Name: molecular imaging to target transplanted muscle progenitor cells
Uploaded: 2013-03-27T08:54:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Molecular Imaging to Target Transplanted Muscle Progenitor Cells at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить Sanjiv Gambhir за дар гена-репортера fluc/mrfp/sr39tk. Эта работа финансировалась по сети стволовых клеток (SCN) из Канады, и путешествие фонда Джесси.

1. Техническое обслуживание и распространения C2C12 миобластов <ol><li> Плита C2C12 миобластов в 75 см 2 колбы и поддержания клеток в сыворотке высокий уровень глюкозы в Дульбекко изменения Орла (HG-DMEM) с добавлением эмбриональной телячьей сыворотки (FBS) до конечной концентрации 10%. Не допус?...

<ol>
	<li>Emery, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+muscular+dystrophies.">The muscular dystrophies.</a> Lancet. 359, 687-695 (2002).</li><li>Blake, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Function+and+genetics+of+dystrophin+and+dystrophin-related+proteins+in+muscle.">Function and genetics of dystrophin and dystrophin-related proteins in muscle.</a> Physiol. Rev. 82, 291-329 (2002).</li><li>Goldring, K., Partridge, T., Watt, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+stem+cells.">Muscle stem cells.</a> J. Pathol. 197, 457-467 (2002).</li><li>Partridge, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+that+participate+in+regeneration+of+skeletal+muscle.">Cells that participate in regeneration of skeletal muscle.</a> Gene Ther. 9, 752-753 (2002).</li><li>Moss, F. P., Leblond, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Satellite+cells+as+the+source+of+nuclei+in+muscles+of+growing+rats.">Satellite cells as the source of nuclei in muscles of growing rats.</a> Anat. Rec. 170, 421-435 (1971).</li><li>Snow, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+autoradiographic+study+of+satellite+cell+differentiation+into+regenerating+myotubes+following+transplantation+of+muscles+in+young+rats.">An autoradiographic study of satellite cell differentiation into regenerating myotubes following transplantation of muscles in young rats.</a> Cell Tissue Res. 186, 535-540 (1978).</li><li>Kuang, S., Rudnicki, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emerging+biology+of+satellite+cells+and+their+therapeutic+potential.">The emerging biology of satellite cells and their therapeutic potential.</a> Trends Mol. Med. 14 (2), 82 (2008).</li><li>Hoffman, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+dystrophin+in+muscle-biopsy+specimens+from+patients+with+Duchenne's+or+Becker's+muscular+dystrophy.">Characterization of dystrophin in muscle-biopsy specimens from patients with Duchenne's or Becker's muscular dystrophy.</a> N. Engl. J. Med. 318, 1363-1368 (1988).</li><li>Ray, P., Tsien, R., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Construction+and+validation+of+improved+triple+fusion+reporter+gene+vectors+for+molecular+imaging+of+living+subjects.">Construction and validation of improved triple fusion reporter gene vectors for molecular imaging of living subjects.</a> Cancer Res. 67 (7), 3085 (2007).</li><li>Ray, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+tri-fusion+multimodality+reporter+gene+expression+in+living+subjects.">Imaging tri-fusion multimodality reporter gene expression in living subjects.</a> Cancer Res. 64, 1323-1330 (2004).</li><li>Massoud, T. F., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+imaging+in+living+subjects:+seeing+fundamental+biological+processes+in+a+new+lights.">Molecular imaging in living subjects: seeing fundamental biological processes in a new lights.</a> Genes Dev. 17, 545-580 (2003).</li><li>Sicinski, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+basis+of+muscular+dystrophy+in+the+mdx+mouse:+a+point+mutation.">The molecular basis of muscular dystrophy in the mdx mouse: a point mutation.</a> Science. 244, 1578-1580 (1989).</li><li>Mattson, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pathogenesis of neurodegenerative disorders. In: Contemporary neuroscience. X, 294 (2001).</li><li>Andersson, J. E., Bressler, B. H., Ovalle, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+regeneration+in+hind+limb+skeletal+muscle+of+the+mdx+mouse.">Functional regeneration in hind limb skeletal muscle of the mdx mouse.</a> J. Muscle Res. Cell Motil. 9, 499-515 (1988).</li></ol>

