Name: flexural rigidity measurements of biopolymers using gliding assays
Uploaded: 2012-11-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Flexural Rigidity Measurements of Biopolymers Using Gliding Assays at JoVE.com

Biz yardım protokolü göstermek için Şekil 1 ve Anna Ratliff hazırlamak için Melissa Klocke ederim. Bu çalışma Bilim İlerlemesi için Araştırma Kurumu tarafından desteklenmiştir.

1. Mikrotubul Kayma Testi Stok Çözümleri Öncesinde kayma testin hazırlayın. <ol><li> Seyrek parlak organik fluorofor 22 ile etiketlenmiş 0.5 mg mikrotübüller Polimerize. Hedef etiketi konsantrasyonu 1 mikrotübülün mikrometre başına fluorofor veya 1.500 tübülin dimerleri başına yaklaşık 1 fluorofor bir etiketleme yoğunluğudur. Oda sıcaklığında, ışık saklayın kadar iki hafta için alüminyum folyo ile korunmaktadır. </li><li> Yaklaşık 1 mcM az biot...

<ol>
	<li>Hawkins, T., Mirigian, M., Selcuk Yasar, M., Ross, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanics+of+microtubules.">Mechanics of microtubules.</a> Journal of biomechanics. 43, 23-30 (2010).</li><li>Pampaloni, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+fluctuations+of+grafted+microtubules+provide+evidence+of+a+length-dependent+persistence+length.">Thermal fluctuations of grafted microtubules provide evidence of a length-dependent persistence length.</a> Proceedings of the national academy of sciences U S A. 103, 10248-10253 (2006).</li><li>Taute, K. M., Pampaloni, F., Frey, E., Florin, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtubule+dynamics+depart+from+the+wormlike+chain+model.">Microtubule dynamics depart from the wormlike chain model.</a> Physical review letters. 100, 028102 (2008).</li><li>Van den Heuvel, M. G., de Graaff, M. P., Dekker, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtubule+curvatures+under+perpendicular+electric+forces+reveal+a+low+persistence+length.">Microtubule curvatures under perpendicular electric forces reveal a low persistence length.</a> Proceedings of the national academy of sciences U.S.A. 105, 7941-7946 (2008).</li><li>Gittes, F., Mickey, B., Nettleton, J., Howard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flexural+rigidity+of+microtubules+and+actin+filaments+measured+from+thermal+fluctuations+in+shape.">Flexural rigidity of microtubules and actin filaments measured from thermal fluctuations in shape.</a> Journal of cell biology. 120, 923-934 (1993).</li><li>Brangwynne, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bending+dynamics+of+fluctuating+biopolymers+probed+by+automated+high-resolution+filament+tracking.">Bending dynamics of fluctuating biopolymers probed by automated high-resolution filament tracking.</a> Biophysical journal. 93, 346-359 (2007).</li><li>Cassimeris, L., Gard, D., Tran, P. T., Erickson, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=XMAP215+is+a+long+thin+molecule+that+does+not+increase+microtubule+stiffness.">XMAP215 is a long thin molecule that does not increase microtubule stiffness.</a> Journal of cell science. 114, 3025-3033 (2001).</li><li>Valdman, D., Atzberger, P. J., Yu, D., Kuei, S., Valentine, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+analysis+methods+for+the+robust+measurement+of+the+flexural+rigidity+of+biopolymers.">Spectral analysis methods for the robust measurement of the flexural rigidity of biopolymers.</a> Biophysical. 102, 1144-1153 (2012).</li><li>van Mameren, J., Vermeulen, K. C., Gittes, F., Schmidt, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leveraging+single+protein+polymers+to+measure+flexural+rigidity.">Leveraging single protein polymers to measure flexural rigidity.</a> Journal of physical chemistry b. 113, 3837-3844 (2009).</li><li>Hua, W., Chung, J., Gelles, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinguishing+inchworm+and+hand-over-hand+processive+kinesin+movement+by+neck+rotation+measurements.">Distinguishing inchworm and hand-over-hand processive kinesin movement by neck rotation measurements.</a> Science. 295, 844-848 (2002).</li><li>Duke, T., Holy, T. E., Leibler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Gliding+assays"+for+motor+proteins:+A+theoretical+analysis.">"Gliding assays" for motor proteins: A theoretical analysis.</a> Physical review letters. 74, 330-333 (1995).</li><li>Mehrbod, M., Mofrad, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+significance+of+microtubule+flexural+behavior+in+cytoskeletal+mechanics.">On the significance of microtubule flexural behavior in cytoskeletal mechanics.