differentiation kinetics of spermatogonial cells of the mouse.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 65, 192-199 (1970).</li><li>Romrell, L. J., Bellve, A. R., Fawcet, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+mouse+spermatogenic+cells+by+sedimentation+velocity.">Separation of mouse spermatogenic cells by sedimentation velocity.</a> Dev. Biol. 19, 119-131 (1976).</li><li>Geisinger, A., Rodr&#237;guez-Casuriaga, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+for+gene+expression+studies+in+mammalian+spermatogenesis.">Flow cytometry for gene expression studies in mammalian spermatogenesis.</a> Cytogenet. Genome Res. 128, 46-56 (2010).</li><li>Getun, I. V., Torres, B., Bois, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+purification+of+mouse+meiotic+cells.">Flow cytometry purification of mouse meiotic cells.</a> J. Vis. Exp. (50), e2602 (2011).</li><li>Meistrich, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+mouse+spermatogenic+cells+by+velocity+sedimentation.">Separation of mouse spermatogenic cells by velocity sedimentation.</a> J. Cell Physiol. 80, 299-312 (1972).</li><li>Meistrich, M. L., Bruce, W. R., Clermont, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+composition+of+fractions+of+mouse+testis+cells+following+velocity+sedimentation+separation.">Cellular composition of fractions of mouse testis cells following velocity sedimentation separation.</a> Exp. Cell Res. 79, 213-227 (1973).</li><li>Malkov, M., Fisher, Y., Don, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+schedule+of+the+postnatal+rat+testis+determined+by+flow+cytometry.">Developmental schedule of the postnatal rat testis determined by flow cytometry.</a> Biol. Rep. 59, 84-92 (1998).</li><li>Rodr&#237;guez-Casuriaga, R., Geisinger, A., Santi&#241;aque, F., L&#243;pez, B., Folle, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-purity+flow+sorting+of+early+meiocytes+based+on+DNA+analysis+of+guinea+pig+spermatogenic+cells.">High-purity flow sorting of early meiocytes based on DNA analysis of guinea pig spermatogenic cells.</a> Cytometry A. 79, 625-634 (2011).</li><li>Davey, H. M., Hexley, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Red+but+not+dead?+Membranes+of+stressed+Saccharomyces+cerevisiae+are+permeable+to+propidium+iodide.">Red but not dead? Membranes of stressed Saccharomyces cerevisiae are permeable to propidium iodide.</a> Environ. Microbiol. 13, 163-171 (2011).</li><li>Rodr&#237;guez-Casuriaga, R., Geisinger, A., L&#243;pez-Carro, B., Porro, V., Wettstein, R., Folle, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra-fast+and+optimized+method+for+the+preparation+of+rodent+testicular+cells+for+flow+cytometric+analysis.">Ultra-fast and optimized method for the preparation of rodent testicular cells for flow cytometric analysis.</a> Biol. Proced. Online. 11, 184-195 (2009).</li><li>Span&#242;, M., Evenson, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+analysis+for+reproductive+biology.">Flow cytometric analysis for reproductive biology.</a> Biol Cell. 78, 53-62 (1993).</li></ol>

الأسلوب الأمثل هو موضح هنا يمكن إعداد تعليق خلية من القوارض أنسجة الخصية بطريقة سريعة جدا وقابلة للتكرار، وتجنب انزيم المنظفات والعلاج والمحافظة على سلامة الخلية جيد ونوع النسب. الاختصار في الإجراء (تشمل 15 دقيقة تمتد تشريح الخصية، وقطع الأنسجة، والتصنيع)، والحد الأ...

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Medimachine system</td>
 <td>BD</td>
 <td>340587</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Medicon unit (50 &mu;m)</td>
 <td>BD</td>
 <td>340591</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Filcon unit (50 &mu;m)</td>
 <td>BD</td>
 <td>340603</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DMEM</td>
 <td>Gibco</td>
 <td>430-2100</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fetal calf serum</td>
 <td>PAA</td>
 <td>A11-151</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>NDA</td>
 <td>Chemos BmbH</td>
 <td>277081</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hoechst 33342</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>14533</td>
 <td>Stock solution 5 mg/ml; used at a final concentration of 5 &mu;g/ml</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Propidium iodide</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>287075</td>
 <td>Stock solution 1 mg/ml; used at a final concentration of 50 &mu;g/ml</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

simple and efficient technique for the preparation of testicular cell suspensions