В этом исследовании мы описали быстрый и надежный молекулярной визуализации, ген-репортер подход к неинвазивным целевой миобластов / ПДК после трансплантации. Хотя это исследование демонстрирует краткосрочные локализации пересаженного ПДК по bioluminescense томография (BLI), манера,</em...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td><td> Комментарии (по желанию) </td></tr><tr><td> C2C12 миобластов </td><td> ATCC </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Дульбекко изменения Орла Средний </td><td> Life Technologies </td><td> 12800-017 </td><td></td></tr><tr><td> эмбриональной бычьей сывороткой </td><td> Life Technologies </td><td> 12483020 </td><td></td></tr><tr><td> 0,25% трипсина-EDTA </td><td> Life Technologies </td><td> 25200-72 </td><td></td></tr><tr><td> Хэнкс сбалансированный солевой раствор </td><td> Sigma Aldrich </td><td> H6648 </td><td></td></tr><tr><td> Липофектамина 2000 </td><td> Life Technologies </td><td> 11668-019 </td><td></td></tr><tr><td> Nikon Eclipse TE2000-5 </td><td> Nikon Instruments Инк </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Xenolight D-люциферин </td><td> PerkinElmer </td><td> 122796 </td><td> 40 мг / мл в PBS </td></tr></tbody></table>

molecular imaging to target transplanted muscle progenitor cells

Мышечная дистрофия Дюшенна (МДД) является тяжелой генетической нервно-мышечные расстройства, которое поражает 1 из 3500 мальчиков и характеризуется прогрессирующей дегенерацией мышц 1, 2. У пациентов, способности резидентных клеток спутниковой мышцы (ПК) для восстановления поврежденных мышечных волокон становится все более неэффективной 4. Таким образом, пересадка мышц клетки-предшественники (ПДК) / миобластов у здоровых людей является перспективным терапевтическим подходом к DMD. Основным ограничением к использованию стволовых клеток, однако, является отсутствие надежных технологий визуализации для долгосрочного мониторинга имплантированных клеток, а также для оценки ее эффективности. Здесь мы описываем неинвазивным, в режиме реального времени подход к оценке успешности трансплантации миобластов. Этот метод использует единый ген-репортер слияния состоит из генов (люциферазы светляков [флуктуаций], мономерного красного флуоресцентного белка [mrfp] и SR39 тимидинкиназы [sr39tk]), чьи Expression могут быть отображены различные методы визуализации 9, 10. Различные методы визуализации, включая позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ), однофотонная эмиссионная компьютерная томография (ОФЭКТ), магнитно-резонансная томография (МРТ), оптических изображений, и высокая частота 3D-УЗИ теперь доступны, каждый со своими уникальными преимуществами и ограничениями 11. Биолюминесценции изображений (BLI) исследования, например, имеют то преимущество, что относительно низкой стоимости и высокой пропускной способностью. Именно по этой причине, что в этом исследовании, мы используем люциферазы светляков (флуктуации), репортер последовательности генов, содержащихся в геном синтеза и биолюминесценции изображений (BLI) для краткосрочных локализации жизнеспособной C2C12 миобластов после имплантации в мышь модель DMD (мышечная дистрофия на Х-хромосоме [MDX] мышь) 12-14. Важно отметить, что BLI предоставляет нам средства для изучения кинетики меченого ПДК после имплантации, а также будет полезна для отслеживания клетки неоднократно в течение тIME и последующие миграции. Наш корреспондент гена подход также позволяет нам объединить несколько методов визуализации в единый субъект жизни; учитывая томографических природы, прекрасные пространственным разрешением и способностью масштабироваться до более крупных животных и человека 10,11, ПЭТ лягут в основу будущей работы, которую мы предлагаю может способствовать быстрому переводу методы, разработанные в клетки доклинических моделях и клинического применения.