</a> PLoS one. 6, e25627 (2011).</li><li>Szarama, K. B., Gavara, N., Petralia, R. S., Kelley, M. W., Chadwick, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoskeletal+changes+in+actin+and+microtubules+underlie+the+developing+surface+mechanical+properties+of+sensory+and+supporting+cells+in+the+mouse+cochlea.">Cytoskeletal changes in actin and microtubules underlie the developing surface mechanical properties of sensory and supporting cells in the mouse cochlea.</a> Development. 139, 2187-2197 (2012).</li><li>Gal, N., Weihs, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+Mechanics+and+Activity+of+Breast+Cancer+Cells+Correlate+with+Metastatic+Potential.">Intracellular Mechanics and Activity of Breast Cancer Cells Correlate with Metastatic Potential.</a> Cell biochemistry and biophysics. , (2012).</li><li>Volokh, K. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+tensegrity+in+cell+mechanics.">On tensegrity in cell mechanics.</a> Mol. Cell Biomech. 8, 195-214 (2011).</li><li>Kasas, S., Dietler, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+measuring+microtubule+stiffness.">Techniques for measuring microtubule stiffness.</a> Current nanoscience. 3, 85-96 (2007).</li><li>Kikumoto, M., Kurachi, M., Tosa, V., Tashiro, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flexural+rigidity+of+individual+microtubules+measured+by+a+buckling+force+with+optical+traps.">Flexural rigidity of individual microtubules measured by a buckling force with optical traps.</a> Biophysical journal. 90, 1687-1696 (2006).</li><li>Venier, P., Maggs, A. C., Carlier, M. F., Pantaloni, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+microtubule+rigidity+using+hydrodynamic+flow+and+thermal+fluctuations.">Analysis of microtubule rigidity using hydrodynamic flow and thermal fluctuations.</a> Journal of biological chemistry. 269, 13353-13360 (1994).</li><li>van den Heuvel, M. G., Bolhuis, S., Dekker, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+length+measurements+from+stochastic+single-microtubule+trajectories.">Persistence length measurements from stochastic single-microtubule trajectories.</a> Nano letters. 7, 3138-3144 (2007).</li><li>Phillips, R., Kondev, J., Theriot, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Physical biology of the cell. , (2008).</li><li>Berliner, E., Young, E. C., Anderson, K., Mahtani, H. K., Gelles, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Failure+of+a+single-headed+kinesin+to+track+parallel+to+microtubule+protofilaments.">Failure of a single-headed kinesin to track parallel to microtubule protofilaments.</a> Nature. 373, 718-721 (1995).</li><li>Anderson, E. K., Martin, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fluorescent+GTP+analog+as+a+specific,+high-precision+label+of+microtubules.">A fluorescent GTP analog as a specific, high-precision label of microtubules.</a> Biotechniques. 51, 43-48 (2011).</li><li>Hyman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+modified+tubulins.">Preparation of modified tubulins.</a> Methods in enzymology. 196, 478-485 (1991).</li><li>Lee, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Curve+reconstruction+from+unorganized+points.">Curve reconstruction from unorganized points.</a> Computer aded geometric design. 17, 161-177 (2000).</li><li>Yildiz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin+V+walks+hand-over-hand:+Single+fluorophore+imaging+with+1.5-nm+localization.">Myosin V walks hand-over-hand: Single fluorophore imaging with 1.5-nm localization.</a> Science. 300, 2061-2065 (2003).</li><li>Friedman, L. J., Chung, J., Gelles, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viewing+dynamic+assembly+of+molecular+complexes+by+multi-wavelength+single-molecule+fluorescence.">Viewing dynamic assembly of molecular complexes by multi-wavelength single-molecule fluorescence.</a> Biophysical. 91, 1023-1031 (2006).</li><li>Smith, C. S., Joseph, N., Rieger, B., Lidke, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast,+single-molecule+localization+that+achieves+theoretically+minimum+uncertainty.">Fast, single-molecule localization that achieves theoretically minimum uncertainty.</a> Nature Methods. 7, 373-375 (2010).</li><li>Nitzsche, B., Ruhnow, F., Diez, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantum-dot-assisted+characterization+of+microtubule+rotations+during+cargo+transport.">Quantum-dot-assisted characterization of microtubule rotations during cargo transport.</a> Nature. 3, 552-556 (2008).</li></ol>