الخصيتين الثدييات هي الأجهزة المعقدة جدا التي تحتوي على أكثر من 30 أنواع مختلفة من الخلايا، بما في ذلك الخلايا الجسدية الخصية ومراحل مختلفة من الخلايا الجرثومية. هذا التباين هو العيب هامة تتعلق بدراسة أسس تكوين الحيوانات المنوية لدى الثدييات، كما هناك حاجة السكان الخلية نقية أو المخصب في مراحل معينة من تطور الحيوانات المنوية لمعظم التحليلات الجزيئية 1. استراتيجيات مختلفة مثل Staput 2،3، تصويل الطرد المركزي 1، والتدفق الخلوي (FC) 4،5 وقد استخدمت للحصول على السكان الخلية الخصية المخصب أو تنقيته من أجل تمكين دراسات التعبير الجيني التفاضلي. هو مطلوب منها أن الخلايا هي في تعليق لمعظم النهج تخصيب / تنقية. من الناحية المثالية، فإن تعليق خلية تكون ممثلة من النسيج الأصلي، لديها نسبة عالية من خلايا قابلة للحياة وقليلة multinucleates - التي تميل إلى تشكيل لللطبيعة المخلوي من ظهارة المنوية 6،7 - وعدم وجود كتل الخلية 1. وكانت تقارير سابقة يتضح أن الايقاف الخلية الخصية باستخدام أسلوب الميكانيكية حصريا على استعداد تجمعت أكثر سهولة من تلك trypsinized 1. من ناحية أخرى، والعلاجات الأنزيمية مع RNAses و / أو الأنزيمات تفصيل مثل التربسين وكولاجيناز تؤدي إلى تدهور الجزيئات محددة، وهو غير مرغوب فيه لبعض التطبيقات المصب. وينبغي أن تكون عملية مثالية قصيرة قدر الإمكان وتتطلب الحد الأدنى من التلاعب، وذلك لتحقيق الحفاظ جيدة من الجزيئات ذات الأهمية مثل mRNAs و. البروتوكولات الحالية لإعداد تعليق خلية من الأنسجة الصلبة وعادة ما تكون تعتمد على المشغل تستغرق وقتا طويلا، إلى حد كبير، وربما تلف انتقائي بعض أنواع الخلايا 1،8. بروتوكول المعروضة هنا يجمع بين مزايا تصنيفها الميكانيكية استنساخه للغاية وجيزة للغاية مع أحدbsence العلاج الأنزيمية، مما أدى إلى تعليق خلية جيدة الجودة التي يمكن استخدامها لتحليل تدفق cytometric والفرز 4، ودراسات التعبير الجيني خفية 9.

ويرد مثال على تعليق خلية مفصلة جيدا من الخصيتين الفئران أعدت مع بروتوكول الموصوفة هنا في الشكل 1. بالمقارنة مع العلاجات الأنزيمية 6،8 وطرق تصنيفها الميكانيكية التي سبق وصفها 2، واحد المقدمة هنا هو أسرع بكثير و...

Watch this Scientific Journal Video about Simple and Efficient Technique for the Preparation of Testicular Cell Suspensions at JoVE.com

Simple and Efficient Technique for the Preparation of Testicular Cell Suspensions

يوصف بروتوكول رواية لإعداد الميكانيكية من الايقاف الخلية الخصية من المواد القوارض، وتجنب الانزيمات والمنظفات و. طريقة بسيطة جدا وسريعة، واستنساخه، ويجعل جيدة الايقاف الخلية الجودة، والتي هي مناسبة لتدفق الفرز واستخراج الحمض النووي الريبي.

تقنيات بسيطة وفعالة لإعداد تعليق خلية الخصية

Mammalian testes are very complex organs that contain over 30 different cell types, including somatic testicular cells and different stages of germline ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

إعداد وحيدة الخلية معلقات من الطحال ماوس مع Dissociator gentleMACS

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

إعداد موحدة وحيدة الخلية معلقات من أنسجة الرئة باستخدام الماوس Dissociator gentleMACS

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

جيل وحيدة الخلية معلقات من الأنسجة العصبية ماوس

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate (pHPL) as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate pHPL as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures

إعداد Lysate مجمع صفائح الدم البشرية (pHPL) باعتبارها الملحق لمصل فعال خالية من الإنسان الحيوان الثقافات الخلايا الجذعية

Platelet derived growth factors have been shown to stimulate cell proliferation efficiently in vivo1,2 and in vitro. This effect has been reported for ...

Preparation of Quality Inositol Pyrophosphates

إعداد Pyrophosphates إينوسيتول الجودة

Myo-inositol is present in nature either unmodified or in more complex phosphorylated derivates. Of the latest, the two most abundant in eukaryotic cells ...

Measurement of Vacuolar and Cytosolic pH In Vivo in Yeast Cell Suspensions

Measurement of Vacuolar and Cytosolic pH In Vivo in Yeast Cell Suspensions

قياس درجة الحموضة رغوي وعصاري خلوي<em&gt; في فيفو</em&gt; في تعليق خلية الخميرة

Vacuolar and  cytosolic pH are highly regulated in yeast cells and occupy a central role in  overall pH homeostasis. We describe  protocols for ...

Efficient Agroinfiltration of Plants for High-level Transient Expression of Recombinant Proteins

Agroinfiltration كفاءة من النباتات للتعبير عابر الرفيع المستوى من البروتينات المؤتلف

Mammalian cell culture is the major platform for commercial production of human vaccines and therapeutic proteins. However, it cannot meet the increasing ...

Slide Preparation Method to Preserve Three-dimensional Chromatin Architecture of Testicular Germ Cells

طريقة إعداد الشرائح للحفاظ على هندسة الكروماتين ثلاثية الأبعاد للخلايا الجرثومية الخصية

During testicular germ cell differentiation, the structure of nuclear chromatin dynamically changes. The following describes a method designed to preserve ...

Efficient iPS Cell Generation from Blood Using Episomes and HDAC Inhibitors

كفاءة الجذع الجيل خلية من الدم عن طريق Episomes وHDAC المانعون

This manuscript illustrates a protocol for efficiently creating integration-free human induced pluripotent stem cells (iPSCs) from peripheral blood using ...

Efficient Mammalian Cell Expression and Single-step Purification of Extracellular Glycoproteins for Crystallization

كفاءة الثدييات التعبير خلية وخطوة واحدة خارج الخلية تنقية البروتينات السكرية لبلورة

Production of secreted mammalian proteins for structural and biophysical studies can be challenging, time intensive, and costly. Here described is a time ...