По 50-60% слияния, C2C12 миобласты были временно трансфицировали с вышеупомянутыми слияния репортер генной конструкции состоят из люциферазы светляков [флуктуаций], мономерного красного флуоресцентного белка [mrfp] и SR39 тимидинкиназы [sr39tk] (рис. 1а). Эффективность транс...

Watch this Scientific Journal Video about Molecular Imaging to Target Transplanted Muscle Progenitor Cells at JoVE.com

Molecular Imaging to Target Transplanted Muscle Progenitor Cells

Неинвазивных средств для оценки успеха пересадки миобластов описано. Метод использует единый ген-репортер слияния состоит из генов, экспрессия которых могут быть выявлены различные методы визуализации. Здесь мы воспользуемся<em&gt; Флуктуации</em&gt; Репортер последовательности генов к клеткам-мишеням с помощью биолюминесценции изображений.

Молекулярная визуализация на цель трансплантированных клеток-предшественников мышц

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a severe genetic neuromuscular disorder that affects 1 in 3,500 boys, and is characterized by progressive muscle ...

Research

JoVE Journal

Medicine

In vivo Near Infrared Fluorescence (NIRF) Intravascular Molecular Imaging of Inflammatory Plaque, a Multimodal Approach to Imaging of Atherosclerosis

In vivo Near Infrared Fluorescence NIRF Intravascular Molecular Imaging of Inflammatory Plaque, a Multimodal Approach to Imaging of Atherosclerosis

В естественных условиях ближней инфракрасной флуоресценции (NIRF) внутрисосудистого молекулярной визуализации воспалительных Зубной налет, мультимодальный подход к изображений атеросклероза

The vascular response to injury is a well-orchestrated inflammatory response triggered by the accumulation of macrophages within the vessel wall leading ...

Labeling Stem Cells with Ferumoxytol, an FDA-Approved Iron Oxide Nanoparticle

Маркировка стволовых клеток с Ferumoxytol, FDA-Approved Оксид железа наночастиц

Stem cell based therapies offer significant potential for the field of regenerative medicine. However, much remains to be understood regarding the in vivo ...

The Use of Thermal Infra-Red Imaging to Detect Delayed Onset Muscle Soreness

Использование тепловых ИК-изображений для обнаружения задержки мышцах Начало

Delayed onset muscle soreness (DOMS), also known as exercise induced muscle damage (EIMD), is commonly experienced in individuals who have been physically ...

MR Molecular Imaging of Prostate Cancer with a Small Molecular CLT1 Peptide Targeted Contrast Agent

MR молекулярной визуализации рака простаты с небольшой молекулярной CLT1 пептида целевых Агента Contrast

Tumor extracellular  matrix has abundance of cancer related proteins that can be used as biomarkers  for cancer molecular imaging. In this work,  we ...

High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

Высокая пропускная проточной цитометрии Клеточная Анализ для выявления антител к N-метил-D-аспартат рецепторов или допамин-2 рецепторов в сыворотке человека

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Последовательный<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Визуализация остеогенные стволовых / клеток-предшественников во время разрушения Ремонт

Bone turns over continuously and is highly regenerative following injury. Osteogenic stem/progenitor cells have long been hypothesized to exist, but in ...

Quantitative Magnetic Resonance Imaging of Skeletal Muscle Disease

Количественный магнитно-резонансная томография скелетных мышечных заболеваний

Quantitative magnetic resonance imaging (qMRI) describes the development and use of MRI to quantify physical, chemical, and/or biological properties of ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Изучение рака поджелудочной железы стволовых клеток Характеристики для разработки новых стратегий лечения

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Calcification of Vascular Smooth Muscle Cells and Imaging of Aortic Calcification and Inflammation

Обызвествление сосудистых гладких мышечных клеток и визуализации аортальной кальцификации и Воспаление

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world.  Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and ...

Contractility Measurements of Human Uterine Smooth Muscle to Aid Drug Development

Сократительную способность измерения человеческого гладких мышц матки для разработки лекарственных средств помощи

Discovery and characterization of novel pharmaceutical compounds or biochemical probes rely on robust and physiologically relevant assay systems. We ...