Sebat uzunluk ölçümleri bireysel biyopolimerlerin mekanik özelliklerinin iyi bir karakterizasyon vardır. Bu yazıda, mikrotübül sebat uzunluk ölçüm yöntemi tanımlamışlardır. Girişte belirtildiği gibi, bu yöntem, sadece kolayca kayma deneyi, 3.9, en son adım olarak, reaktiflerin, sıcaklık veya viskozite değiştirmek sureti ile polimerize etmek veya mikrotübüller, adım 1.1, tarafından çeşitli koşullar mikrotübül mekanik özelliklerinin incelenmesi için genişletilmiştir farklı koşullar a...

Hücre iskeleti, çoğu ökaryotik hücrelerde bulunan biyopolimerlerin bir ağ, hücresel organizasyon, hücre içi ulaşım, ve hücre mekaniği bir rol oynar. Hücre iskeleti (öncelikle aktin ve mikrotübüller) ve biyopolimerlerin mekanik özellikleri de, bir bütün olarak 12 hücre mekanik özelliklerini belirlemede önemli bir rol oynamaktadır. Tüm hücre mekaniği, sağlıklı ve hastalıklı hücrelerin 13,14 karakterize edebilir ve hücresel motilite 15 dahil olduğundan, altta yatan sitoskeletal bileşenlerin mekanik özellikleri son yirmi yılda 1 için çalışma aktif alan olmuştur. Biyopolimerlerin esneklik (veya sertliği) kalıcılığı uzunluğu, ortam sıcaklığında, ısı dalgalanmaları altında yaklaşık bir radyan tarafından eğilir polimer uzunluğu ile karakterize edilir. Bir dizi teknik examp için sebat uzunluğu 16, ölçmek için geliştirilmiştirhidrodinamik akış, optik tuzakları, ya da elektrik alanları 4,17,18, ve çözüm 5,6 ücretsiz polimerlerin dalgalanmaları ölçmek pasif teknikleri kullanarak polimer bükme içeren le aktif teknikleri. Aktif ölçümler, ancak özel kurulumları mikrometre ölçekte bilinen kuvvetler uygulamak gerektirir ve serbest dalgalanma ölçümleri kullanılan mikroskop odak düzlemi difüzyon dışarı nedeniyle zor olabilir. Bu yazıda, mikrotübül sebat uzunluğu, sitoskeletal polimer ölçmek için tamamlayıcı, pasif, tekniği açıklar. Tekniği polimer daima 19 odak düzlemi kalmasını sağlamak kayma testleri, içerir. Ayrıca, polimer boyunca belirli yerlerde de karakterize edilir, böylece ilgi polimer ile kalıcı olarak bağlanmış tek bir izleme floroforlar, içerir. Yöntemin özel bir çizgi Figür gösterilire 1. Kinesin mikrotübül + sonuna doğru özellikle hareket, yani bir kayma tayininde mikrotübül tek yönlü tahrikli. Mikrotübül yapının önde gelen ucunu, ekli son kinesin ötesinde, çevreleyen bir çözelti termal kuvvetler altında dalgalanma serbesttir. Mikrotübül ileri itilir gibi, uç cam slayt üzerinde daha ileri bir yeni kinesin molekül bağlama kadar belirli bir dalgalanma, donar dalgalanır. Kinesin çok güçlü mikrotübüller ekler Çünkü, mikrotübül lider sonu yolunu takip sınırlıdır. Bu nedenle, mikrotübül yörünge donmuş istatistiksel dalgalanmalar mikrotübüllerin 11 serbest uç bölgesinin istatistiksel dalgalanmalar aynıdır, ve bu yüzden 20 göre süreklilik uzunluk hesaplamak için de kullanılabilir <img alt="Denklem 1" fo:content-width="1in" fo:src="/files/ftp_upload/50117/50117eq1highres.jpg" src = &quot;/ files/ftp_upload/50117/50117eq1.jpg&quot; /&gt; l p mikrotübülün sebat uzunluğu nerede, θ s kontur uzunluğu s ayrılmış yörünge için teğet arasındaki açı olup, &lt;&gt; temsil eder bir kontur uzunluğu s ile ayrılmış pozisyonları tüm çiftleri üzerinde bir ortalama. Kayma testi kendisi özel bir streptavidin biotin bağlantı yoluyla cam slayt bağlı coiled coil 21&#39;de kinesin biotinlenmiş kullanır. Bu eki motora etki bağlamak ve mikrotübüller itmek için ücretsiz sağlar. Mikrotübül yörüngeleri takip etmek için, mikrotübüller seyrek organik floroforlar 22,23 ile etiketlenir - etiketler tek floroforlar tek bir molekül floresan mikroskobu kullanılarak çözülebilir olması yeterli seyrek olmalıdır. Tek floroforlar IDL yazılmış görüntü analiz rutinleri kullanılarak izlenir. Her fluorofor yörüngeleri belirli bir mikrofon bağlırotubule otomatik 24 bileşik mikrotübül yörünge birleştirilir. Bir yörünge boyunca her noktasına θ teğet açıları hesaplanır; bu teğet açılardan &lt;cosθ s&gt; değeri, her kontur uzunluğu ler için hesaplanır. Son olarak, bu veriler Denk sığdırılır. 1. Belirli bir mikrotübül için bir kalıcılık uzunluk elde etmek için, ya da aynı kayma tahlil içinde çok mikrotübüller için. Yöntem koşullarının geniş bir çeşitliliği (bağlı mikrotübül ilişkili protein (MAP), ya da viskoz bir dizi çözüm ile, mikrotübül bağlı farklı stabilizasyon ajanları ya da diğer küçük moleküllerin) &#39;de hazırlanan mikrotübüller birlikte çalışmak için yeterince sağlamdır. Bizim laboratuvarda, teknik farklı dengeleyici maddeler ile mikrotübüllerin ve mikrotübüller boyunca uzunluğunun bir fonksiyonu olarak mikrotübül kalıcılığı uzunluk karakterize etmek için kullanılmaktadır. Ana sınırlamadır mikrotübül hala zorunluluk olduğunuupport kinesin motilitesi. Kinesin bir sağlam motor enzim olduğundan, bu oldukça gevşek bir sınırlamadır. Bir miyozin aile enzimi ile aktin ve kinesin ile mikrotübüller değiştirerek, aktin sebat uzunluğu aynı tekniği kullanılarak ölçülebilir.

<table border="1"&gt;<tbody&gt;<tr&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;<td<strong&gt; Reaktifler</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Imidazol</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrich</td&gt;<td&gt; I2399</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Potasyum klorür</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrich</td&gt;<td&gt; P9541</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Magnezyum klorid</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrich</td&gt;<td&gt; M8266</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; EGTA</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrich</td&gt;<td&gt; E3889</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; BSA</td&gt;<td&gt; Calbiochem</td&gt;<td&gt; 126.615</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Biotinlenmiş BSA</td&gt;<td&gt; Thermo Scientific</td&gt;<td&gt; 29130</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Α-kazein</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrich</td&gt;<td&gt; C6780</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Streptavidin</td&gt;<td&gt; Thermo Scientific</td&gt;<td&gt; 21125</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Ditiyotretol</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrich</td&gt;<td&gt; D0632</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Paklitaksel</td&gt;<td&gt; LC Laboratuvarları</td&gt;<td&gt; P-9600</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Glukoz oksidaz</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrich</td&gt;<td&gt; G2133</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Katalaz</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrich</td&gt;<td&gt; C100</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Glukoz</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrich</td&gt;<td&gt; G8270</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; ATP</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrich</td&gt;<td&gt; A2383</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 2-merkaptoetanol</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrich</td&gt;<td&gt; M3148</td&gt;<td&gt; Zehirlidir. Az miktarda satın alın.</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 24X60 mm No 1 1/2 cam kapak</td&gt;<td&gt; VWR</td&gt;<td&gt; 48393-252</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 22x22 mm No 1 cam kapak</td&gt;<td&gt; Altın Mühür</td&gt;<td&gt; 3306</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Yüksek Vakum Gresi</td&gt;<td&gt; Dow-Corning</td&gt;<td&gt; NA</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;<td<strong&gt; Ekipman</strong&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; TIRF mikroskop</td&gt;<td&gt; Birçok</td&gt;<td&gt; NA</td&gt;<td&gt; Bu yöntemde kullanılan TIRF mikroskop ev yapımı.</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; IDL (yazılım)</td&gt;<td&gt; Exelis</td&gt;<td&gt; NA</td&gt;<td&gt; MATLAB, ImageJ veya diğer görüntü analiz yazılımı yerine olabilir.</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table

flexural rigidity measurements of biopolymers using gliding assays

Mikrotübüller sitoskeletal hücre bölünmesinde rol polimerler, hücre mekaniği, ve hücre içi taşıma vardır. Bu fonksiyonların her biri sert ve hücre çapı önemli bir kısmını kapsayan düz yeterli mikrotübüller gerektirir. Sonuç olarak, mikrotübül kalıcılık uzunluğu, sertlik ölçüsü, aktif son yirmi yılda 1 için incelenmiştir. Kısa mikrotübüller uzun mikrotübüller 2-4 den 10-50 kat daha sert, ve hatta uzun mikrotübüller büyüklükte 5-9 sipariş göre farklılık sebat uzunlukları ölçüldü: Bununla birlikte, açık sorular kalır. Burada, mikrotübül sebat uzunluğunu ölçmek için bir yöntem mevcut. Yöntem bir kinesin tahrik mikrotübül kayma deneyi 10 dayanır. Mikrotübül bağlı bireysel floroforlar tek parçacık izleme, glidin bireysel mikrotübül seyrek floresan etiketleme birleştirerekTek mikrotübüller g yörüngeleri nanometre seviyesinde hassasiyet ile izlenir. Yörüngesel süreklilik uzunluğu 11 kullanılan şartlar altında mikrotübülün kalıcılığı uzunluğu ile aynıdır. Bir otomatik izleme rutin bireysel mikrotübüller bağlı floroforlar gelen mikrotübül yörüngeleri oluşturmak için kullanılır ve bu yörünge sebat uzunluğu IDL yazılmış rutinleri kullanılarak hesaplanır. Bu teknik hızla uygulanabilir, ve deney bir gün içinde 100 mikrotübül sebat uzunluğu ölçme yeteneğine sahiptir. Yöntem mikrotübüller boyunca uzunluğunun bir fonksiyonu olarak süreklilik uzunluk dahil çeşitli koşullar altında kalıcılık uzunluğunu ölçmek için genişletilebilir. Ayrıca, kullanılan analiz rutinleri yanı aktin filamentler sebat uzunluğunu ölçmek için, miyozin tabanlı etkili kayma deneyleri için uzatılabilir.

Bir kayma testte bir anlık Şekil 2 &#39;de gösterilmiştir. İyi bir mikrotübül yoğunluk görüş alanı başına 1-10 mikrotübüller olduğunu; mikrotübüller birbirlerine çapraz olarak önemli ölçüde daha mistracking neden olacaktır. Şekil 2 &#39;de kayma testte 11 mikrotübül yörüngesel bir grafiği Şekil 3&#39; de gösterilmiştir. Tipik yörüngeleri 10 ila 30 mikron uzunluğunda; tek mikrotübül başka kestiği yerlerde bazı yörüngeleri boşl...

Watch this Scientific Journal Video about Flexural Rigidity Measurements of Biopolymers Using Gliding Assays at JoVE.com

Flexural Rigidity Measurements of Biopolymers Using Gliding Assays

Sebat uzunluğu veya biyopolimerlerin eğilme rijitliği ölçmek için bir yöntem tarif edilmiştir. Yöntem deneysel olarak bireysel mikrotübül kalıcılığı uzunluğunu belirlemek için bir kinesin tahrik mikrotübül kayma deneyi kullanmaktadır ve aktin bazlı kayma deneyleri için uyarlanabilir.

Kayma Tahliller kullanma Biyopolimerler eğilme Katılığı Ölçümleri

Microtubules are cytoskeletal polymers which  play a role in cell division, cell mechanics, and intracellular transport. Each of these functions requires ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Developing Custom Chinese Hamster Ovary-host Cell Protein Assays using Acoustic Membrane Microparticle Technology

Akustik Membran mikropartikül Teknoloji Geliştirme Özel Çin Hamsteri Yumurtalık-host Hücre Proteini Tahliller

Custom assays for unique proteins are often limited to time consuming manual detection and quantitation techniques such as ELISA or Western blots due to ...

Multiplexed Single-molecule Force Proteolysis Measurements Using Magnetic Tweezers

Manyetik cımbız kullanarak Multiplexed Tek molekül Kuvvetleri Proteoliz Ölçümleri

The  generation and detection of mechanical forces is a ubiquitous aspect of cell physiology,  with direct relevance to cancer metastasis1, atherogenesis2 ...

Micro-particle Image Velocimetry for Velocity Profile Measurements of Micro Blood Flows

Mikro Kan akış hızı Profil ölçümleri için mikro-parçacık imaj velosimetri

Micro-particle image velocimetry (&mu;PIV) is used to visualize paired images of micro particles seeded in blood flows. The images are cross-correlated to ...

Longitudinal Measurement of Extracellular Matrix Rigidity in 3D Tumor Models Using Particle-tracking Microrheology

Partikül izleme Microrheology kullanarak 3D Tümör Modelleri Ekstrasellüler Matriks Rijitliğinin Boyuna Ölçümü

The mechanical microenvironment has been shown to act as a crucial regulator of tumor growth behavior and signaling, which is itself remodeled and ...

Bead Aggregation Assays for the Characterization of Putative Cell Adhesion Molecules

Putatif Hücre yapışma molekülleri Karakterizasyonu için Boncuk Toplama Tahliller

Cell-cell adhesion is fundamental to multicellular life and is mediated by a diverse array of cell surface proteins. However, the adhesive interactions ...

Molecular Entanglement and Electrospinnability of Biopolymers

Moleküler Dolaşıklık Biyopolimerlerin Electrospinnability

Electrospinning is a fascinating technique to fabricate micro- to nano-scale fibers from a wide variety of materials. For biopolymers, molecular ...

Methods for the Self-integration of Megamolecular Biopolymers on the Drying Air-LC Interface

Kurutma Hava-LC Arayüz üzerinde Megamolecular Biyopolimerlerin Kendinden entegrasyonu için Yöntemler

Living organisms that use water are always prone to drying in the environment. Their activities are driven by biopolymer-based micro- and ...

Power Input Measurements in Stirred Bioreactors at Laboratory Scale

Laboratuvar ölçekte karıştırılmış Biyoreaktörler güç giriş ölçümlerde

The power input in stirred bioreactors is an important scaling-up parameter and can be measured through the torque that acts on the impeller shaft during ...

A Millimeter Scale Flexural Testing System for Measuring the Mechanical Properties of Marine Sponge Spicules

Deniz sünger Spicules mekanik özelliklerini ölçmek için bir milimetre ölçek bükülme test sistemi

Many load bearing biological structures (LBBSs)&#8212;such as feather rachises and spicules&#8212;are small (&#60;1 mm) but not microscopic. Measuring the ...